【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，特别是涉及一种重组菌及其构建方法和在制备皂皮酸中的应用。
技术介绍
1、细胞色素p450氧化酶(以下简称p450)是一类被广泛用于细胞工厂的氧化酶，用于生产多种高价值化合物。来源自真核细胞的p450多为定位在内质网表达的膜蛋白。不同p450往往在内质网的不同的区域表达，这导致多步p450催化的反应中，不同p450之间催化的反应会出现底物逃逸的问题，从而降低目的产物的产量。传统的方式是通过蛋白质铰链将两个p450进行融合得到融合蛋白，或者通过对p450酶添加特定标签，让不同的p450形成复合体。但是这两种情况都需要对p450进行改造，这往往会导致酶的活性降低。因此需要一种可以帮助不同p450形成复合体又不需要对酶进行改造的方法，以减少不同p450之间的底物逃逸但并不影响酶的活性的方法。
2、现有技术在共定位不同p450的方法主要有两种。一种是将p450的信号肽进行截短，并使用特定蛋白质铰链将两个p450连接起来，形成融合蛋白。这种方法创造的融合蛋白往往结构较大，通常无法正常折叠表达。并且截短后的p450往往...
【技术保护点】
1.一种重组菌，其特征在于，所述重组菌中插入有msbp蛋白的编码序列。
2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，msbp蛋白的氨基酸序列选自如SEQ IDNo.1-SEQ ID No.4所示的序列中的一条。
3.根据权利要求1-2任一项所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌中还插入有目的产物合成途径的关键酶基因。
4.根据权利要求3所述的重组菌，其特征在于，所述目的产物为三萜类化合物，
5.一种重组菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，msbp蛋白的氨基酸序...
【技术特征摘要】
1.一种重组菌，其特征在于，所述重组菌中插入有msbp蛋白的编码序列。
2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，msbp蛋白的氨基酸序列选自如seq idno.1-seq id no.4所示的序列中的一条。
3.根据权利要求1-2任一项所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌中还插入有目的产物合成途径的关键酶基因。
4.根据权利要求3所述的重组菌，其特征在于，所述目的产物为三萜类化合物，
5.一种重组菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
6.根据权利要求5所述的构建方法，其特征在于，msbp蛋白的氨基酸序列如seq idno.1所示，所述构建携带有msbp蛋白表达模板的重组表达载体的步骤包括：以携带有msbp蛋白的植物的cdna为模板，采用序列如seq idno.5-seq id no.6所示的msbp1扩增引物对进行pcr反应，得到msbp1基因片段，将所述msbp1基因片段连接到pesc-ura质粒中，得到所述重组表达载体；
7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，所述将所述重组表达载体中msbp蛋白表达模块整合到产目的产物的酿酒酵母底盘菌株中，...
【专利技术属性】
技术研发人员：周豪宏，杨加增，
申请(专利权)人：中国科学院深圳先进技术研究院，
类型：发明
国别省市：
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