一种从荷叶中提取抗氧化活性物质的方法技术

本发明专利技术一种从荷叶中提取抗氧化活性物质的方法，属于天然产物提取领域。按照下述方法进行：（１）将荷叶在６０℃以下烘干、粉碎，过３０～５０目筛，制备得到荷叶粉；（２）在荷叶粉中加入浓度为４０～８０％的乙醇溶液进行提取，提取温度５０～８０℃，提取料液比为１∶１０～１∶２０，提取时间２０～６０ｍｉｎ，提取２～５次，提取液浓缩后采用蒸馏水超声溶解混悬液后上样ＡＢ－８型大孔吸附树脂柱纯化；（３）采用３～６倍柱床体积的蒸馏水洗脱，除去杂质；（４）采用３～５倍柱床体积的４０～８０％浓度的乙醇溶液洗脱，洗脱液经浓缩、冷冻干燥、粉碎、混合均匀后得到粉末状抗氧化活性物质。本发明专利技术工艺较为简单，设备等投资较小，为深入开发荷叶功能性食品、提高其附加值奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于天然产物提取领域，特别涉及。
技术介绍
荷叶为睡莲科植物莲(NelumbonuciferaGaertn.)的叶片，主产于江苏、浙江、湖南、 湖北、安徽和江西等地，资源十分丰富，产量巨大。荷叶除了含有碳水化合物、脂质、 蛋白质、单宁等常规化学成分外，还主要含有生物碱、多酚和黄酮三大类化合物，它在食 用和药用领域均有较广泛的应用。现代研究表明荷叶具有清除自由基、抗氧化、降脂减肥、抑菌、抗病毒、清热解暑等作用。《本草纲目》中就有荷叶服之，令人瘦劣，故单服可以消阴水浮肿之气的记载。《中国药典》2005版记载有清热解暑，升发清阳，凉血止血 的功效。1991年月11月被卫生部列入第二批既是食品又是药品名单。由于荷叶具有较好的 抗氧化、去脂减肥、降血压、抑菌等作用，而且来源广泛，价格低廉，是最有开发价值的 植物之一。目前我国种植莲藕的目的是为了收获根茎食用，荷叶的利用率则很低。每年仅百吨左 右应用于食品、医药生产作为中草药煎剂或其它保健品的辅料，剩余大部分荷叶都是作为 肥料烂在荷田里，没有得到有效的利用。国内外较多的研究结果及本实验室的研究证明均证明荷叶具有较强的抗氧化活性。目 前，国内外对与荷叶抗氧化活性有关；的专利技术专利申请仅见荷叶黄酮制备工艺或制备方法 (专利申请号200610069039.4; 200610085626.2; 02139048.7)及荷叶提取物的制备(专 利申请号200810018866.x; 200610053065.8; 200610141952.0; 200610141953.5)。但专 门针对荷叶中抗氧化活性物质的提取工艺未见任何相关专利和研究报道。大孔吸附树脂是 一类不含交换基团的高分子吸附材料，具有良好的大孔网状结构和较大的比表面积。由于 其具有简单易行、成本低、效率高、稳定性好和容易再生等特点，近年来被广泛应用于天 然产物的提取与分离工业生产中。本专利在实验室前期对不同极性种类的大孔吸附树脂筛 选结果的基础上采用AB-8作为分离纯化荷叶抗氧化活性物质的填料。采用AB-8进行分离、 纯化后获得荷叶抗氧化活性物质，该方法能对荷叶抗氧化活性进行大幅度提高，其三价铁 还原抗氧化能力测试(FRAP)值由荷叶原料的85.26mg/g提高到荷叶抗氧化活性物质的 3.53g/g,增加到原来的41.4倍；其总多酚含量从荷叶原料的24.58mg/g提高到荷叶抗氧化活 性物质的132.78mg/g，增加到原来的5.4倍。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种适合于产业化开发的从荷叶中提取抗氧化活性物质的低成本方法。本专利技术是通过以下技术方案来实现的，其提取方法的步骤如下-(D.将荷叶在6(TC以下烘干、粉碎，过30 50目筛，制备得到荷叶粉；(2) .在荷叶粉中加入浓度为40 80%的乙醇溶液进行振荡提取，提取温度为50 80 'C，提取料液比为l: 10 1: 20(w/v),提取时间20 60 min，重复浸提2 5次，提取液 浓縮后采用蒸馏水超声溶解混悬液后上样大孔吸附树脂柱纯化，采用动态上样方式，以 TLC (薄层层析)和三氯化铁溶液监测树脂是否吸附饱和；(3) .采用3 6倍柱床体积(BV)的蒸馏水洗脱，除去多糖、蛋白等水溶性杂质；(4) .采用3 5倍柱床体积(BV)的40~80%浓度的乙醇溶液洗脱，洗脱液经浓縮、冷冻 干燥、粉碎、混合均匀后得到抗氧化活性物质。 本专利技术的优点和有益效果是 .l.本专利技术采用价格低廉、来源广泛的荷叶为原料制备强抗氧化的活性物质；且工艺较为简单，设备等投资较小，容易放大，较适合于大规模产业化生产，为深入开发荷叶功能 性食品、提高其附加值奠定了基础。2.所制备的抗氧化活性物质产品适用于食品抗氧化剂、功能性食品和医药等行业的原料。附图说明图1为荷叶抗氧化活性物质提取、纯化工艺流程图。具体实施例方式本专利技术通过以下实施例进一步详述。 实施例一本专利技术所涉及的从荷叶中提取抗氧化活性物质的方法步骤如下(1) .将荷叶烘干、粉碎，过40目筛，形成荷叶粉；(2) .称取400g荷叶粉，采用l: 15(w/v)的料液比向该荷叶粉中加入6000mL浓度为60 %乙醇溶液，60 'C振荡提取时间30min,重复浸提3次，提取液合并后釆用大孔吸附树脂 AB-8动态上样进行纯化；以TLC (薄层层析)和三氯化铁溶液监测柱子流出液，至开始有 泄漏时停止上样；(3) .采用6倍柱床体积的蒸馏水洗脱，充分洗净多糖、蛋白等大量水溶性杂质；(4) .釆用60X的乙醇溶液洗脱至TLC和三氯化铁溶液监测树脂洗脱液中没有抗氧化活 性物质流出为止，洗脱液合并、浓縮、冷冻干燥，粉碎并混合均匀后得到荷叶抗氧化活性 物质产品28.90 g。将此粉末产品用无水乙醇配制成50、 100和150ng/mL溶液，以相同浓度的BHT (2, 4二叔丁基甲基苯酚)、槲皮素和银杏叶提取物(GBE)为阳性对照采用测定总还原力、FRAP 法抗氧化能力和清除DPPH自由基测试各样品的抗氧化能力，其结果如表l、 2、 3所示。表1样品FRAP法抗氧化能力测定结果<table>table see original document page 5</column></row><table>表2样品总还原力测定结果<table>table see original document page 5</column></row><table>表3样品DPPH自由基清除率测定结果<table>table see original document page 5</column></row><table>表格中同一行不同字母表示相同浓度的不同样品具有不同水平的显著性差异由表l、 2、 3可以看出，采用实施例一中的提取、分离和纯化工艺经AB-8纯化后的 荷叶抗氧化活性物质具有很强的抗氧化活性，其抗氧化能力(OD593值和DPPH自由基清 除率)尽管比相同浓度的阳性对照Vc弱(PO.001或PO.Ol),但在50-150ng/mL浓度范 围内均显著性高于另外两个阳性对照BHT和银杏叶提取物(PO.001或PO.01)。在总还 原力的测定结果中，荷叶抗氧化活性物质的还原能力尽管低于BHT和Vc，但仍显著性高 于阳性对照银杏叶提取物(PO.01或PO.OOl)。实施例二(1) .将荷叶烘干、粉碎，过30目筛，形成荷叶粉；(2) .称取200 g荷叶粉，釆用l: IO的料液比(w/v)向该荷叶粉中加入2000 mL浓度为 70%乙醇溶液，70 'C振荡提取时间40min，重复浸提3次，提取液合并后采用大孔吸附树 脂AB-8动态上样进行纯化；以TLC (薄层层析)和三氯化铁溶液监测柱子流出液，至开始 有泄漏时停止上样；(3) .釆用3倍柱床体积的蒸馏水洗脱，洗去多糖、蛋白等水溶性杂质；(4) .采用70X的乙醇溶液洗脱至TLC和三氯化铁溶液监测树脂洗脱液中没有抗氧化活 性物质流出为止，洗脱液合并、浓縮、冷冻干燥，粉碎并混合均匀后得到荷叶抗氧化活性 物质产品15.55 g。将此粉末产品用无水乙醇配制本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从荷叶中提取抗氧化活性物质的方法，其特征在于按照下述方法进行：　（１）．将荷叶在６０℃以下烘干、粉碎，过３０～５０目筛，制备得到荷叶粉；　（２）．在荷叶粉中加入浓度为４０～８０％的乙醇溶液进行振荡提取，提取温度为５０～８０℃ ，提取料液比以质量与体积之比计为１∶１０～１∶２０，提取时间２０～６０ｍｉｎ，重复浸提２～５次，提取液浓缩后采用蒸馏水超声溶解混悬液后上样大孔吸附树脂柱纯化，采用动态上样方式，以薄层层析和三氯化铁溶液监测树脂是否吸附饱和；　（３）．采 用３～６倍柱床体积的蒸馏水洗脱，除去多糖、蛋白等水溶性杂质；　（４）．采用３～５倍柱床体积的４０～８０％浓度的乙醇溶液洗脱，洗脱液经浓缩、冷冻干燥、粉碎、混合均匀后得到粉末状抗氧化活性物质。

【技术特征摘要】
1、一种从荷叶中提取抗氧化活性物质的方法，其特征在于按照下述方法进行(1).将荷叶在60℃以下烘干、粉碎，过30～50目筛，制备得到荷叶粉；(2).在荷叶粉中加入浓度为40～80％的乙醇溶液进行振荡提取，提取温度为50～80℃，提取料液比以质量与体积之比计为1∶10～1∶20，提取时间20～60min，重复浸提2～5次，提取液浓缩后采用蒸馏水超声溶解混悬液后上样大孔吸附树脂柱纯化...

【专利技术属性】
技术研发人员：江慎华，马海乐，蔡健荣，王振斌，任晓锋，何荣海，骆琳，吴士云，
申请(专利权)人：江苏大学，
类型：发明
国别省市：32[中国|江苏]