一种速效的农杆菌介导的鸢尾花粉遗传转化方法技术

本发明专利技术属于农业生物技术领域和植物基因工程领域，公开了一种速效的农杆菌介导的鸢尾花粉遗传转化方法。该方法的主要步骤包括：选取茎干健壮、叶片无病虫害、花朵饱满未完全绽放的植株，于早上9点对其进行去雄，套袋；调整含有目标载体的工程农杆菌菌液至适当浓度，离心收集菌株，使用MSS重悬液重悬菌株，室温静止3h；收集花朵刚绽放花药未炸开时的花粉，将花粉转移至去雄花朵的柱头上，使用1ml注射器注射农杆菌MSS重悬液至含有花粉的柱头，用手指轻轻摩挲柱头，使花药充分浸泡在重悬液中，套密封遮光袋静置30min；授粉8h后，使用注射器吸取重悬液注射花粉管，使用密封遮光袋避光3d，然后去除遮光袋，使用授粉袋套袋，支架绑在处理植株上，避免倒伏；秋天收取种子后，使用MH液体培养基进行筛选培养，进行转基因植株鉴定。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于农业生物和植物基因工程领域，具体涉及一种农杆菌介导的鸢尾花粉转化方法。

技术介绍

1、鸢尾是鸢尾科鸢尾属的多年生草本植物，多分布于我国黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古及云南地区，具有极高的耐寒性。鸢尾花主要色彩为蓝紫色，有“蓝色妖姬”的美誉，因其花瓣形如鸢鸟尾巴而得名。鸢尾花叶片碧绿青翠，花形大而奇，宛若翩翩彩蝶，是庭院中的重要花卉之一，也是优美的盆花、切花和花坛用花。其花色丰富、花型奇特是花坛及庭院绿化的良好材料，也可用作地被植物，有些种类甚至为优良的鲜切花材料。随着生活水平和审美的提高，人们对鸢尾花品质改良的需求也越来越紧迫，传统鸢尾花杂交育种周期长、见效慢，严重影响了鸢尾花新品种的培育。目前，采用基因工程技术获得新品种是最高效的育种方式之一，但国内外对于鸢尾花的转基因技术报道极为缺少，尚未发表鸢尾花粉转基因研究的文章。

2、1983年，中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所周光宇教授首次成功地将外源海岛棉dna导入陆地棉，培育出抗枯萎病的栽培品种，创立了花粉管通道法，但未能得到分子水平上的验证和明确的基因表达产物，使这一方本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种速效的农杆菌介导的鸢尾花粉遗传转化方法，包含以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，所述的生物工程菌为农杆菌GV3101，目标载体为携带溪荪转录因子IsMYB75及筛选报告基因GFP的植物表达载体pCAMBIA1300-GFP。

3.根据权利要求2所述的方法，所述转基因植株鉴定方法为qPCR和PCR分析，筛选有PCR扩增阳性的鸢尾花植株。

4.根据权利要求1所述的方法，所述的鸢尾花品种为野生型玉蝉花。

【技术特征摘要】

1.一种速效的农杆菌介导的鸢尾花粉遗传转化方法，包含以下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，所述的生物工程菌为农杆菌gv3101，目标载体为携带溪荪转录因子ismyb75及筛选报告基因gfp的植物表达载体pcam...

【专利技术属性】
技术研发人员：王玲，刘会君，尹守东，范丽娟，史恭发，
申请(专利权)人：东北林业大学，
类型：发明
国别省市：