一种sRNA结合茎尖超低温疗法脱除啤酒花矮化类病毒的方法技术

本发明专利技术公开了一种sRNA结合茎尖超低温疗法脱除啤酒花矮化类病毒的方法，属于脱毒良种生产技术领域。所述sRNA包括如SEQ ID NO：5所示的正义链和SEQ ID NO：6所述的反义链。所述方法包括以下步骤：用sRNA处理感染啤酒花矮化类病毒的番茄茎，得到啤酒花矮化类病毒被抑制的样本；将类病毒被抑制的样本进行消毒处理后获取茎尖，再将所述茎尖进行预培养和加载；加载后的所述茎尖用冷冻保护液PVS2处理，之后进行超低温处理、卸载和后培养，得到脱毒样本。该方法能够脱除一般在植物上无法脱除的类病毒，且无需较长时间的类病毒低温钝化处理，本发明专利技术适用于在番茄上快速地获得除啤酒花矮化类病毒的脱毒苗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及脱毒良种生产，特别是涉及一种srna结合茎尖超低温疗法脱除啤酒花矮化类病毒的方法。

技术介绍

1、番茄是世界上种植和消费最广泛的蔬菜之一。番茄稳定和安全的商业生产正在受到类病毒感染的威胁。类病毒是一类单链闭合rna分子，其基因组约为240-430bp。它们是已知最小的专门寄生病原体。类病毒是重要的检疫性病害和种传病原体，番茄感染类病毒后会引起类似病毒的症状，以及宿主营养和生殖生长障碍。另外，作为全球检疫性病害，携带类病毒的种子和幼苗种质资源流通受限。开发有效的抑制和类病毒消除技术具有重要意义。然而，因大多数病毒病害不通过种子传播，且脱除种传病毒和类病毒难度较高，脱毒技术常应用于营养繁殖作物上，因此，在种繁作物中的开发类病毒脱毒技术往往被忽视。

2、20-23nt长的srna参与所有有机体的转录后基因表达调控，并在各种重要的生理过程中发挥关键作用。srna启动靶向性的rna干扰，并在约20nt长的rna中被dicer蛋白识别和切割。双链体的一条链被装载到核糖核酸蛋白复合物中，称为rna诱导沉默复合物，由至少一种argonaute蛋白本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于钝化番茄中啤酒花矮化类病毒的靶向性sRNA，其特征在于，所述sRNA包括如SEQ ID NO：5所示的正义链和SEQ ID NO：6所述的反义链。

2.一种采用权利要求1所述的sRNA结合茎尖超低温疗法脱除番茄中啤酒花矮化类病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述类病毒被抑制的样本是将带顶芽或腋芽的番茄茎基部浸入20-30μM sRNA溶液中，室温光照培养36h得到。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述茎尖为含有3-4个叶原基和顶端分生组织的茎尖，长度为1.8-2.0mm。

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【技术特征摘要】

1.一种用于钝化番茄中啤酒花矮化类病毒的靶向性srna，其特征在于，所述srna包括如seq id no：5所示的正义链和seq id no：6所述的反义链。

2.一种采用权利要求1所述的srna结合茎尖超低温疗法脱除番茄中啤酒花矮化类病毒的方法，其特征在于，包括以下步骤：

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述类病毒被抑制的样本是将带顶芽或腋芽的番茄茎基部浸入20-30μm srna溶液中，室温光照培养36h得到。

4.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述茎尖为含有3-4个叶原基和顶端分生组织的茎尖，长度为1.8-2.0mm。

5.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述预培养的条件为：利用含有0.4m蔗糖的ms液体培养基，于22-28℃黑暗预培养16h。

6.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述加载的条件为：将预培养后的茎...

【专利技术属性】
技术研发人员：李经纬，张万萍，唐文琨，徐秀红，裴芸，
申请(专利权)人：贵州大学，
类型：发明
国别省市：