松材线虫胚胎干细胞的培养方法技术

本发明专利技术属于细胞培养技术领域，特别涉及一种松材线虫胚胎干细胞的培养方法。所述方法包括如下步骤：S1、无菌松材线虫虫卵的获取；S2、细胞悬液制备：在步骤S1所得虫卵中加入几丁质酶和细胞培养液，离心去上清，加入胰酶消化处理，获得细胞悬液；S3、虫卵细胞的原代培养：28℃普通培养箱中静置培养，定期更换细胞培养液，获得虫卵细胞群；S4、虫卵细胞的传代培养：弃去原代细胞培养液，加入胰蛋白酶消化液室温消化，加细胞培养液培养至细胞贴满瓶底；所述细胞培养液为95％‑98％(V/V)Egg buffer和2％‑5％(V/V)胎牛血清的混合液，细胞培养液pH为6.9‑7.3，渗透压为340mOsm。本申请成功建立了松材线虫胚胎干细胞培养体系，且具有较强的增殖能力和较长的成活时间。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞培养，特别涉及一种松材线虫胚胎干细胞的培养方法。

技术介绍

1、近年来，细胞培养技术已被广泛应用于动物、植物、微生物的细胞体外培养上，因其具有培养简单、易操作、费用低、可大量应用的优点，被广泛应用于生理学、病理学、分子遗传学、毒理学、内分泌学、发育学等领域。如中国专利文献cn 101423817a公开的一种用昆虫卵建立细胞系的方法，步骤如下：(1)将昆虫受精卵片消毒；(2)处理后的卵粒倒入昆虫细胞培养液中，逐一挤压卵粒释放出胚胎，细胞培养液是昆虫细胞培养液与青霉素、链霉素和胎牛血清的混合物；(3)将胚胎剪碎成组织块放入培养箱中培养；(4)加入细胞培养液继续培养；(5)定时更换培养液，直至增殖的细胞充满整培养瓶；(6)吸出半量的细胞培养液，其中含有新增殖出的单个细胞，放入新培养瓶中并加入等量的新细胞培养液，继续放回培养箱中培养。

2、松材线虫(bursaphelenchusxylophilus)具有分布广、适应强、生长发育快、耐胁迫等特点，为一种对我国林业造成巨大经济损失的森林病虫害。建立松材线虫培养体系，将促进对松材线虫的研究本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.松材线虫胚胎干细胞的培养方法，其特征在于，步骤如下：

2.如权利要求1所述的松材线虫胚胎干细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤S1包括虫卵收集步骤和虫卵灭菌步骤；

3.如权利要求1所述的松材线虫胚胎干细胞的培养方法，其特征在于，所述Egg buffer的配方为：50mL单蒸水，0.34gNaCl，0.18g KCl，0.01g CaCl2，0.01g MgCl2，0.30g HEPES，pH7.3，渗透压为340mOsm。

【技术特征摘要】

1.松材线虫胚胎干细胞的培养方法，其特征在于，步骤如下：

2.如权利要求1所述的松材线虫胚胎干细胞的培养方法，其特征在于，所述步骤s1包括虫卵收集步骤和虫卵灭菌步骤；

3.如权利要求1所述的松材线虫胚胎干...

【专利技术属性】
技术研发人员：宋娟，王靖涵，闵莉静，张立钦，胡加付，翁思米，张姚铖，李阳，张绍勇，
申请(专利权)人：湖州师范学院，
类型：发明
国别省市：