【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及，具体为一种基于血清素及代谢状态的rif患者子宫内膜容受性评估方法。
技术介绍
1、胚胎植入涉及正常发育的胚胎与具有容受性的子宫内膜之间的相互作用，在植入窗口期，胚胎经历接近并附着于子宫内膜上皮，并诱导子宫内膜间质细胞细胞分化为蜕膜细胞，从而允许滋养层侵入。尽管辅助生殖技术(art)的发展使得许多不孕患者能够受孕，但即使胚胎质量良好，胚胎植入的失败率约为50％，这表明揭示影响子宫内膜容受性受损机制的重要性。
2、其中反复植入失败(rif)被定义为至少进行四次良好质量的胚胎移植在至少三个新鲜或冷冻胚胎移植周期后未能怀孕。全球范围内大约有10％的接受体外受精和胚胎移植(ivf-et)治疗的不孕患者受到rif的影响，先前的研究表明，在经历art失败的患者中存在增加的焦虑和抑郁，有辅助生殖失败经历的患者存在较高水平的心理压力，这暗示了心理压力可能是rif患者不孕的潜在机制。
3、而多项研究表明，高水平的心理压力与不孕风险增加相关，焦虑或抑郁的女性在ivf-et后具有较低的怀孕率和活产率，过大心理压力可能会影响母体激素调节，这对子宫内膜功能的调节至关重要。焦虑和抑郁与神经递质的异常水平相关，这些分子的受体在人类子宫内膜中也广泛分布，目前研究已发现儿茶酚胺类神经递质(如肾上腺素)的异常水平导致子宫蜕膜化受损。而包括焦虑、抑郁和压力在内的精神障碍与神经递质的异常水平相关，选择性血清素再摄取抑制剂(ssri)通过增加突触血清素的水平来缓解焦虑，但过度的血清素也似乎会导致焦虑。然而，有较少的证据表明血清素的稳
4、目前现有技术中缺少一种证明5-羟色胺影响rif患者子宫内膜血清素含量的验证方法，因此难以判断5-羟色胺是否影响rif患者子宫内膜的血清素含量。
技术实现思路
1、针对现有技术不足，本专利技术提供了一种基于血清素及代谢状态的rif患者子宫内膜容受性评估方法，为解决现有技术中缺少一种基于血清素及代谢状态的rif患者子宫内膜容受性评估方法的问题。
2、为达到上述目的，本专利技术提供了一种基于血清素及代谢状态的rif患者子宫内膜容受性评估方法，包含以下步骤：
3、s1、将月经周期处于分泌中期的rif患者的子宫内膜组织进行活检得到第一活检样本，将月经周期处于分泌中期的正常患者的子宫内膜组织进行活检得到第二活检样本；
4、s2、基于s1流程，通过预冷的pbs缓冲液对第一活检样本和第二活检样本进行冲洗，通过吸水纸吸取第一活检样本和第二活检样本的表面水分以及粘液；
5、s3、基于s2流程，将第一活检样本和第二活检样本分别置入组织研磨机中，在组织研磨机中加入裂解液，组织研磨机以低温研磨环境进行组织粉碎，第一活检样本经组织研磨机研磨后得到第一研磨样本，第二活检样本经组织研磨机研磨后得到第二研磨样本，第一研磨样本经离心机离心后舍弃沉淀物并收集得到第一上清液，第二研磨样本经离心机离心后舍弃沉淀物并收集得到第二上清液；
6、s4、基于s3流程，通过包被缓冲液稀释血清素抗体进行制备形成包被溶液，将包被溶液分别灌注至细胞培养板的不同孔位中，每个孔位均灌注有100μl的包被溶液，将细胞培养板于2-8℃的温度下孵育12-18小时，将孵育后的细胞培养板通过洗涤缓冲液进行洗涤和清洁，将洗涤后的细胞培养板的每个孔位中均200μl的灌注第一封闭缓冲液并封闭1小时，将封闭后的细胞培养板进行多余液体抽吸和清楚残余液体；
7、s5、基于s4流程，将第二封闭缓冲液灌注进标准1.5ml eppendorf管组中，在标准1.5ml eppendorf管组中加入血清素粉末并制备成100μl的标准品溶液，将标准品溶液、第一上清液和第二上清液分别加入细胞培养板的不同孔位中，将细胞培养板置入孔板振荡器中并于室温下摇动，将摇动后的细胞培养板的每个孔位中的多余液体进行抽吸并加入洗涤缓冲液进行洗涤；
8、s6、基于s5流程，在细胞培养板板的每个孔位中均加入100μl的检测抗体溶液，将细胞培养板置入孔板振动器中并于室温下摇动，将摇动后的细胞培养板的每个孔位中均加入洗涤缓冲液进行洗涤，在洗涤后的细胞培养板的每个孔位中均加入100μl链霉亲和素-辣根过氧化物酶工作液，将细胞培养板置入孔板振动器中并在室温下摇动，将摇动后的细胞培养板的每个孔位中均加入洗涤缓冲液进行洗涤，在洗涤后的细胞培养板的每个孔位中均加入100μltmb底物溶液并在室温下孵育30分钟；
9、s7、基于s6流程，在细胞培养板的每个孔位中均加入100μl终止液，将细胞培养板置入分光光度计中对细胞培养板的每个孔位进行吸光度测量，含有标准品溶液的孔位经分光光度计测量得到标准对比数据，含有第一上清液的孔位经分光光度计测量得到第一对比数据，含有第二上清液的孔位经分光光度计测量得到第二对比数据；
10、s8、基于s7流程，将标准对比数据、第一对比数据和第二对比数据经对比-对比计算方法得出第一计算结果；
11、s9、将月经周期处于分泌中期的rif患者的子宫内膜组织进行活检得到第三活检样本，将月经周期处于分泌中期的正常患者的子宫内膜组织进行活检得到第四活检样本；
12、s10、基于s9流程，将第三活检样本通过单细胞rna检测方法进行数据分析并得到第一分析数据，将第四活检样本通过单细胞rna检测方法进行数据分析并得到第二分析数据，将第一分析数据和第二分析数据均使用scmetabolism代谢分析软件包进行与血清素相关的代谢途径分析得出第三分析数据，通过scfea血清素相关代谢分析模组对第三分析数据进行修改并得出第二计算结果。
13、本专利技术进一步设置：基于s1流程，所述第一活检样本和第二活检样本取样重量均为50mg。
14、本专利技术进一步设置：基于s3流程，所述裂解液中添加有单胺氧化酶不可逆性抑制剂。
15、本专利技术进一步设置：基于s5流程，所述标准培养瓶组包括若干标准培养瓶，每个所述标准培养瓶中的血清素粉末浓度均不同设置。
16、采用上述技术方案有益的是：上述测验方法具体流程包括：将月经周期处于分泌中期的rif患者的子宫内膜组织进行活检得到第一活检样本，将月经周期处于分泌中期的正常患者的子宫内膜组织进行活检得到第二活检样本，通过预冷的pbs缓冲液(0.01m,ph＝7.4)对第一活检样本和第二活检样本进行冲洗，去除残留血液，通过吸水纸吸取第一活检样本和第二活检样本的表面水分以及粘液，其中第一活检样本和第二活检样本取样重量均为50mg，使得组织需求量降低，以此减轻病人损伤；
17、而后将第一活检样本和第二活检样本分别置入组织研磨机中，在组织研磨机中加入裂解液(25mm tris-hcl(ph 7.6),150mm nacl,1％np-40,200ul 1％去氧胆酸钠,0.1％十二烷基硫酸钠(sds),11.5μm tranylcypromine(2-pcpa)hcl)，其中裂解液本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种基于血清素及代谢状态的RIF患者子宫内膜容受性评估方法，其特征在于：包含以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种基于血清素及代谢状态的RIF患者子宫内膜容受性评估方法，其特征在于：基于S1流程，所述第一活检样本和第二活检样本取样重量均为50mg。
3.根据权利要求1所述的一种基于血清素及代谢状态的RIF患者子宫内膜容受性评估方法，其特征在于：基于S3流程，所述裂解液中添加有单胺氧化酶不可逆性抑制剂。
4.根据权利要求1所述的一种基于血清素及代谢状态的RIF患者子宫内膜容受性评估方法，其特征在于：基于S5流程，所述标准Eppendorf管组包括若干标准Eppendorf管，每个所述标准Eppendorf管中的血清素粉末浓度均不同设置。
【技术特征摘要】
1.一种基于血清素及代谢状态的rif患者子宫内膜容受性评估方法，其特征在于：包含以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种基于血清素及代谢状态的rif患者子宫内膜容受性评估方法，其特征在于：基于s1流程，所述第一活检样本和第二活检样本取样重量均为50mg。
3.根据权利要求1所述的一种基于血清素及代谢状态的rif患者子...
【专利技术属性】
技术研发人员：盛小强，天骄，杨嫣君，
申请(专利权)人：温州医科大学附属第二医院温州医科大学附属育英儿童医院，
类型：发明
国别省市：
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