一种检测末端脱氧核糖核酸转移酶的单链探针及应用制造技术

本发明专利技术提供了公开了一种检测末端脱氧核糖核酸转移酶的单链探针及其应用；所述单链探针的序列如SEQ ID NO：1所示，且所述单链探针标记有荧光基团FAM和淬灭基团BHQ。本发明专利技术将所述单链探针联合CRISPR‑Cas12a系统应用于TdT的检测中，通过TdT触发的报告基因ssDNA的无模板延伸，使得其与crRNA结合产生长poly‑A扩增子，从而激活CRISPR/Cas12a的顺式和反式切割能力；与现有技术相比，可以最大程度地简化反应系统的组成，简化检测方法的操作步骤，同时，还能够利用CRISPR‑Cas12a系统的顺式切割和反式切割活性放大荧光信号的指数，实现TdT的超灵敏检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物分子检测，具体涉及一种检测末端脱氧核糖核酸转移酶的单链探针及应用。

技术介绍

1、末端脱氧核苷酸转移酶(terminal deoxyribonucleotidyl transferase，tdt，简称末端转移酶)是一种模板非依赖型dna聚合酶，具有不需要模板就能催化脱氧核糖核苷酸聚合的能力。于1960年由bollum从小牛胸腺中纯化得到，其意义在于与淋巴肿瘤的分类相关，因为它主要在胸腺t细胞和骨髓中一小部分ig阴性细胞中表达，这种独特的表达模式表明，tdt有可能作为白血病疾病的一种有价值的生物标志物。此外，tdt还是一种具有从零开始产生基因组物质特性的dna聚合酶，这一特性导致其广泛应用于检测各种目标分析物(包括核酸、蛋白质和金属离子)的生物传感器的开发中。鉴于tdt在病理功能和生物传感器应用中的重要性，开发确定tdt活性的有效方法非常重要。这些方法可以进一步推进对tdt潜在功能的研究和开发，并有助于生物化学和生物医学分析中生物传感器的发展。

2、目前，可用于tdt分析的标准方法包括凝胶电泳分析法、免疫学测定法等。凝胶电泳分析本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种检测末端脱氧核糖核酸转移酶的单链探针，其特征在于，所述单链探针的序列如SEQ ID NO：1所示，且所述单链探针标记有荧光基团FAM和淬灭基团BHQ。

2.如权利要求1所述的检测末端脱氧核糖核酸转移酶的单链探针在TdT的荧光检测中的应用。

3.一种一锅法检测末端脱氧核糖核酸转移酶的方法，其特征在于，包括如权利要求1所述的单链探针和含有TdT的待测样本混合后进行荧光检测。

4.根据权利要求3所述的一锅法检测末端脱氧核糖核酸转移酶的方法，其特征在于，包括使用基于crRNA和CRISPR/Cas12a系统进行的等温扩增反应实现TdT的检测；

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【技术特征摘要】

1.一种检测末端脱氧核糖核酸转移酶的单链探针，其特征在于，所述单链探针的序列如seq id no：1所示，且所述单链探针标记有荧光基团fam和淬灭基团bhq。

2.如权利要求1所述的检测末端脱氧核糖核酸转移酶的单链探针在tdt的荧光检测中的应用。

3.一种一锅法检测末端脱氧核糖核酸转移酶的方法，其特征在于，包括如权利要求1所述的单链探针和含有tdt的待测样本混合后进行荧光检测。

4.根据权利要求3所述的一锅法检测末端脱氧核糖核酸转移酶的方法，其特征在于，包括使用基于crrna和crispr/cas12a系统进行的等温扩增反应实现tdt的检测；

5.根据权利要求3所述的一锅法检测末端脱氧核糖核酸转移酶的方法，其特征在于，包括将单链探针、neb缓冲液1、tdt缓冲液、crrna、datp和cas12a蛋白混合后进行孵育后进行荧光...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐建国，眭珠琦，郭隆华，董海燕，彭育勃，杨海东，
申请(专利权)人：嘉兴学院，
类型：发明
国别省市：