一种基于酪胺信号放大技术的足细胞免疫荧光染色方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种基于酪胺信号放大技术的足细胞免疫荧光染色方法及其应用，涉及组织荧光染色技术领域。本发明专利技术的免疫荧光染色方法包括如下步骤：对肾组织石蜡切片进行脱蜡、水化后，使用高压热修复处理组织切片后室温冷却，分别进行过氧化氢和山羊血清封闭；依次用一抗、带有辣根过氧化酶二抗、带有荧光素标记的酪胺分子孵育封闭处理后的切片，封片保存。本发明专利技术利用酪胺信号放大的组织荧光染色切片可于受激发射损耗显微镜拍摄和成像，对足细胞的亚细胞结构形态学参数进行评估，可以实现对足细胞解剖学特征的信号均一的免疫染色和荧光信号放大。在不同疾病状态下，还能显示足细胞三级解剖学结构的变化，为足细胞三维形态学研究提供了新的技术手段。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于组织荧光染色，具体为一种基于酪胺信号放大技术的足细胞免疫荧光染色及其应用。

技术介绍

1、肾小球滤过屏障由三个主要组成部分组成：内皮细胞、基底膜和足细胞。其中足细胞是覆盖在肾小球滤过屏障基底膜上的细胞，对于维持滤过屏障的完整性和选择性起到了关键作用。多种疾病包括原发性肾小球肾炎、糖尿病肾病、高血压肾病等继发性肾小球肾病等可以引起足细胞的损伤或异常改变，使其无法有效地阻止蛋白质的丢失，进而导致蛋白尿的发生。

2、在肾小球疾病中，足细胞通过形状的巨大变化应对各种压力和损伤。其中足突融合（foot process effacement）是最突出和最常见的病理损伤模式。通过传统的扫描电镜（sem）和透射电镜（tem）可观察到足细胞失去了相邻足细胞之间通常的相互指状交叉模式的足突（interdigitating pattern of foot processes），足细胞的初级突起和次级突起发生回缩和增粗；在严重状态下，足突回缩到初级足细胞突起中，导致覆盖基底膜的宽扁平盘状突起，最终与细胞体合并；进一步进展足细胞的胞体脱离原来位置，从“漂浮本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于酪胺信号放大技术的足细胞免疫荧光染色方法，其特征在于，包括如下步骤：对肾组织石蜡切片进行脱蜡、水化后，使用高压热修复处理组织切片5~15min后室温冷却，分别进行过氧化氢和山羊血清封闭；依次用一抗、酶标二抗、荧光素酪胺孵育封闭处理后的切片，封片保存。

2.根据权利要求1所述的足细胞免疫荧光染色方法，其特征在于，所述高压热修复的缓冲液为pH9.0的EDTA；所述修复时间为5~15min。

3.根据权利要求1所述的免疫荧光染色方法，其特征在于，所述过氧化氢浓度为1~5%。

4.根据权利要求1所述的足细胞免疫荧光染色方法，其特征在于，所述一抗为兔...

【技术特征摘要】

1.一种基于酪胺信号放大技术的足细胞免疫荧光染色方法，其特征在于，包括如下步骤：对肾组织石蜡切片进行脱蜡、水化后，使用高压热修复处理组织切片5~15min后室温冷却，分别进行过氧化氢和山羊血清封闭；依次用一抗、酶标二抗、荧光素酪胺孵育封闭处理后的切片，封片保存。

2.根据权利要求1所述的足细胞免疫荧光染色方法，其特征在于，所述高压热修复的缓冲液为ph9.0的edta；所述修复时间为5~15min。

3.根据权利要求1所述的免疫荧光染色方法，其特征在于，所述过氧化氢浓度为1~5%。

4.根据权利要求1所述的足细胞免疫荧光染色方法，其特征在于，所述一抗为兔抗人血管生成素样蛋白4抗体，所述酶标二抗为hrp-羊抗兔抗体。

5.根据权利要求1所述的足细胞免疫荧光染色方法，其特征在于，所述荧光素酪胺使用量为每样本滴...

【专利技术属性】
技术研发人员：李文歌，刘晓静，
申请(专利权)人：中日友好医院中日友好临床医学研究所，
类型：发明
国别省市：