【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种生产二岩藻糖基乳糖的重组大肠杆菌，属于微生物基因工程和生物合成领域。
技术介绍
1、母乳低聚糖(hmos)是母乳中第三大固体成分，其对婴幼儿有多种有益影响。2′-岩藻糖基乳糖(2′-fl)、3-岩藻糖基乳糖(3-fl)、二岩藻糖基乳糖(dfl)和乳糖-n-一型岩藻五糖(lnfp i)是具有代表性的岩藻糖基型hmos。最新研究表明，dfl和2′-fl是最具有选择性利用的碳水化合物，其次是3-fl。hmo的选择性能够促进有益微生物的繁殖和生长，同时抑制有害病原体的存活和增殖，从而有助于婴儿肠道微生物群的健康发展。2′-fl/dfl已在欧洲被批准为新型食品，在美国被普遍认为是安全的(gras)(grn no.815)。
2、目前，微生物合成hmo已成为一种主流方法。通常，合成dfl的第一步是通过α1,2-岩藻糖基转移酶或α1,3-岩藻糖基转移酶将乳糖岩藻糖基化，随后2′-fl或3-fl被用作受体来岩藻糖基化生产dfl。在这些路径中，gdp-岩藻糖是两步连续岩藻糖基化反应的关键供体。gdp-岩藻糖的生物合成可以由两...
【技术保护点】
1.一种生产二岩藻糖基乳糖的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌为，敲除了大肠杆菌基因组上的β-半乳糖苷酶基因lacZ和UDP-葡萄糖脂质载体转移酶基因wcaJ，并利用强组成型启动子PJ23119启动基因组上manC-manB基因簇和gmd-wcaG基因簇的表达，同时，游离表达了大肠杆菌BL21(DE3)内源的磷酸甘露糖酶基因manB、甘露糖1-鸟苷酸转移酶基因manC、GDP-D-甘露糖-4,6-脱水酶基因gmd和GDP-岩藻糖合成酶基因wcaG，游离表达了来源于幽门螺杆菌UA948的α1,3/4-岩藻糖基转移酶基因HP3/4FT，同时游离表达了来源于幽门螺杆...
【技术特征摘要】
1.一种生产二岩藻糖基乳糖的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌为，敲除了大肠杆菌基因组上的β-半乳糖苷酶基因lacz和udp-葡萄糖脂质载体转移酶基因wcaj，并利用强组成型启动子pj23119启动基因组上manc-manb基因簇和gmd-wcag基因簇的表达，同时，游离表达了大肠杆菌bl21(de3)内源的磷酸甘露糖酶基因manb、甘露糖1-鸟苷酸转移酶基因manc、gdp-d-甘露糖-4,6-脱水酶基因gmd和gdp-岩藻糖合成酶基因wcag，游离表达了来源于幽门螺杆菌ua948的α1,3/4-岩藻糖基转移酶基因hp3/4ft，同时游离表达了来源于幽门螺杆菌ua802的α1,2-岩藻糖基转移酶基因fuct2或来源于大肠杆菌o126的α1,2-岩藻糖基转移酶基因wbgl。
2.根据权利要求1所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述α1,3/4-岩藻糖基转移酶基因的hp3/4ft核苷酸序列如seq id no.1所示，所述α1,2-岩藻糖基转移酶基因fuct2的核苷酸序列如seq id no.2所示，所述α1,2-岩藻糖基转移酶基因wbgl的核苷酸序列如seq idno.3所示，所述β-半乳糖苷酶编码基因lacz的genbank号为np_414878.1，udp-葡萄糖脂质载体转移酶编码基因wcaj的genbank号为np_416551.1，所述磷酸甘露糖酶编码基因manb的genbank号为np_416552.1；所述甘露糖1-鸟苷酸转移酶编码基因manc的genbank号为np_416553.1；所述gdp-d-甘露糖-4,6-脱水酶编码基因gmd的genbank号为np_416557.1；所述gdp-岩藻糖合成酶编码基因wcag的genbank号为np_416556.1。
3.根据权利要求2所述的重组大肠杆菌，其特征在于，所述重组大肠杆菌是利用prsfduet-1载体游离表达磷酸甘露糖酶、甘露糖1-鸟苷酸转移酶、gdp-d-甘露糖-4,6-脱水酶和gdp-岩藻糖合成酶；利用petduet-1载体游离表达...
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