【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
技术介绍
1、通常需要多个独立的测定来评价细胞的代谢适能(metabolic fitness)，其包括糖酵解谱和线粒体谱。来自使用细胞外酸化速率(ecar)输出的单一测定的谱分析既不是定量的，也并非专用于糖酵解。此外，幼稚t细胞(和其他t细胞)对某些线粒体解偶联剂的应答并不稳健。因此，需要开发从单一测定定量地确定完整的生物能谱(包括生物能平衡(bioenergetic poise)和生物能能力(bioenergetic capacity)两者)的新的方法和系统。
技术实现思路
1、在一方面，本公开文本提供了一种评价细胞样品的生物能平衡和生物能能力的方法。所述方法包括：获取耗氧量的参考值(vocref)；获取质子流出的参考值(vperef)；使所述细胞样品依序、部分同时或同时与atp合酶抑制剂、线粒体解偶联剂和电子传递链(etc)抑制剂接触，每次接触形成反应混合物；获取每种反应混合物的耗氧量的值(vocmix)；以及获取每种反应混合物的质子流出的值(vpemix)，从而评价所述细胞样品的生物能平衡和生物能能力。
2、在实施方案中，在使所述atp合酶抑制剂与所述细胞样品接触后获取反应混合物的耗氧量的值和质子流出的值。在实施方案中，在使所述线粒体解偶联剂与所述细胞样品接触后获取反应混合物的耗氧量的值和质子流出的值。在实施方案中，在使所述etc抑制剂与所述细胞样品接触后获取反应混合物的耗氧量的值和质子流出的值。
3、在实施方案中，使所述atp合酶抑制剂、所述线粒体
4、在实施方案中，耗氧量不是在密封系统中确定的，例如系统允许氧反向扩散或大量氧反向扩散到所述样品。在实施方案中，耗氧量是所述样品中的针对反向扩散到所述样品的氧进行校正的氧损耗。在实施方案中，耗氧量是没有针对反向扩散到所述样品的氧进行校正的氧损耗。在实施方案中，所述耗氧量是在密封系统中确定的，例如在不允许氧反向扩散或大量氧反向扩散到所述样品的系统中确定的。在实施方案中，耗氧量等于或基本上等于所述样品中的氧损耗。
5、在实施方案中，耗氧量是直接或间接确定的，例如，从例如在测试孔内或穿过毛细管测量的氧梯度推断，或通过在预选的时间点测量氧。
6、在实施方案中，所述vocref包括所述细胞样品的耗氧量的基础或初始值，例如基于在形成反应混合物之前进行的对所述细胞样品的耗氧量的测量的值。在实施方案中，所述耗氧量是通过耗氧速率(ocr)测量的(例如，直接或间接)。在实施方案中，获取vocref包括确定(例如，测量)所述细胞样品的基础或初始ocr。在实施方案中，确定(例如，测量)所述细胞样品的基础或初始ocr包括感测代谢物(例如，o2)，例如从培养基消耗的代谢物。
7、在实施方案中，所述vperef包括所述细胞样品的质子流出的基础或初始值，例如基于在形成所述反应混合物之前进行的对所述细胞样品的质子流出的测量的值。在实施方案中，所述质子流出是通过质子流出速率(per)测量的(例如，直接或间接)。在实施方案中，测量细胞外酸化速率(ecar)以产生质子流出的值。在实施方案中，获取vperef包括确定(例如，测量)所述细胞样品的基础或初始per。在实施方案中，确定(例如，测量)所述细胞样品的基础或初始per包括感测代谢物或细胞成分，例如布置在培养基中的代谢物或细胞成分。
8、在实施方案中，所述vocref和所述vperef是基于在彼此的10小时内(例如，在1、2、3、4、5、6、7、8或9小时内，在1、2、5、10、15、30、45、60、80或90分钟内，在1、2、5、10、15、30、45或60秒内，或在1、10、50、100、200、400、600或800毫秒内)开始的对耗氧量和质子流出的测量。在实施方案中，所述vocref和所述vperef是基于在适合于快速仪器数据采集的时间段内(例如，在1、10、50、100、200、400、600或800毫秒内)开始的对耗氧量和质子流出的测量。在实施方案中，所述vocref和所述vperef是基于在适合于长期终点测量的时间段内(例如，在1、2、3、4、5、6、7、8或9小时内)开始的对耗氧量和质子流出的测量。
9、在实施方案中，所述vocref和所述vperef是基于连续开始的对耗氧量和质子流出的测量。在实施方案中，所述vocref和所述vperef是基于基本上同时开始的对耗氧量和质子流出的测量。
10、在实施方案中，使所述细胞样品与所述atp合酶抑制剂、所述线粒体解偶联剂和所述etc抑制剂接触包括将所述atp合酶抑制剂、所述线粒体解偶联剂和所述etc抑制剂依序、部分同时或同时引入(例如，注射，例如从容器(例如，盒)中的布置在所述细胞样品上方的单元(例如，端口))到布置有所述细胞样品的(例如，多孔板的)孔或微室中。
11、在实施方案中，使所述atp合酶抑制剂、所述线粒体解偶联剂和所述etc抑制剂依序与所述细胞样品接触。
12、在实施方案中，使所述atp合酶抑制剂、所述线粒体解偶联剂和所述etc抑制剂按以下顺序(从第一到最后)与所述细胞样品接触：
13、(a)所述atp合酶抑制剂、所述线粒体解偶联剂、所述etc抑制剂；
14、(b)所述atp合酶抑制剂、所述etc抑制剂、所述线粒体解偶联剂；
15、(c)所述线粒体解偶联剂、所述atp合酶抑制剂、所述etc抑制剂；
16、(d)所述线粒体解偶联剂、所述etc抑制剂、所述atp合酶抑制剂；
17、(e)所述etc抑制剂、所述atp合酶抑制剂、所述线粒体解偶联剂；或
18、(f)所述etc抑制剂、所述线粒体解偶联剂、所述atp合酶抑制剂。
19、在实施方案中，使所述atp合酶抑制剂、所述线粒体解偶联剂和所述etc抑制剂按以下顺序(从第一到最后)与所述细胞样品接触：所述atp合酶抑制剂、所述线粒体解偶联剂、所述etc抑制剂。
20、在实施方案中，使所述细胞样品与所述atp合酶抑制剂、所述线粒体解偶联剂和所述etc抑制剂接触发生在彼此的10小时内(例如，在1、2、3、4、5、6、7、8或9小时内，在1、2、5、10、15、30、45、60、80或90分钟内，在1、2、5、10、15、30、45或60秒内，或在1、10、50、100、200、400、600或800毫秒内)。在实施方案本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种评价细胞样品的生物能平衡和生物能能力的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中在使所述ATP合酶抑制剂与所述细胞样品接触后获取耗氧量的值和质子流出的值。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中在使所述线粒体解偶联剂与所述细胞样品接触后获取耗氧量的值和质子流出的值。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中在使所述ETC抑制剂与所述细胞样品接触后获取耗氧量的值和质子流出的值。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中使所述ATP合酶抑制剂、所述线粒体解偶联剂和所述ETC抑制剂依序与所述细胞样品接触，并且
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中耗氧量不是在密封系统中确定的，例如系统允许氧反向扩散或大量氧反向扩散到所述样品。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中耗氧量是所述样品中的针对反向扩散到所述样品的氧进行校正的氧损耗。
8.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中耗氧量是没有针对反向扩散到所述样品的氧进行校正的氧损耗。
9.根据权
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中耗氧量等于或基本上等于所述样品中的氧损耗。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中耗氧量是直接或间接确定的，例如，从例如在测试孔内或穿过毛细管测量的氧梯度推断，或通过在预选的时间点测量氧。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述VOCRef包括所述细胞样品的耗氧量的基础或初始值，例如基于在形成反应混合物之前进行的对所述细胞样品的耗氧量的测量的值。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述耗氧量是通过耗氧速率(OCR)测量的(例如，直接或间接)。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中获取VOCRef包括确定(例如，测量)所述细胞样品的基础或初始OCR。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中确定(例如，测量)所述细胞样品的基础或初始OCR包括感测代谢物(例如，O2)，例如从培养基消耗的代谢物。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述VPERef包括所述细胞样品的质子流出的基础或初始值，例如基于在形成所述反应混合物之前进行的对所述细胞样品的质子流出的测量的值。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述质子流出是通过质子流出速率(PER)测量的(例如，直接或间接)。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法，其中测量细胞外酸化速率(ECAR)以产生质子流出的值。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中获取VPERef包括确定(例如，测量)所述细胞样品的基础或初始PER。
20.根据权利要求19所述的方法，其中确定(例如，测量)所述细胞样品的基础或初始PER包括感测代谢物或细胞成分，例如布置在培养基中的代谢物或细胞成分。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述VOCRef和所述VPERef是基于在彼此的10小时内(例如，在1、2、3、4、5、6、7、8或9小时内，在1、2、5、10、15、30、45、60、80或90分钟内，在1、2、5、10、15、30、45或60秒内，或在1、10、50、100、200、400、600或800毫秒内)开始的对耗氧量和质子流出的测量。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述VOCRef和所述VPERef是基于在适合于快速仪器数据采集的时间段内，例如在1、10、50、100、200、400、600或800毫秒内开始的对耗氧量和质子流出的测量。
23.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述VOCRef和所述VPERef是基于在适合于长期终点测量的时间段内，例如在1、2、3、4、5、6、7、8或9小时内开始的对耗氧量和质子流出的测量。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的方法，其中所述VOCRef和所述VPERef是基于连续开始的对耗氧量和质子流出的测量。
25.根据权利要求1-23中任一项所述的方法，其中所述VOCRef和所述VPERef是基于基本上同时开始的对耗氧量和质子流出的测量。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中使所述细胞样品与所述ATP合酶抑制剂、所述线粒体解偶联...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种评价细胞样品的生物能平衡和生物能能力的方法，所述方法包括：
2.根据权利要求1所述的方法，其中在使所述atp合酶抑制剂与所述细胞样品接触后获取耗氧量的值和质子流出的值。
3.根据权利要求1或2所述的方法，其中在使所述线粒体解偶联剂与所述细胞样品接触后获取耗氧量的值和质子流出的值。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其中在使所述etc抑制剂与所述细胞样品接触后获取耗氧量的值和质子流出的值。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其中使所述atp合酶抑制剂、所述线粒体解偶联剂和所述etc抑制剂依序与所述细胞样品接触，并且
6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中耗氧量不是在密封系统中确定的，例如系统允许氧反向扩散或大量氧反向扩散到所述样品。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中耗氧量是所述样品中的针对反向扩散到所述样品的氧进行校正的氧损耗。
8.根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中耗氧量是没有针对反向扩散到所述样品的氧进行校正的氧损耗。
9.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其中所述耗氧量是在密封系统中确定的，例如在不允许氧反向扩散或大量氧反向扩散到所述样品的系统中确定的。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的方法，其中耗氧量等于或基本上等于所述样品中的氧损耗。
11.根据权利要求1-10中任一项所述的方法，其中耗氧量是直接或间接确定的，例如，从例如在测试孔内或穿过毛细管测量的氧梯度推断，或通过在预选的时间点测量氧。
12.根据权利要求1-11中任一项所述的方法，其中所述vocref包括所述细胞样品的耗氧量的基础或初始值，例如基于在形成反应混合物之前进行的对所述细胞样品的耗氧量的测量的值。
13.根据权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述耗氧量是通过耗氧速率(ocr)测量的(例如，直接或间接)。
14.根据权利要求1-13中任一项所述的方法，其中获取vocref包括确定(例如，测量)所述细胞样品的基础或初始ocr。
15.根据权利要求1-14中任一项所述的方法，其中确定(例如，测量)所述细胞样品的基础或初始ocr包括感测代谢物(例如，o2)，例如从培养基消耗的代谢物。
16.根据权利要求1-15中任一项所述的方法，其中所述vperef包括所述细胞样品的质子流出的基础或初始值，例如基于在形成所述反应混合物之前进行的对所述细胞样品的质子流出的测量的值。
17.根据权利要求1-16中任一项所述的方法，其中所述质子流出是通过质子流出速率(per)测量的(例如，直接或间接)。
18.根据权利要求1-17中任一项所述的方法，其中测量细胞外酸化速率(ecar)以产生质子流出的值。
19.根据权利要求1-18中任一项所述的方法，其中获取vperef包括确定(例如，测量)所述细胞样品的基础或初始per。
20.根据权利要求19所述的方法，其中确定(例如，测量)所述细胞样品的基础或初始per包括感测代谢物或细胞成分，例如布置在培养基中的代谢物或细胞成分。
21.根据权利要求1-20中任一项所述的方法，其中所述vocref和所述vperef是基于在彼此的10小时内(例如，在1、2、3、4、5、6、7、8或9小时内，在1、2、5、10、15、30、45、60、80或90分钟内，在1、2、5、10、15、30、45或60秒内，或在1、10、50、100、200、400、600或800毫秒内)开始的对耗氧量和质子流出的测量。
22.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述vocref和所述vperef是基于在适合于快速仪器数据采集的时间段内，例如在1、10、50、100、200、400、600或800毫秒内开始的对耗氧量和质子流出的测量。
23.根据权利要求1-21中任一项所述的方法，其中所述vocref和所述vperef是基于在适合于长期终点测量的时间段内，例如在1、2、3、4、5、6、7、8或9小时内开始的对耗氧量和质子流出的测量。
24.根据权利要求1-23中任一项所述的方法，其中所述vocref和所述vperef是基于连续开始的对耗氧量和质子流出的测量。
25.根据权利要求1-23中任一项所述的方法，其中所述vocref和所述vperef是基于基本上同时开始的对耗氧量和质子流出的测量。
26.根据权利要求1-25中任一项所述的方法，其中使所述细胞样品与所述atp合酶抑制剂、所述线粒体解偶联剂和所述etc抑制剂接触包括将所述atp合酶抑制剂、所述线粒体解偶联剂和所述etc抑制剂依序、部分同时或同时引入(例如，注射，例如从容器(例如，盒)中的布置在所述细胞样品上方的单元(例如，端口))到布置有所述细胞样品的(例如，多孔板的)孔或微室中。
27.根据权利要求1-26中任一项所述的方法，其中使所述atp合酶抑制剂、所述线粒体解偶联剂和所述etc抑制剂依序与所述细胞样品接触。
28.根据权利要求1-27中任一项所述的方法，其中使所述atp合酶抑制剂、所述线粒体解偶联剂和所述etc抑制剂按以下顺序(从第一到最后)与所述细胞样品接触：
29.根据权利要求1-28中任一项所述的方法，其中使所述atp合酶抑制剂、所述线粒体解偶联剂和所述etc抑制剂按以下顺序(从第一到最后)与所述细胞样品接触：所述atp合酶抑制剂、所述线粒体解偶联剂、所述etc抑制剂。
30.根据权利要求1-29中任一项所述的方法，其中使所述细胞样品与所述atp合酶抑制剂、所述线粒体解偶联剂和所述etc抑制剂接触发生在彼此的10小时内(例如，在1、2、3、4、5、6、7、8或9小时内，在1、2、5、10、15、30、45、60、80或90分钟内，在1、2、5、10、15、30、45或60秒内，或在1、10、50、100、200、400、600或800毫秒内)。
31.根据权利要求1-30中任一项所述的方法，其中使所述细胞样品与所述atp合酶抑制剂、所述线粒体解偶联剂和所述etc抑制剂接触发生在适合于快速仪器数据采集的时间段内，例如在1、10、50、100、200、400、600或800毫秒内。
32.根据权利要求1-30中任一项所述的方法，其中使所述细胞样品与所述atp合酶抑制剂、所述线粒体解偶联剂和所述etc抑制剂接触发生在适合于长期终点测量的时间段内，例如在1、2、3、4、5、6、7、8或9小时内。
33.根据权利要求1-26中任一项所述的方法，其中使所述atp合酶抑制剂、所述线粒体解偶联剂和所述etc抑制剂中的两种或全部同时或部分同时与所述细胞样品接触。
34.根据权利要求33所述的方法，其中使以下同时与所述细胞样品接触：
35.根据权利要求33或34所述的方法，其中形成所述反应混合物包括混合所述atp合酶抑制剂、所述线粒体解偶联剂或所述etc抑制剂中的任两种或全部，然后使其与所述细胞样品接触。
36.根据权利要求1-35中任一项所述的方法，其中所述atp合酶抑制剂包含寡霉素a。
37.根据权利要求1-36中任一项所述的方法，其中所述atp合酶抑制剂(例如，寡霉素a)以至少1nm直到所述atp合酶抑制剂(例如，寡霉素a)的溶解度极限的浓度存在于所述反应混合物中，所述浓度例如1nm至100mm、10nm至10mm、0.1μm至1mm、0.1μm至100μm、0.1μm至10μm、0.2μm至5μm、0.5μm至2μm、0.2μm至4μm、0.2μm至3μm、0.2μm至1μm、0.2μm至0.5μm、4μm至5μm、3μm至5μm、2μm至5μm、1μm至5μm、0.5μm至5μm、1μm至3μm、2μm至4μm、1μm至2μm、0.5μm至2.5μm，例如0.2μm、0.5μm、1μm、1.5μm、2μm、2.5μm、3μm、3.5μm、4μm、4.5μm、或5μm。
38.根据权利要求37所述的方法，其中所述atp合酶抑制剂(例如，寡霉素a)以1μm至2μm，例如1.5μm的浓度存在于所述反应混合物中。
39.根据权利要求1-38中任一项所述的方法，其中所述线粒体解偶联剂包含bam15。
40.根据权利要求1-39中任一项所述的方法，其中所述线粒体解偶联剂(例如，bam15)以至少1nm直到所述线粒体解偶联剂(例如，bam15)的溶解度极限的浓度存在于所述反应混合物中，所述浓度例如1nm至100mm、10nm至10mm、0.1μm至1mm、0.1μm至100μm、0.1μm至10μm、0.5μm至10μm、1μm至8μm、2μm至6μm、3μm至4μm、0.5μm至8μm、0.5μm至6μm、0.5μm至4μm、0.5μm至2μm、0.5μm至1μm、8μm至10μm、6μm至10μm、4μm至10μm、2μm至10μm、1μm至10μm、1μm至3μm、2μm至4μm、3μm至5μm、4μm至6μm、5μm至7μm、6μm至8μm、7μm至9μm、2μm至3μm、1μm至4μm，例如0.5μm、1μm、1.5μm、2μm、2.5μm、3μm、3.5μm、4μm、5μm、6μm、7μm、8μm、9μm、或10μm。
41.根据权利要求40所述的方法，其中所述线粒体解偶联剂(例如，bam15)以2μm至3μm，例如2.5μm的浓度存在于所述反应混合物中。
42.根据权利要求1-41中任一项所述的方法，其中所述etc抑制剂包含鱼藤酮、抗霉素a或其组合，任选地其中所述etc抑制剂包含鱼藤酮和抗霉素a。
43.根据权利要求1-42中任一项所述的方法，其中所述etc抑制剂(例如，鱼藤酮、抗霉素a或其组合)以至少1nm直到所述etc抑制剂(例如，鱼藤酮、抗霉素a或其组合)的溶解度极限的浓度存在于所述反应混合物中，所述浓度例如1nm至100mm、10nm至10mm、0.1μm至1mm、0.1μm至100μm、0.1μm至10μm、0.1μm至5μm、0.2μm至2μm、0.5μm至1μm、0.1μm至4μm、0.1μm至3μm、0.1μm至2μm、0.1μm至1μm、0.1μm至0.5μm、4μm至5μm、3μm至5μm、2μm至5μm、1μm至5μm、0.5μm至5μm、0.2μm至1μm、0.5μm至2μm、0.2μm至1μm，例如0.1μm、0.2μm、0.3μm、0.4μm、0.5μm、0.6μm、0.7μm、0.8μm、0.9μm、1μm、1.5μm、2μm、2.5μm、3μm、4μm、或5μm，任选地其中在所述反应混合物中所述etc抑制剂包含浓度为0.2μm至1μm(例如，0.5μm)的鱼藤酮和浓度为0.2μm至1μm(例如，0.5μm)的抗霉素a。
44.根据权利要求1-43中任一项所述的方法，形成所述反应混合物进一步包括使所述细胞样品与诱导能量需求增加的试剂接触，所述试剂例如离子载体(例如，莫能菌素)。
45.根据权利要求44所述的方法，其中所述离子载体(例如，莫能菌素)以至少1nm直到所述离子载体(例如，莫能菌素)的溶解度极限的浓度存在于所述反应混合物中，所述浓度例如1nm至100mm、10nm至10mm、0.1μm至1mm、1μm至100μm、5μm至100μm、10μm至80μm、20μm至60μm、30μm至50μm、5μm至80μm、5μm至60μm、5μm至40μm、5μm至20μm、5μm至10μm、80μm至100μm、60μm至100μm、40μm至100μm、20μm至100μm、10μm至100μm、10μm至40μm、20μm至60μm、40μm至80μm、15μm至25μm、或10μm至30μm，例如5μm、10μm、20μm、30μm、40μm、50μm、60μm、70μm、80μm、90μm、或100μm，任选地其中所述离子载体(例如，莫能菌素)以10μm至30μm，例如20μm的浓度存在于所述反应混合物中。
46.根据权利要求44或45所述的方法，其中将所述离子载体(例如，莫能菌素)以200μm至300μm(例如，240μm)的浓度在测定培养基中在etoh 10％中制备为原液。
47.根据权利要求1-46中任一项所述的方法，其中所述vocmix包括所述反应混合物的耗氧量的值，例如基于在形成所述反应混合物之后进行的对所述反应混合物的耗氧量的测量的值。
48.根据权利要求47所述的方法，其中所述耗氧量是通过耗氧速率(ocr)测量的(例如，直接或间接)。
49.根据权利要求47或48所述的方法，其中获取所述vocmix包括确定(例如，测量)所述反应混合物的ocr。
50.根据权利要求49所述的方法，其中确定(例如，测量)所述反应混合物的ocr包括感测代谢物(例如，o2)，例如从培养基消耗的代谢物。
51.根据权利要求1-50中任一项所述的方法，其中所述vpemix包括所述反应混合物的质子流出的值，例如基于在形成所述反应混合物之后所述反应混合物的质子流出的测量结果的值。
52.根据权利要求51所述的方法，其中所述质子流出是通过质子流出速率(per)测量的(例如，直接或间接)。
53.根据权利要求5...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·N·R·费拉多，J·N·海恩斯，
申请(专利权)人：安捷伦科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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