【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物检测，具体涉及一种神经梅毒检测试剂盒及其应用。
技术介绍
1、神经梅毒是由梅毒螺旋体(treponema pallidum，tp)侵犯神经系统所出现的脑膜、大脑、血管或者是脊髓等损害的慢性感染性疾病，可发生于梅毒病程的各个阶段，如果未得到及时治疗，常常会导致严重的器质性损伤甚至危及生命。
2、神经梅毒的症状多变，临床上常常误诊或者漏诊，其诊断很大程度上依赖于实验室检测。目前尚无单一实验室检测方法能够灵敏且特异地诊断神经梅毒，需要结合多种实验室检测结果以及临床症状、体征进行综合判断，造成神经梅毒的诊断困难、误诊率高，因此，临床迫切需要开发神经梅毒的准确、简便检测手段。
3、近年来以梅毒外膜蛋白为靶标进行特异性抗体检测广受关注，该蛋白缺乏脂多糖，主要成分为脂蛋白，在梅毒螺旋体的传播和宿主的黏附等方面起重要作用。神经梅毒作为梅毒感染的重要阶段，缺乏诊断金标准，外膜蛋白在神经梅毒中的诊断价值未知。
4、报道显示，通过血液标本进行lc-ms/ms分析，在血清样本中鉴定出25个肽段分别对应15种梅毒螺旋体抗原，分别为tp0030、tp0116、tp0216、tp0242、tp0287、tp0369、tp0426、tp0494、tp0524、tp0542、tp0648、tp0651、tp0837、tp0927和tp0984。另外，研究人员通过maldi-tof/tof质谱对梅毒感染者的尿液进行分析，鉴定出4种梅毒螺旋体抗原，分别为tp0486、tp0742、tp0804和tp0369。有研
5、目前未见tp0369或tp0486与神经梅毒相关的报道。
技术实现思路
1、为解决现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种神经梅毒检测试剂盒。本专利技术利用基因克隆表达技术，获得梅毒nichols株的tp0369和tp0486重组蛋白，通过检测脑脊液中的tp0369、tp0486抗体表达水平来区分神经病毒，有利于指导临床用药。
2、本专利技术提供了tp0369和/或tp0486重组抗原检测试剂在制备检测神经梅毒的试剂盒中的用途。
3、其中，所述检测试剂是检测脑脊液中tp0369和/或tp0486抗体表达水平的试剂。
4、其中，所述检测试剂为elisa检测用试剂。
5、其中，所述试剂包括tp0369和/或tp0486重组抗原包被的酶标板。
6、其中，所述重组蛋白的核苷酸序列分别如seq id no：1、seq id no：2所示。
7、本专利技术还提供了一种神经梅毒检测试剂盒，它包括检测脑脊液中tp0369和/或tp0486抗体表达水平的试剂。
8、其中，所述试剂盒为elisa检测试剂盒；包括tp0369和/或tp0486重组蛋白包被的酶标板。
9、其中，所述重组蛋白的核苷酸序列分别如seq id no：1、seq id no：2所示。
10、其中，所述重组蛋白的制备方法如下：
11、(1)构建包括seq id no：1或seq id no：2所示核苷酸序列的重组表达载体；
12、(2)将重组表达载体转入宿主菌中，培养，加入诱导剂，诱导表达目的蛋白；
13、(3)收集菌体，取上清，分离纯化，即得。
14、进一步地，所述表达载体为pet-21a载体；所述诱导剂为iptg；所述分离纯化的方法为：首先由镍柱亲和层析初步纯化，然后用superdex 200increase 10/300gl柱纯化。
15、本专利技术人针对神经病毒诊断困难、误诊率高这一问题进行深入研究，发现脑脊液中梅毒螺旋体tp0369、tp0486抗体表达水平可用于神经梅毒检测，与tppa试验、tppa和trust试验、临床神经梅毒的诊断结果相符合，特异性和灵敏度均较高。尤其是对tp0486抗体的检测，特异性和灵敏度均在90％以上，测定方法准确可靠，为临床诊疗神经病毒提供了新思路。本专利技术已获得国家自然科学基金资助(项目批准号82202528)，临床应用前景良好。
16、以下结合说明书附图和实施例形式的具体实施方式，来进一步说明本专利技术，但实施例并不对本专利技术做任何形式的限定。对于本领域技术人员来说，其他的任何未背离本专利技术的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本专利技术的保护范围之内。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.Tp0369和/或Tp0486重组抗原检测试剂在制备检测神经梅毒的试剂盒中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述检测试剂是检测脑脊液中Tp0369和/或Tp0486抗体表达水平的试剂。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述检测试剂为ELISA检测用试剂。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述试剂包括Tp0369和/或Tp0486重组抗原包被的酶标板。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述重组蛋白的核苷酸序列分别如SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：2所示。
6.一种神经梅毒检测试剂盒，其特征在于：它包括检测脑脊液中Tp0369和/或Tp0486抗体表达水平的试剂。
7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒为ELISA检测试剂盒；包括Tp0369和/或Tp0486重组蛋白包被的酶标板。
8.根据权利要求7所述的试剂盒，其特征在于：所述重组蛋白的核苷酸序列分别如SEQID NO：1、SEQ ID NO：2所示。
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10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于：
...【技术特征摘要】
1.tp0369和/或tp0486重组抗原检测试剂在制备检测神经梅毒的试剂盒中的用途。
2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述检测试剂是检测脑脊液中tp0369和/或tp0486抗体表达水平的试剂。
3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述检测试剂为elisa检测用试剂。
4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述试剂包括tp0369和/或tp0486重组抗原包被的酶标板。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述重组蛋白的核苷酸序列分别如seq idno：1、seq id no：2...
【专利技术属性】
技术研发人员：叶飞，敖科萍，陈欣盈，李冬冬，谢轶，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：
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