一种基于自催化滚环扩增反应的核酸分析方法技术

本发明专利技术公开了一种基于自催化滚环反应的核酸分析方法，属于分子检测领域。本发明专利技术在传统RCA反应基础上，通过在模板链中引入I‑R3DNAzyme自剪切单元，在单级RCA线性扩增基础上进行进一步信号放大，引发RCA与DNAzyme模块交叉激活，实现指数级信号扩增，由于扩增产物上有周期性排列的重复序列，为报告链提供足够的结合位点，这一自催化滚环扩增反应可以与不同的信号输出方式进行集成，将目标序列的输入转换为扩增的信号输出。本方法可以用于DNA与miRNA的体外检测，具有较高的灵敏性与特异性，并且可以实现两种miRNA的同时分析。本方法还可以用于不同种类细胞中两种miRNA的同时原位成像，为miRNA相关疾病的早期诊断与筛查提供有力工具。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子检测领域，具体涉及一种基于自催化滚环扩增反应的核酸分析方法。

技术介绍

1、滚环扩增(rolling circle amplification,rca)反应起源于自然界中细菌质粒的滚环复制过程，是一种高保真的恒温核酸扩增技术(firea.,xu s.q.,proc.natlacad.sci.u.s.a.,1995,92,4641-4645.)。rca反应体系由模板链以及dna聚合酶组成，当目标分析物序列存在时，其通过碱基互补配对作用与模板链杂交，在聚合酶辅助下进行3’端延伸，生成一条包含成千上万个模板互补序列的dna长链，从而实现目标物输入的信号扩增(johne r.,mullerh.,rectora.,van-ranst m.,stevens h.,trends microbiol.,2009,17,205-211.)。通过对模板链进行简单的序列设计，rca技术可以用于不同分析物的高效检测，因而被广泛用于生物诊断与研究。然而由于其扩增效率有限，仅能实现线性的信号放大，这限制了rca策略在低丰度目标物分析中的应用。p>

2、自此，本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于自催化滚环扩增反应的核酸分析方法，其特征在于，包含如下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于自催化滚环扩增的核酸分析方法，其特征在于，所述的核酸为miRNA-21与miR-155，其Pre-template0、Pre-templateMT、Pre-template21、Pre-template155、Primer0、Primer21、Primer155、Beacon21、Beacon155、Reporter21、Reporter155的核苷酸序列如SEQ ID NO：1-11所示。

3.权利要求1或2所述的基于自催化滚环扩增反应的核酸分析方法在胞内两种m...

【技术特征摘要】

1.一种基于自催化滚环扩增反应的核酸分析方法，其特征在于，包含如下步骤：

2.根据权利要求1所述的基于自催化滚环扩增的核酸分析方法，其特征在于，所述的核酸为mirna-21与mir-155，其pre-template0、pre-templatemt、pre-template21、pre-template155、primer0、primer21、primer155、beacon21、beacon155、reporter21、reporter155的核苷酸序列如seq id no：1-11所示。

3.权利要求1或2所述的基于自催化滚环扩增反应的核酸分析方法在胞内两种mirna同时成像的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，将200μl含有模板链(template21与template155，0.25nmole)以及20％甲酰胺的2×ssc与细胞进行37℃孵育1h，清洗并脱水后，在细胞培养皿中加入200μl含dntp(100μm)、phi29聚合酶(0.6u/μl)以及乙酸锌(0.5mm)的三羟甲基氨基甲烷醋酸盐缓冲液，进行30℃孵育2h，清洗并脱水后，在细胞培养皿中加入200μl含有报告链(reporter21与reporter155，100nm)以及20％甲酰胺的2×ssc，进行37℃孵育30min，使用5μg/mlhoechst 93342对细胞核进行染色，最终用于共聚焦成像。

5.一种基于自催化滚环扩增反应的dna检测试剂盒，其特征在于，包含合成模板链template0所需的pre-template0链与primer0链、t4 dna连接酶、exo i、exo iii、phi29聚...

【专利技术属性】
技术研发人员：王富安，尚金桦，
申请(专利权)人：武汉大学深圳研究院，
类型：发明
国别省市：