【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医学和基因治疗，具体地，本申请提供了mkp5基因在制备治疗肝纤维化的药物中的应用；使用纳米递送系统靶向递送间充质干细胞膜包备的载基因纳米粒msc-mkp5-plga-pei至肝纤维化动物肝组织，从而实现mkp5在肝纤维化治疗中的应用。
技术介绍
1、肝脏疾病主要包括病毒感染、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝病、肝纤维化(hepatic fibrosis,hf)、肝硬化和肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,hcc)等，因高发病率和不良的临床结果，导致其成为一个严重的公共卫生问题。hf，是由各种急性或慢性肝损伤所致的一种修复与重构的过程，是肝硬化、肝癌的早期阶段，其主要特征是ecm过度沉积。若损伤因素消除，纤维化是可以逆转的，但如果治疗不及时，可继续发展为肝硬化和随后的门静脉高压、肝性脑病或hcc等。近年来，许多研究发现，hf是一个涉及多种通路和机制的复杂反应，包括hsc活化、ecm沉积、ers、炎症反应和多种通路的激活等。但目前hf的发病机制尚不完全明确，导致其没有明确的治疗靶点。因此，探讨hf的发病机制，以揭示相关的治疗靶点是至关重要的。
2、丝裂原活化蛋白激酶(mapks)是一类丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，参与调控细胞的生长、分化和增殖，并参与调节细胞周期和细胞凋亡等过程。mapk磷酸酶(mitogen kinasephosphatases,mkps)，也称为双特异性磷酸酶(dual specificity phosphatase,dusp)，可通过使酪氨酸/苏氨酸残基去磷酸化对m
3、由于肝纤维化的发病机制复杂，限制了其治疗选择。目前对于肝纤维化的治疗研究主要集中于植物药物，例如白藜芦醇、姜黄素和水飞蓟素等。且目前许多抗纤维化候选药物在动物模型中显示出强大的效果，但在临床试验中的抗纤维化作用尚不清楚。核酸类药物通过调控基因的转录和表达过程发挥作用，与小分子、蛋白药物等传统药物相比，核酸类药物具有设计简单、研发周期短、特异性强等优势，为众多疾病提供良好的解决方案。但由于其稳定性差、体内屏障、靶向性弱等问题，限制了核酸类药物的临床应用。近年越来越多的研究证明，将核酸药物进行化学修饰或者通过载体递送系统有助于核酸类药物在疾病治疗中发挥作用。目前应用较多的递送载体有病毒载体、脂质纳米粒、聚合物纳米载体、无机纳米载体和外泌体等。纳米递送治疗是近年来新兴起的一种方法，为肿瘤等疾病的治疗提供了巨大的机会。但涉及到临床应用时，纳米颗粒(nps)在生物稳定性、靶向性和快速从体内清除等方面存在一些局限性。因此，迫切需要开发更安全、更有效和靶向性更强的纳米递送平台。
4、通过上述分析，目前存在的主要问题及缺陷为：hf的分子机制尚不完全明确，需要进一步寻找有效的作用靶点；mkp5在hf中的作用及用于hf治疗的可行性；目前对于肝纤维化的临床治疗存在诸多问题，因此迫切需要更有效的靶向递送策略；目前各种靶向递送系统仍存在一些局限性，所以还需要开发更安全、有效和靶向性更强的纳米递送平台。
技术实现思路
1、一方面，本申请提供了mkp5基因在制备治疗肝纤维化的药物中的应用。
2、另一方面，本申请提供了治疗肝纤维化的药物，所述药物包含表达mkp5的质粒或宿主。
3、优选mkp5基因的核苷酸序列如seq id no.3所示。
4、进一步地，所述药物包含干细胞膜包被的载mkp5过表达质粒的纳米粒。
5、进一步地，所述mkp5过表达质粒基于plncx2载体构建。
6、进一步地，所述干细胞为自体或异体间充质干细胞。
7、进一步地，所述载mkp5纳米粒为mkp5-plga-pei纳米粒。
8、进一步地，mkp5-plga-pei纳米粒的制备方法为：采用纳米沉降法制备纳米粒：首先将10mg plga-pei溶于10ml乙醇和丙酮(乙醇/丙酮＝2：10)中，超声清洗仪中超声一段时间使其完全溶解，然后量取100ml超纯水于烧杯中，将上面混合液作为油相，使用滴管滴加于水相中，磁力搅拌500rpm/min，最后匀速搅拌过夜，使有机溶剂挥发。然后将上述得到的plga-pei纳米粒与过表达mkp5质粒按1：2的质量比例混匀后在室温孵育30min使两者结合为混合物。
9、进一步地，干细胞膜包被的载mkp5纳米粒的制备方法为：干细胞膜的提取方法如下：将间充质干细胞加入lysis buffer室温下裂解5min，在-20℃至-80℃下速冻后，然后在室温下快速解冻。细胞破坏发生在至少三个冻融周期后。然后于4℃，5000×g离心10min收集上清，13500×g离心15min后收集沉淀用pbs重悬，并将悬液分别在0.45μm，0.22μm和0.1μm滤膜中过滤，最后收集细胞膜。然后将干细胞膜与混合物按4：1的质量比例混合后，将混合液分别在0.45μm，0.22μm和0.1μm滤膜中过滤，收集msc-plga-mkp5用于后续实验。
10、进一步地，所述药物为注射剂型。
11、进一步地，所述药物还包含药学上可接受的载体。
12、所述注射剂型可用于静脉、腹膜内或经由肝动脉进行输注。
13、本申请技术人员可以根据纳米颗粒的性质来常规设计适用于各种途径的注射剂型，其中的辅料，包括但不限于溶剂、助溶剂、抗氧化剂、ph调节剂、渗透压调节剂、稳定剂等本领域技术人员可以依据药剂学常识选用。
14、有益效果
15、第一，本专利技术提供一种有效的作用靶点，并运用靶向纳米递送系统将基因药物特异性递送至受损肝组织以治疗哺乳动物肝纤维化的方法。
16、本专利技术涉及肝纤维化治疗的新靶点和间充质干细胞膜包备的纳米粒，靶向递送mkp5质粒至受损肝脏组织，通过基因表达转录后调控机制调控相应蛋白的表达，同时保护其他正常组织免受损害，改善肝纤维化小鼠肝组织中的病理变化和胶原沉积情况，从而缓解小鼠肝纤维化程度。
17、第二，关于mkp5在ccl4诱导的hf中的治疗作用，目前尚未见报道。因此，本专利技术明确了mkp5在肝纤维化中的作用，填补了这项技术空白。
18、第三，间充质干细胞膜包备载mk本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.MKP5基因在制备治疗肝纤维化的药物中的应用。
2.治疗肝纤维化的药物，所述药物包含表达MKP5的质粒或宿主。
3.根据权利要求1所述的应用或者根据权利要求2所述的药物，其中所述药物包含干细胞膜包被的载MKP5过表达质粒的纳米粒。
4.根据权利要求3所述的应用或药物，其中所述MKP5过表达质粒基于pLNCX2载体构建。
5.根据权利要求4所述的应用或药物，其中所述干细胞为自体或异体间充质干细胞。
6.根据权利要求5所述的应用或药物，其中所述纳米粒为MKP5-PLGA-PEI纳米粒。
7.根据权利要求6所述的应用或药物，其中所述MKP5-PLGA-PEI纳米粒的制备方法为：将10mg PLGA-PEI溶于10mL体积比为2:10的乙醇和丙酮混合液中，超声清洗仪中超声使其完全溶解，然后量取100mL超纯水于烧杯中，将加入了PLGA-PEI的所述乙醇和丙酮混合液混合液作为油相，使用滴管滴加于水相中，磁力搅拌500rpm/min，匀速搅拌过夜，使有机溶剂挥发得到PLGA-PEI纳米粒；将PLGA-PEI纳米粒与过
8.根据权利要求7所述的应用或药物，其中干细胞膜包被的载MKP5纳米粒的制备方法为：将间充质干细胞加入lysis buffer室温下裂解5min，在-20℃至-80℃下速冻后，在室温下快速解冻；至少三个冻融周期后，于4℃，5000×g离心10min收集上清，13500×g离心15min后收集沉淀用PBS重悬，并将悬液分别在0.45μm，0.22μm和0.1μm滤膜中过滤，收集细胞膜；将干细胞膜与PLGA-PEI纳米粒与过表达MKP5质粒按4：1的质量比例混合后，将混合液分别在0.45μm，0.22μm和0.1μm滤膜中过滤，获得干细胞膜包被的载MKP5过表达质粒的纳米粒。
9.根据权利要求3-8任一项所述的应用或药物，其中所述药物为注射剂型。
10.根据权利要求9所述的应用或药物，其中所述药物还包含药学上可接受的载体。
...【技术特征摘要】
1.mkp5基因在制备治疗肝纤维化的药物中的应用。
2.治疗肝纤维化的药物，所述药物包含表达mkp5的质粒或宿主。
3.根据权利要求1所述的应用或者根据权利要求2所述的药物，其中所述药物包含干细胞膜包被的载mkp5过表达质粒的纳米粒。
4.根据权利要求3所述的应用或药物，其中所述mkp5过表达质粒基于plncx2载体构建。
5.根据权利要求4所述的应用或药物，其中所述干细胞为自体或异体间充质干细胞。
6.根据权利要求5所述的应用或药物，其中所述纳米粒为mkp5-plga-pei纳米粒。
7.根据权利要求6所述的应用或药物，其中所述mkp5-plga-pei纳米粒的制备方法为：将10mg plga-pei溶于10ml体积比为2:10的乙醇和丙酮混合液中，超声清洗仪中超声使其完全溶解，然后量取100ml超纯水于烧杯中，将加入了plga-pei的所述乙醇和丙酮混合液混合液作为油相，使用滴管滴加于水相中，磁力搅拌500rpm/min，匀速搅拌过...
【专利技术属性】
技术研发人员：王伟，马杰，焦平，田亚飞，孙丹丹，赵佳囡，刘娜，董俐，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：
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