一种生产1,3-丁二醇的同工酶共表达重组菌及其构建方法和应用技术

本发明专利技术涉及生物工程技术领域，公开了一种用于制备1,3‑丁二醇(1,3‑BDO)的同工酶共表达重组菌的构建及其应用，所述重组菌是将编码硫解酶、乙酰乙酰辅酶A脱氢酶和醛脱氢酶的基因共同导入宿主细胞中，后再次分别导入编码硫解酶和醛(醇)脱氢酶的同工酶基因实现同工酶共表达，并筛选匹配效果较好的同工酶组合来进行1,3‑丁二醇的生产。利用本发明专利技术的重组菌在优化发酵条件、筛选不同效应物及其浓度后，经补料分批发酵1,3‑丁二醇的产量达到16.18g/L，转化率为0.36mol/mol，具有重要的工业应用潜力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程，具体涉及一种生产1,3-丁二醇的同工酶共表达重组菌及其构建方法和应用。

技术介绍

1、1,3-丁二醇(1,3-bdo)是一种重要的c4平台化学品，它是一种无色、透明、粘稠的液体，带有淡淡的水果香气，由于其毒性极小、保湿性强、抗菌性能和水溶性优异，该化合物被广泛用作在化妆品中的溶剂，并且由于其具有良好的生物相容性，也是合成香料、信息素和药物等工业化学品的关键中间体。全球1,3-bdo市场预计将以5.8％的复合年增长率增长，预计到2030年全球1,3-bdo市场将达到2.701亿美元。目前，1,3-bdo传统的生产工艺主要依赖化石原料，采用高浓度的乙醛缩合加氢，但是此工艺同时也会发生多级醛缩反应，从而导致产率下降且伴有污染性的副产物，近年来，随着全球化资源日渐枯竭，寻找可再生替代资源成为当务之急，研究生物法生产1,3-丁二醇的工作受到越来越多的关注。

2、对于自然界中不能天然合成的化学品来说，则需要构建人工合成路径进行合成。在异源宿主中构建相关化学品的代谢路径时，通常，会从众多的同工酶中去优选其中一种比较好的。很少有研究考虑本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种生产1,3-丁二醇的同工酶共表达重组菌，其特征在于，所述重组菌同时表达了Bld、Ald和AdhE2中任意2个或2个以上的酶；

2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌同时表达了Bld和Ald，或者，同时表达了Bld和AdhE2。

3.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述的重组菌表达了Thl、AtoB和PhaA中的任意一个或多个组合的酶；

4.根据权利要求3所述的重组菌，其特征在于，所述的重组菌表达了PhaB，所述的PhaB为来源于钩虫贪铜菌的phaB基因编码的乙酰乙酰辅酶A脱氢酶。

5.根据权利要求4所述的重组...

【技术特征摘要】

1.一种生产1,3-丁二醇的同工酶共表达重组菌，其特征在于，所述重组菌同时表达了bld、ald和adhe2中任意2个或2个以上的酶；

2.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述重组菌同时表达了bld和ald，或者，同时表达了bld和adhe2。

3.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述的重组菌表达了thl、atob和phaa中的任意一个或多个组合的酶；

4.根据权利要求3所述的重组菌，其特征在于，所述的重组菌表达了phab，所述的phab为来源于钩虫贪铜菌的phab基因编码的乙酰乙酰辅酶a脱氢酶。

5.根据权利要求4所述的重组菌，其特征在于，所述的重组菌同时表达了bld、adhe2、thl和phab，或者，同时表达了bld、ald、thl和phab，优选地是所述的重组菌同时表达了bld、adhe2、thl和phab。

6.根据权利要求4所述的重组菌，其特征在于，所述的thl、phab、bld、phaa、atob、ald和adhe2基因的核苷酸序列分别顺序对应于seq id no.1-7所示的核苷酸序列。

7.根据权利要求1所述的重组菌，其特征在于，所述的重组菌，其出发菌株为埃希氏菌属escherichia，优选大肠杆菌。

8.权利要求1或2所述的重组菌的构建方法，其特征在于，扩增bld、adhe2和ald中任意2个或2个以上的基因，构建重组载体，导入出发菌株，得到重组菌。

9.根据权利要求8所述的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

10.根据权利要求9所述的构建方法，其特征在于，所述的第一质粒载体...

【专利技术属性】
技术研发人员：柳东，张慧方，王振宇，张迪，李梦婷，应汉杰，牛欢青，管皓，洪舟阳，
申请(专利权)人：南京工业大学，
类型：发明
国别省市：