一种高产西柏三烯一醇的重组大肠杆菌、构建方法及应用技术

本发明专利技术涉及一种高产西柏三烯一醇的重组大肠杆菌、构建方法及其应用。通过敲除大肠杆菌宿主中乳酸脱氢酶编码基因ldhA、丙酮酸甲酸裂解酶编码基因pflB、磷酸转乙酰酶编码基因pta、乙酸激酶编码基因ackA和乙醛脱氢酶编码基因adhE，构建大肠杆菌工程菌株CBT05；分别构建重组表达载体pLNI、pHTX、pHBI，将构建的重组表达载体pLNI、pHTX、pHBI，以质粒共转化方式转入大肠杆菌工程菌株CBT05中，构建共同过表达羟乙基噻唑激酶EcThiM、异戊烯基磷酸激酶MthIPK、异戊烯基二磷酸δ‑异构酶ScIDI、双功能二磷酸法呢基合酶ScERG20、香叶基香叶基二磷酸合酶TcGGPPS、西柏三烯一醇合酶NtCBTS六种酶的大肠杆菌工程菌株CBT06。利用该菌株以异戊烯醇为主要添加底物进行摇瓶发酵，可在72h内累积510.48±16.32mg/L的西柏三烯一醇；在5L发酵罐发酵104h可积累西柏三烯一醇达2504.81mg/L，转化率达59.42％，说明该菌株具有工业化生产西柏三烯一醇的应用潜力。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种高产西柏三烯一醇的重组大肠杆菌、构建方法及其应用，属于生物。

技术介绍

1、西柏三烯一醇(cbt-ol)是烟草表皮腺毛分泌物的主要成分，为烟草西柏烷类化合物。在烟叶生长和调制过程中，西柏烷类化合物可降解为茄酮、氧化茄酮等香味成分，这些降解产物对于提高烟叶品质、增加卷烟香气、凸显卷烟风格特征具有重要积极影响。相关研究表明，西柏三烯一醇具有良好的抗真菌以及抗病毒活性，可作为药物前体用来合成高价值药物。西柏三烯一醇还具有良好的杀虫活性，当烟草害虫对烟草植株表面破坏时，包含在表面角质里的西柏三烯一醇就会被释放出来从而保护植株免受害虫的侵害，对烟草起到保护作用。西柏三烯一醇具有易于生物降解的特性，结合其杀虫活性可以作为环境友好的生物农药。因此西柏三烯一醇在烟草行业、农业以及制药业具有极大的应用价值。

2、由于西柏三烯一醇在烟草中含量较少，传统的植物提取方式不仅工艺复杂，且需要从烟叶中提取，来源受限，成本高昂无法满足市场的需求。化学合成法产量极低，目前不能用于工业化规模合成。而采用生物合成法生产西柏三烯一醇，能够弥补上述方法的不足，具有合本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种高产西柏三烯一醇的重组大肠杆菌，其特征在于，敲除大肠杆菌宿主中乳酸脱氢酶编码基因ldhA、丙酮酸甲酸裂解酶编码基因pflB、磷酸转乙酰酶编码基因pta、乙酸激酶编码基因ackA和乙醛脱氢酶编码基因adhE，构建大肠杆菌工程菌株CBT05；分别构建重组表达载体pLNI、pHTX、pHBI，将构建的重组表达载体pLNI、pHTX、pHBI，以质粒共转化方式转入大肠杆菌工程菌株CBT05中，构建共同过表达羟乙基噻唑激酶EcThiM、异戊烯基磷酸激酶MthIPK、异戊烯基二磷酸δ-异构酶ScIDI、双功能二磷酸法呢基合酶ScERG20、香叶基香叶基二磷酸合酶TcGGPPS、西柏三烯一醇合...

【技术特征摘要】

1.一种高产西柏三烯一醇的重组大肠杆菌，其特征在于，敲除大肠杆菌宿主中乳酸脱氢酶编码基因ldha、丙酮酸甲酸裂解酶编码基因pflb、磷酸转乙酰酶编码基因pta、乙酸激酶编码基因acka和乙醛脱氢酶编码基因adhe，构建大肠杆菌工程菌株cbt05；分别构建重组表达载体plni、phtx、phbi，将构建的重组表达载体plni、phtx、phbi，以质粒共转化方式转入大肠杆菌工程菌株cbt05中，构建共同过表达羟乙基噻唑激酶ecthim、异戊烯基磷酸激酶mthipk、异戊烯基二磷酸δ-异构酶scidi、双功能二磷酸法呢基合酶scerg20、香叶基香叶基二磷酸合酶tcggpps、西柏三烯一醇合酶ntcbts六种酶的大肠杆菌工程菌株cbt06。

2.一种高产西柏三烯一醇的重组大肠杆菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

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【专利技术属性】
技术研发人员：王光路，李乾，杨雪鹏，常晋，魏新铎，张展，杨金初，徐永明，
申请(专利权)人：郑州轻工业大学，
类型：发明
国别省市：