【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分析化学，涉及一种快速检测谷胱甘肽的试剂及方法。
技术介绍
1、谷胱甘肽(gsh)是一种由l-半胱氨酸、l-谷氨酰胺和甘氨酸组成的线性三肽，是细胞内最丰富的生物硫醇和必需的内源性抗氧化剂。gsh在生物系统中具有重要的功能，如减少细胞内的自由基、维持新陈代谢过程、防止机体中毒。gsh的异常水平与人类许多疾病密切相关，如肝损伤、心脏问题、帕金森和阿尔茨海默症等；此外，gsh作为氧化还原信号转导中的关键信号分子之一，在细胞增殖和分化、细胞凋亡中起着至关重要的作用，例如，gsh与癌症的发生、进展和转移广泛相关。肿瘤细胞中gsh的浓度会影响耐药性和治疗效果，因此，谷胱甘肽的实时检测可以为评估癌症治疗效果和药物开发提供有效的依据。
2、测定gsh含量的常用方法包括高效液相色谱(hplc)、电化学、电化学发光、表面增强拉曼散射(sers)、毛细管电泳(ce)、荧光检测等。hplc方法需要昂贵、精密的仪器，并且经常需要使用有毒有机溶剂作为流动相；而电化学和电化学发光方法需要电极修饰，且操作步骤复杂，以及容易受到相对较高背景信号的影响；sers方法通常预处理较复杂，需要较强的专业性，并且基衬重线性和稳定性难以控制；毛细管电泳由于毛细管直径小，使光路太短，灵敏度较低；然而荧光检测方法，由于不是所有的化合物在选择的条件下都能发生荧光，应用范围较窄，且在荧光测量过程中对一些干扰非常敏感，如背景荧光和猝灭效应等，对样品测定的影响程度较大。
3、因此，开发设备简单、低成本、准确、快速、能现场检测gsh的方法，对疾病预防
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于针对现有技术的不足，提供一种快速检测谷胱甘肽的试剂及方法。
2、本专利技术的一个目的通过以下技术方案来实现：
3、一种快速检测谷胱甘肽的试剂，包括季铵盐修饰的金四足锥纳米粒子溶液和二氧化锰纳米片溶液。
4、作为优选，所述季铵盐修饰的金四足锥纳米粒子溶液的浓度为0.1～100mg/l，所述二氧化锰纳米片溶液的浓度为0.1～50mg/l。
5、作为优选，季铵盐修饰的金四足锥纳米粒子的制备方法包括以下步骤：
6、s1、在季铵盐溶液中加入水溶性金盐或金酸溶液，然后加入还原剂溶液，进行第一次反应，得到金种子溶液；
7、s2、将季铵盐溶液、水溶性金盐或金酸溶液、含氮化合物溶液、多羟基化合物溶液混合，加入步骤s1制备的金种子溶液，在碱性条件下进行第二次反应，离心，得到季铵盐修饰的金四足锥纳米粒子。
8、作为优选，所述季铵盐为季铵盐型阳离子表面活性剂；
9、和或，所述水溶性金盐或金酸为氯化金、氯化亚金、氯金酸、氯金酸盐、溴金酸、溴金酸盐、碘金酸和碘金酸盐中的一种或多种；
10、和或，所述还原剂为硼氢化合物，包括硼氢化钠、硼氢化钾、硼氢化镁中的一种或多种；
11、和或，所述含氮化合物包括六亚甲基四胺、六甲基磷酰三胺和n-甲基吡咯烷酮中的一种或多种。
12、作为优选，第一次反应时间为1～50min，第二次反应时间为1～30min。
13、作为优选，二氧化锰纳米片的制备方法包括以下步骤：以具有氧化性的锰盐和磺酸类化合物为原料合成二氧化锰纳米片。
14、本专利技术的另一个目的通过以下技术方案实现：
15、一种快速检测谷胱甘肽的方法，基于上述试剂进行，包括以下步骤：
16、在水中加入二氧化锰纳米片溶液，然后第一次加酸调节ph＜7.0，孵育；再加入季铵盐修饰的金四足锥纳米粒子溶液，第二次加酸调节ph<7.0，静置反应，作为空白组；
17、在待测液中加入二氧化锰纳米片溶液，然后第一次加酸调节ph＜7.0，孵育；再加入季铵盐修饰的金四足锥纳米粒子溶液，第二次加酸调节ph<7.0，静置反应，作为实验组；
18、测试空白组和实验组的紫外-可见吸收光谱，以实验组的吸收峰波长与空白组的吸收峰波长的差值带入标准曲线的线性回归方程中，计算得到待测液中谷胱甘肽的浓度。
19、作为优选，第一次加酸调节ph为1.0～6.0。
20、作为优选，第二次加酸调节ph为1.0～6.0。
21、作为优选，孵育时间为2～5min，静置反应时间为15～30min。
22、作为优选，标准曲线的绘制包括以下步骤：
23、配置一系列不同浓度的谷胱甘肽溶液；
24、取多只试管分别加入水和上述不同浓度的谷胱甘肽溶液，然后分别加入二氧化锰纳米片溶液，第一次加酸调节ph＜7，孵育；最后分别加入季铵盐修饰的金四足锥纳米粒子溶液，第二次加酸调节ph＜7，静置反应，得到含有水的空白组和含有不同浓度谷胱甘肽的标准组；测试空白组和标准组的紫外-可见吸收光谱，以标准组的吸收峰波长与空白组的吸收峰波长的差值为纵坐标，谷胱甘肽浓度为横坐标，绘制标准曲线，获得线性回归方程。
25、与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：
26、1、本专利技术首次将季铵盐修饰的金四足锥纳米粒子溶液应用于谷胱甘肽的检测中，利用谷胱甘肽与二氧化锰纳米片反应生成二价锰离子，从而免于季铵盐修饰的金四足锥纳米粒子被二氧化锰纳米片刻蚀，可以直接通过裸眼观察溶液颜色的变化来实现谷胱甘肽的定性和半定量检测，或者利用紫外-可见吸收光谱数据获得谷胱甘肽的准确浓度；
27、2、本专利技术的检测试剂与谷胱甘肽反应非常灵敏，并且响应迅速，从而能实现谷胱甘肽的快速检测；
28、3、本专利技术的检测试剂具有较高的选择性，可选择性地与谷胱甘肽发生反应，其它常见的氨基酸以及阴阳离子的存在也不会干扰实验结果，抗干扰性强；
29、4、本专利技术的检测试剂中季铵盐修饰的金四足锥纳米粒子溶液和二氧化锰纳米片溶液的制备方法很简单，有利于商业化的推广应用；
30、5、本专利技术提供的检测方法灵敏度高、选择性好、不需要大型仪器、可实现实时实地快速检测，方法简单、快速、易操作、且价格低。
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1.一种快速检测谷胱甘肽的试剂，其特征在于，包括季铵盐修饰的金四足锥纳米粒子溶液和二氧化锰纳米片溶液。
2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述季铵盐修饰的金四足锥纳米粒子溶液的浓度为0.1～100mg/L，所述二氧化锰纳米片溶液的浓度为0.1～50mg/L。
3.根据权利要求1或2所述的试剂，其特征在于，季铵盐修饰的金四足锥纳米粒子的制备方法包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于，所述季铵盐为季铵盐型阳离子表面活性剂；
5.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于，第一次反应时间为1～50min，第二次反应时间为1～30min。
6.根据权利要求1或2所述的试剂，其特征在于，二氧化锰纳米片的制备方法包括以下步骤：以具有氧化性的锰盐和磺酸类化合物为原料合成二氧化锰纳米片。
7.一种快速检测谷胱甘肽的方法，其特征在于，基于权利要求1所述的试剂进行，包括以下步骤：
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，第一次加酸调节pH为1.0～6.0，第二次加酸调节pH为1.0～6.0。p>
9.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，孵育时间为2～5min，静置反应时间为15～30min。
10.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，标准曲线的绘制包括以下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种快速检测谷胱甘肽的试剂，其特征在于，包括季铵盐修饰的金四足锥纳米粒子溶液和二氧化锰纳米片溶液。
2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，所述季铵盐修饰的金四足锥纳米粒子溶液的浓度为0.1～100mg/l，所述二氧化锰纳米片溶液的浓度为0.1～50mg/l。
3.根据权利要求1或2所述的试剂，其特征在于，季铵盐修饰的金四足锥纳米粒子的制备方法包括以下步骤：
4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于，所述季铵盐为季铵盐型阳离子表面活性剂；
5.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于，第一次反应时间为1～50min，第二次反应时间为1～3...
【专利技术属性】
技术研发人员：张玉杰，王胜文，孙玉凤，吴爱国，
申请(专利权)人：中国科学院宁波材料技术与工程研究所，
类型：发明
国别省市：
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