一种用于区分中华猕猴桃和美味猕猴桃品种的识别方法技术

技术编号：41326790 阅读：4 留言：0更新日期：2024-05-13 15:04

本发明专利技术公开了一种用于区分中华猕猴桃和美味猕猴桃品种的识别方法。本发明专利技术的技术方案为：对品种未知的猕猴桃样本，结合液相色谱‑质谱联用仪（LC‑MS）代谢组学方法和电感耦合等离子体质谱（ICP‑MS）元素分析对猕猴桃果实中的精氨酸、脂肪酰胺C20:1和铁元素含量进行分析，得到（精氨酸/脂肪酰胺C20:1）/（Fe*100）的比值，通过二元逻辑回归，得到猕猴桃品种的判别公式及其判别概率P。P值越接近于1，猕猴桃是美味品种的概率越高，P值越接近于0，猕猴桃是中华品种的概率越高。本发明专利技术操作简单、检测结果可靠，可为猕猴桃品种鉴别的研究提供依据。

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【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分析化学领域，是一种用于区分中华猕猴桃和美味猕猴桃品种的识别方法。

技术介绍

1、代谢组学是继基因组学、转录组学和蛋白质组学之后迅速发展起来的一门新兴学科，是系统生物学的一重要分支。代谢组学可从代谢物层面来探究生命活动，通过分析内源性代谢物的变化及其与整体生物学状况的关系，寻找生物标记物，以反映生物体受外界刺激或基因修饰等引起的变化。在代谢组学研究中，往往采用多种检测方法以期尽可能地弥补单一检测技术对代谢物检测的局限性和偏向性，目前较多采用的代谢组检测技术有核磁共振波谱法（nmr）、气相色谱-质谱联用（gc-ms）技术和液相色谱-质谱联用（lc-ms）技术等。其中液相色谱-质谱联用（lc-ms）技术结合了液相色谱的高分离性能与质谱高灵敏度且能给出分子量和结构信息的优点，成为一种强有力的分离分析工具，在食品科学、化学、生命科学等领域得到了广泛的应用。该方法具有测定速度快、操作简单、定性和定量准确等特点。本专利技术通过lc-ms技术确定的精氨酸是猕猴桃中重要代谢物。研究表明精氨酸具有抗高血压的功效，能够降低血压、保护心血管、辅助治疗不孕症、促进伤口愈合、提高机体对疾病的免疫力等作用。

2、元素分析是研究有机化合物中元素组成的化学分析方法。目前，电感耦合等离子体质谱（icp-ms）法是微量元素分析技术中发展速度最快的，已被广泛地应用于微量元素的测定。该方法是一种将icp技术和质谱结合在一起的分析方法，能够同时测定几十种痕量无机元素，几乎包括元素周期表中所有金属元素及绝大部分非金属元素。与传统无机分析技术相比，

3、猕猴桃中含有丰富营养成分及微量元素，在市场中深受消费者喜爱。常见的猕猴桃品种包括中华猕猴桃和美味猕猴桃两大类，中华猕猴桃主要品种包括金桃、华优、红阳，其果实大小均匀，果面密布黄褐色茸毛。果肉有黄色及绿色，中华猕猴桃种植面积众多，广泛分布于陕西、河南、四川等地域，除了可直接新鲜食用外，中华猕猴桃还有多种药理活性，有较高的经济利用价值。而美味猕猴桃主要品种包括徐香、翠香、海沃德，果形较大，果肉为绿色，果皮为绿色或褐色且果面密布黄褐色长硬毛。营养丰富，味道香甜。广泛分布于甘肃、陕西、四川等地，种植面积大，受众广，且有利尿、清热等药用价值。

4、综上所述，中华和美味猕猴桃品种繁多，外观均为圆柱形且果大小均匀，味道香甜。消费者很难仅通过外形对猕猴桃的品种进行鉴别。目前对中华和美味猕猴桃的鉴别主要依靠经验丰富的果农从果实口感差异及表面绒毛软硬等感官层面进行判别，尚无高效、准确、快速鉴别中华和美味猕猴桃的科学判别方法。

技术实现思路

1、本专利技术的目的是要提供一种基于lc-ms代谢组学与icp-ms元素分析，结合二元逻辑回归分析方法区分中华猕猴桃和美味猕猴桃品种的方法。

2、为了达到上述目的，本专利技术提供的技术方案如下：

3、一种用于区分中华猕猴桃和美味猕猴桃品种的识别方法，通过液相色谱-质谱联用仪lc-ms代谢组学方法检测猕猴桃样品中精氨酸、脂肪酰胺 c20:1的含量，通过电感耦合等离子体质谱icp-ms元素分析检测猕猴桃样品中铁元素含量，计算（精氨酸/脂肪酰胺c20:1）/（fe*100）的比值，进行二元逻辑回归分析，得到回归方程y=69.28（d-精氨酸/脂肪酰胺c20:1）/（fe*100）−96.08，得出美味猕猴桃品种的判别公式及其判别概率p，p=1/（1+e-y），p值越接近于1，猕猴桃是美味品种的概率越高，p值越接近于0，猕猴桃是中华品种的概率越高。

4、基于lc-ms代谢组学检测猕猴桃中精氨酸和脂肪酰胺 c20:1的含量，具体包括以下步骤：

5、首先制备猕猴桃样品提取液，将去皮去籽的猕猴桃样品用高速粉碎机进行粉碎，置于冷冻干燥机干燥成粉；称取50mg样品于离心管中，加入1.5ml浓度为80%的甲醇水，涡旋5min，在4℃下，以14000r·min -1 转速离心10min，取500μl上清液于冷冻离心浓缩仪中冻干。然后采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道肼高分辨质谱的代谢组学分析方法对猕猴桃样品中的精氨酸和脂肪酰胺 c20:1进行相对定量分析。

6、所述液相色谱的检测条件为：采用dionexultimate3000uplcsystem系统和色谱柱c8aquity进行lc分离；所用流动相为：流动相a为含0.1%甲酸的水溶液，流动相b为含0.1%甲酸的乙腈溶液；流速：0.35ml/min；柱温：50℃；进样体积：5-10μl；进样室温度：4℃；梯度洗脱条件为：0-24min，95%a；24-28.1min，0%a；28.1-30min，95%a，总洗脱时间为30min；

7、所述质谱的检测条件为：uhplc系统经电喷雾离子化源与q exactive orbitrap质谱相连；分别采用正、负离子模式采集数据，鞘气35arb，辅助气5arb，毛细管电压3 kv，离子传输管温度为320℃；质谱全扫模式下，仪器分辨率设置为120000，扫描范围为80-1200 m/z，阶梯碰撞能量：15、30、45 ev。

8、基于icp-ms元素分析检测猕猴桃中铁元素的含量，具体包括以下步骤：

9、首先采用微波消解-电感耦合等离子质谱icp-ms，按照浓度由低到高的顺序，对铁元素的标准溶液进行分析并绘制出标准曲线；然后对猕猴桃样品提取液进行icp-ms分析，根据标准曲线，确定猕猴桃样品中铁元素的含量；

10、基于icp-ms元素分析检测中华猕猴桃与美味猕猴桃中铁元素的含量，所述猕猴桃样品提取液的制备方法为：

11、将猕猴桃样品打浆，放入冷冻干燥机中干燥成粉；精密称取0.15g样品粉末于聚四氟乙烯消解罐中，加入浓硝酸6ml，轻轻振荡后混匀置微波消解仪内，按照设定的消解程序消解：前10min进行功率爬坡至800w，维持5min，再经15min功率爬坡至1500w，维持30min；消解完成后，消解液冷却至＜70℃，加少量超纯水溶解并转移至100ml容量瓶中定容，得待测溶液，取3ml的待测溶液。

12、所述icp-ms的检测条件为：射频功率为1600w，等离子体氩气体积流量18l/min，载气体积流量0.94l/min，辅助气体积流量1.2l/min，雾化器类型meinhard，滞留时间50ms；

13、采用碰撞模式kenetic-energy discrimination进行测试，氦气流量设置为3.7ml/min；

14、ic本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于区分中华猕猴桃和美味猕猴桃品种的识别方法，其特征在于:

2.根据权利要求1所述的一种用于区分中华猕猴桃和美味猕猴桃品种的识别方法，其特征在于:

3.然后采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道肼高分辨质谱的代谢组学分析方法对猕猴桃样品中的精氨酸和脂肪酰胺 C20:1进行相对定量分析。

4.根据权利要求2所述的一种用于区分中华猕猴桃和美味猕猴桃品种的识别方法，其特征在于:

5.根据权利要求1所述的一种用于区分中华猕猴桃和美味猕猴桃品种的识别方法，其特征在于:

6.根据权利要求5所述的一种用于区分中华猕猴桃和美味猕猴桃品种的识别方法，其特征在于:

【技术特征摘要】

1.一种用于区分中华猕猴桃和美味猕猴桃品种的识别方法，其特征在于:

2.根据权利要求1所述的一种用于区分中华猕猴桃和美味猕猴桃品种的识别方法，其特征在于:

3.然后采用超高效液相色谱-四极杆/静电场轨道肼高分辨质谱的代谢组学分析方法对猕猴桃样品中的精氨酸和脂肪酰胺 c20:1进行相对定...

【专利技术属性】
技术研发人员：房子怡，赵燕妮，燕美如，武璇，邵婷，刘欢，
申请(专利权)人：陕西科技大学，
类型：发明
国别省市：

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