【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物，尤其涉及秀丽隐杆线虫在构建检测抗生素和金属离子联合毒性的动物模型中的应用。
技术介绍
1、抗生素是一种可以抑真菌、细菌、病原体等微生物生长和活动的药物。由于其出色的性能已经被广泛应用于人类各种感染的治疗和预防养殖业中牲畜疾病等领域。经过近百年的发展，科学家已经开发出数万种抗生素的生产与使用方法，为公共卫生安全做出了巨大贡献。然而抗生素长期广泛的使用以及其低生物降解性的特点，人们也发现药物残留的问题。其在畜禽粪便、水产养殖业沉积物和土壤中被频繁检出，对环境产生了巨大的安全隐患。因此，研究抗生素对环境生物的影响具有重要的现实意义。
2、其中合成类抗生素-氟喹诺酮类(fqs)药物具有广谱抗菌性、生产效率高等优点已经被世界卫生组织列为至关重要的抗生素类，其已被证实会对线虫的生长发育、斑马鱼心血管健康等产生消极影响。环丙沙星(cip)作为第三代fqs药物常被用于治疗皮肤和呼吸道感染，是一种白色结晶粉末微溶于水易溶于稀盐酸中，因此常制备成盐酸环丙沙星。由于其持续的使用和不完备的管理标准，cip已经在地表水、沉积物尤其是医院废水中检测出毫克/升级别的残留。已有文献表明，cip在水稻、果蝇和浮萍中展现出不同程度毒性，但是关于其对土壤线虫的毒性鲜有报道。
3、同时镍作为地壳中含量相对丰富的过渡金属元素广泛存在于土壤、水和空气中。由于其出色的物理化学性质，镍在现代工商业制造领域有着广泛的应用，例如精炼、焊接；尤其是在可循环镍镉电池制造以及电镀行业中。但是在镍矿的开采冶炼、合金制造加工、含镍燃料燃烧排放物和
4、鉴于cip和镍在日常生产生活中扮演的重要角色，其在环境中共存的概率不容忽视。已有证据表明高浓度的镍离子和环丙沙星已经在医院废水、溪流和河水中检测出。同时在农业灌溉：水-沉积物-土壤-植物系统中也有迹象表明镍和环丙沙星共存的现象。
5、目前，尚无文章提出用秀丽隐杆线虫(caenorhabditis elegans)为研究模型，在生长和生殖方面对镍离子和环丙沙星的联合毒性作用进行评价。
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提供了秀丽隐杆线虫在构建检测抗生素和金属离子联合毒性的动物模型中的应用。本专利技术以秀丽隐杆线虫作为模式生物，提供的检测联合毒性动物模型构建方法简单快捷，成本低廉，试验周期短，重复性好，对自然环境下抗生素和金属离子联合毒性及其具体作用方面提供了技术支持，具有实际应用价值。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术提供了秀丽隐杆线虫在构建检测抗生素和金属离子联合毒性的动物模型中的应用。
4、在本专利技术的一些实施方案中，上述应用中，所述抗生素包括：环丙沙星；所述金属离子包括：镍离子。
5、在本专利技术的一些实施方案中，上述应用中，所述抗生素的浓度为20μm；所述环丙沙星的浓度为300～500μm。
6、在本专利技术的一些实施方案中，上述应用中，所述抗生素的浓度为20μm；所述环丙沙星的浓度为300μm或500μm。
7、本专利技术还提供了动物模型的构建方法，包括如下步骤：
8、s1：取野生型秀丽隐杆线虫培养，怀卵后，裂解，获得虫卵；
9、s2：取所述虫卵培养后，获得l1期线虫；
10、s3：取所述l1期线虫暴露于待测样品中，获得所述动物模型；
11、所述待测样品含有：抗生素和/或金属离子。
12、在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中，所述抗生素包括：环丙沙星；所述金属离子包括：镍离子。
13、在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中，所述抗生素的浓度为20μm；所述环丙沙星的浓度为300～500μm。
14、在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中，所述抗生素的浓度为20μm；所述环丙沙星的浓度为300μm或500μm。
15、在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中，所述裂解采用裂解液；所述裂解液包括：氢氧化钠溶液和次氯酸钠溶液；所述氢氧化钠溶液和所述次氯酸钠溶液的体积比为1:(0.1～10)。
16、在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中，所述氢氧化钠溶液和所述次氯酸钠溶液的体积比为1:4。
17、在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中，所述氢氧化钠溶液的浓度为0.5～5mol/l。
18、在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中，所述氢氧化钠溶液的浓度为0.5mol/l。
19、在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中，所述裂解的时间为18～22h。
20、在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中，所述暴露的时间为66～72h。
21、在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中，所述暴露采用培养基；所述培养基包括：k液和大肠杆菌；
22、所述k液包括：1～4g/l的kcl和1～4g/l的nacl。
23、在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中，所述k液包括：2～3g/l的kcl水溶液和/或2～3g/l的nacl水溶液。
24、在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中，所述大肠杆菌为：尿嘧啶缺陷型大肠杆菌e.coli op50。
25、在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中，当待测样品含有抗生素和金属离子时，为联合暴露组；当待测样品含有抗生素或金属离子时，为单独暴露组；当待测样品不含抗生素和/或金属离子时，为实验对照组。
26、在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法还包括：检测所述野生型秀丽隐杆线虫的生长指标、运动神经指标、生殖能力指标和性腺发育指标的步骤。
27、在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中，所述生长指标包括：体长和/或摄食率。
28、在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中，检测所述体长包括如下步骤：l1期秀丽线虫暴露72h后，收集线虫并清洗，将线虫置于60℃下水浴10min，取出线虫转移至固体培养基，用ccd相机通过体视显微镜捕获线虫图片，使用image j对线虫成虫体长进行测定，从线虫头部出发，沿其身体中线画折线，至线虫尾部止，折线总长即为线虫体长；
29、所述固体培养基可以为ngm培养基，其具体组成为：400ml去离子水，1.2gnacl，6.8g琼脂，1g蛋白胨，10mlk3po4缓冲溶液(100ml去离子水，10.83gkh2po4，4.66gk2hpo4·3h2o)，0.4ml 1m cacl，0.4ml1m mgso4，0.4ml 5mg/ml胆固醇的乙醇溶液。
30、在本专利技术的一些实施方案中，上述构建方法中，检测所述摄食率包括如下步骤：记本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.秀丽隐杆线虫在构建检测抗生素和金属离子联合毒性的动物模型中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗生素包括：环丙沙星；所述金属离子包括：镍离子。
3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述抗生素的浓度为20μM；所述环丙沙星的浓度为300～500μM。
4.动物模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
5.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述抗生素包括：环丙沙星；所述金属离子包括：镍离子。
6.如权利要求4或5所述的构建方法，其特征在于，所述抗生素的浓度为20μM；所述环丙沙星的浓度为300～500μM。
7.如权利要求4至7任一项所述的构建方法，其特征在于，所述裂解采用裂解液；所述裂解液包括：氢氧化钠溶液和次氯酸钠溶液；所述氢氧化钠溶液和所述次氯酸钠溶液的体积比为1:(0.1～10)。
8.如权利要求3至7任一项所述的构建方法，其特征在于，还包括：检测所述野生型秀丽隐杆线虫的生长指标、运动神经指标、生殖能力指标和性腺发育指标的步骤。
9.如权利要求
10.如权利要求9所述的动物模型在检测抗生素和金属离子联合毒性中的应用。
...【技术特征摘要】
1.秀丽隐杆线虫在构建检测抗生素和金属离子联合毒性的动物模型中的应用。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述抗生素包括：环丙沙星；所述金属离子包括：镍离子。
3.如权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述抗生素的浓度为20μm；所述环丙沙星的浓度为300～500μm。
4.动物模型的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
5.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述抗生素包括：环丙沙星；所述金属离子包括：镍离子。
6.如权利要求4或5所述的构建方法，其特征在于，所述抗生素的浓度为20...
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