【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及类花生酸在用于评估急性冠脉综合征患者血运重建术后发生不良心血管事件风险中的应用。
技术介绍
1、急性冠脉综合征（acute coronary syndrome，acs）是心肌血液供应突然减少所致的心脏急性不良综合征。血运重建治疗（包括经皮冠状动脉介入治疗）和冠状动脉旁路移植手术的发展使更多的acs患者获益，但是约10%的acs患者血运重建术后3年内仍发生死亡和复发性缺血性事件。因此，预测acs患者血运重建后不良心血管事件发生风险，对改善患者预后具有重要意义。
2、目前已有风险评分机制对acs患者进行危险分层，但这些评分机制未涵盖一些与acs患者再发事件相关的标志物，未能识别acs患者血运重建术后发生不良事件的残余风险，因此需要有新的生物标志物协助对acs患者血运重建术后的风险进行全面评估。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供类花生酸在用于评估急性冠脉综合征患者血运重建术后发生不良心血管事件风险中的应用。
2、第一方面，本专利技术提供了类花生酸、检测类花生酸的产品或类花生酸作为标志物在制备用于评估acs患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的产品中的应用；所述类花生酸为15-羟基二十碳四烯酸和/或14,15环氧二十碳三烯酸。
3、所述acs患者是指，以2019年中华医学会发布的acs诊断和治疗指南为依据，由于心肌血液供应突然减少所致的心脏急性缺血综合征患者。
4、所述不良心血管事件风险是指，acs血
5、所述应用中，所述类花生酸的含量与acs患者血运重建术后发生不良心血管事件风险成正比。
6、所述评估包括：
7、1）如果单个acs患者体内的类花生酸的含量高于预设阈值，则评估所述acs患者在血运重建术后发生不良心血管事件的风险高；或，
8、2）如果存在多个acs患者，则评估类花生酸含量高的acs患者在血运重建术后发生不良心血管事件的风险高于类花生酸含量低的acs患者。
9、第二方面，本专利技术提供一种筛选用于评估acs患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的标志物的方法，包括如下步骤：
10、1) 获取来自acs患者的生物样品，对生物样品进行前处理；
11、2) 利用lc-ms/ms法检测经前处理的生物样品中的各类花生酸水平；优选地，所述各类花生酸包括花生四烯酸(arachidonic acid，ara)，二十碳五烯酸(eicosapentaenoicacid，epa)，二十二碳五烯酸(docosapentaenoic acid，dpa)，二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid，dha)以及它们各自的衍生物；
12、3) 将所述acs患者根据无不良心血管事件发生分为事件组和非事件组，将在事件组中的含量水平统计学显著地高于非事件组的类花生酸作为候选标志物；
13、4) 利用受试者工作特征（roc）曲线分析，获得每个候选标志物的截止值，将所有患者分为高于截止值的高水平组和低于截止值的低水平组；
14、5) 再比较高水平组和低水平组中的患者之间发生不良心血管事件的发生率，使用多因素cox回归分析，经过多因素校正后，其中高水平组发生主要终点事件风险统计学显著地高于低水平组的类花生酸，被确定为用于评估acs患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的标志物。
15、所述生物样品为体液样品，选自尿液样品、浆膜腔积液样品、血液样品、血清样品、血浆样品或由此获得的血液脂质部分或血液脂蛋白部分。
16、所述类花生酸具体如下。
17、
18、
19、
20、所述用于评估acs患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的标志物为15-hete和/或14,15-dhet。
21、所述主要终点事件包括全因死亡、非致死性心肌梗死和非计划内的血运重建中的任一种或多种，或其任意组合。
22、第三方面，本专利技术提供一种检测生物样品中类花生酸含量的方法，包括如下步骤：
23、（1）对生物样品进行前处理；
24、（2）使用lc-ms/ms法检测经前处理的生物样品中类花生酸；
25、（3）根据标准曲线方程，计算得到类花生酸含量。
26、步骤（1）中，所述前处理按照下述操作进行：将生物样品中加入乙腈、内标工作液、含bht的乙醇溶液，涡旋混匀；4℃、14000 r/min 离心15 min；取上清液，吹干；将吹干后样本加入50%甲醇溶液复溶，涡旋混匀；4℃、14000 r/min离心5 min；取上清液，待测。
27、所述内标工作液的配制按照下述操作进行：取6-keto-pgf1a-d4、pge2-d4、ltb4-d4、11,12-dhet-d11、20-hete-d6、5-hete-d8、8,9-eet-d11、epa-d5、dha-d5、ara-d8内标液各10μl，共计100μl，加入100μl50%甲醇溶液[h2o：纯甲醇=1：1（体积比）]，配置得到内标工作液。其中，ara-d8内标液的浓度为100μg/ml，其余内标液的浓度为10μg/ml，对应得到的其余内标工作液浓度为500ng/ml，ara-d8内标工作液浓度为5μg/ml。
28、所述含bht的乙醇溶液的配制按照下述操作进行：称量100mgbht粉末，将其与10ml乙醇混合，振荡混匀。
29、步骤（2）中，所述检测的条件为：
30、色谱柱：c18；
31、流动相a：0.1%乙酸-水；
32、流动相b：乙腈：异丙醇的混合体积比为9:1；
33、流速：0.6 ml/min；
34、洗脱梯度：
35、
36、步骤（3）中，所述标准曲线的建立按照下述操作进行：通过类花生酸外标/内标的峰面积比对实际浓度作图，构建得到各类花生酸对应的标准曲线。
37、步骤（3）中，所述标准曲线建立使用的内标物选自6-keto-pgf1a-d4、pge2-d4、ltb4-d4、11,12-dhet-d11、20-hete-d6、5-hete-d8、8,9-eet-d11、epa-d5、dha-d5、ara-d8。
38、步骤（3）中，所述标准曲线建立使用的梯度浓度标准溶液为15个浓度：0.005ng/ml、0.01ng/ml、0.02ng/ml、0.05ng/ml、0.1ng/ml、0.2ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、2ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml（其中epa、ara和dha浓度为0.05ng/ml、0.1ng/ml、0.2ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、2ng/ml、5ng/ml、本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.类花生酸、检测类花生酸的产品或类花生酸作为标志物在制备用于评估ACS患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的产品中的应用；
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述ACS患者是指由于心肌血液供应突然减少所致的心脏急性缺血综合征患者；
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述评估包括：
4.一种筛选用于评估ACS患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的标志物的方法，包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述用于评估ACS患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的标志物为15-HETE和/或14,15-DHET；
6.一种检测生物样品中类花生酸含量的方法，包括如下步骤：
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，步骤（1）中，所述前处理按照下述操作进行：将生物样品中加入乙腈、内标工作液、含BHT的乙醇溶液，涡旋混匀；4℃、14000 r/min离心15 min；取上清液，吹干；将吹干后样本加入50%甲醇溶液复溶，涡旋混匀；4℃、14000r/min离心5 min；取上清液，待
8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，步骤（2）中，所述LC-MS/MS法检测的条件为：
9.一种用于评估ACS患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的试剂盒，所述试剂盒包括检测类花生酸含量的产品；
10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述产品为用于检测来自ACS患者的生物样品中的类花生酸含量的试剂；
...【技术特征摘要】
1.类花生酸、检测类花生酸的产品或类花生酸作为标志物在制备用于评估acs患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的产品中的应用；
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述acs患者是指由于心肌血液供应突然减少所致的心脏急性缺血综合征患者；
3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述评估包括：
4.一种筛选用于评估acs患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的标志物的方法，包括如下步骤：
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述用于评估acs患者血运重建术后发生不良心血管事件风险的标志物为15-hete和/或14,15-dhet；
6.一种检测生物样品中类花生酸含量的方法，包括如下步骤：
...【专利技术属性】
技术研发人员：杜杰，王媛，檀鑫，倪慧，马璋琳，
申请(专利权)人：北京市心肺血管疾病研究所，
类型：发明
国别省市：
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