一种基因枪介导杂交狗牙根遗传转化的方法技术

本发明专利技术公开了一种基因枪介导杂交狗牙根遗传转化的方法。本发明专利技术以杂交狗牙根的匍匐茎为外植体，消毒灭菌后进行愈伤组织的诱导，通过诱导愈伤成熟，筛选出黄色松脆型胚性愈伤组织为受体。按基因枪介导的遗传转化方法利用含有目的基因的轰击所得的胚性愈伤组织，依次进行预培养、轰击转化、恢复培养、筛选培养、分化培养及幼苗移栽，依次完成杂交狗牙根的遗传转化。经GUS染色和PCR验证，利用本发明专利技术的方法可成功实现将目的基因转入杂交狗牙根，3天时瞬时转化效率最高可达87.5％，阳性植株的遗传转化率为7.5％。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物遗传转化，尤其涉及一种基因枪介导杂交狗牙根遗传转化方法。

技术介绍

1、杂交狗牙根(cynodondactylon×c.transvaalensis)具有低矮致密，质地细腻等优点，是应用最广泛的暖季型草坪草之一。在自然环境中，草坪草经常受到包括干旱、盐胁迫、高温、低温等非生物的胁迫的不良影响，培育抗逆性强的草坪草种有重要意义。杂交狗牙根遗传背景复杂，且由于倍性不能产生种子，只能采用无性繁殖，给传统杂交育种带来严重限制。因此，利用基因工程对现有品种进行改良尤为重要。但由于基因型的限制，且不同品种的杂交狗牙根体细胞胚诱导不一致，愈伤的再生率和转化率低，使得杂交狗牙根的基因功能研究和品种改良较为困难。因此，建立起有效的杂交狗牙根遗传转化体系具有重要意义。

2、遗传基因枪转化法又叫粒子轰击法，是一种直接递送方法。应用基因枪介导的遗传转化方法已在多种草坪草中获得了成功。该方法通过机械过程可将外源基因直接递送至活体细胞内，其有操作简洁，受体选择较为宽泛等优点，相较于农杆菌介导的遗传转化，不仅避免了农杆菌的污染，还不受植物基因型的限制。但不本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基因枪介导杂交狗牙根遗传转化的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述遗传转化的方法，其特征在于，所述步骤(1)中轰击参数为真空度为25-28in.Hg，射击距离为6.0-9.0cm，轰击次数为1-2次。

3.根据权利要求1所述遗传转化的方法，其特征在于，所述步骤(1)中杂交狗牙根在轰击前还包括在高渗培养基中进行预培养。

4.根据权利要求3所述遗传转化的方法，其特征在于，所述高渗培养基为向MS培养基中添加0.5-4.0mg/L 2,4-D、0.1-0.5mg/LNAA、0.1-1.0mg/L 6-BA、1.0-5.0mg/LAg...

【技术特征摘要】

1.一种基因枪介导杂交狗牙根遗传转化的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述遗传转化的方法，其特征在于，所述步骤(1)中轰击参数为真空度为25-28in.hg，射击距离为6.0-9.0cm，轰击次数为1-2次。

3.根据权利要求1所述遗传转化的方法，其特征在于，所述步骤(1)中杂交狗牙根在轰击前还包括在高渗培养基中进行预培养。

4.根据权利要求3所述遗传转化的方法，其特征在于，所述高渗培养基为向ms培养基中添加0.5-4.0mg/l 2,4-d、0.1-0.5mg/lnaa、0.1-1.0mg/l 6-ba、1.0-5.0mg/lagno3、30.0-35.0g/l蔗糖、30-35.0g/l甘露醇和7.0-8.0g/l琼脂，ph为5.6-6.0。

5.根据权利要求1所述遗传转化的方法，其特征在于，所述步骤(2)中继代培养基为向ms培养基中添加0.5-4.0mg/l 2,4-d、0.1-0.5mg/lnaa、0.1-0.5mg/l 6-ba、1.0-5.0mg/lagno3、30.0-35.0g/l蔗糖和7.0-8.0g/l琼脂，ph为5.6-6.0。

6.根据权利要求1所述遗传转化的方法，其特征在于，所述高渗培养基和继代培养基中还需添加浓度为10...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨志民，韩鹏，于景金，何法慧，刘君，陈煜，庄黎丽，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：