【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种表面增强拉曼检测，特别涉及一种水凝胶微球固相萃取-sers用于人血清中氨茶碱的治疗药物监测方法。
技术介绍
1、氨茶碱（amp）是一种非选择性磷酸二酯酶抑制剂，具有增强膈肌收缩力、舒张支气管平滑肌、增强心脏收缩力等功能。在哮喘、喘气性支气管炎和心源性哮喘等呼吸系统疾病治疗方面有重要作用。由于amp的治疗浓度和中毒浓度比较相近，通常有效血药浓度为10-20 µg/ml，超过20 µg/ml时，会导致严重的中毒反应。因此，临床上常需对其进行治疗药物监测（tdm），确定个体给药方案，避免发生毒副反应。
2、治疗药物监测（tdm），即通过高灵敏性的现代分析技术对生物样本中药物浓度进行定量分析，确定药物有效治疗浓度范围，以实现给药方案个体化。目前，对氨茶碱常用tdm方法有高效液相色谱法、免疫层析试纸、分光光度法，这些方法虽然灵敏、准确，但样品前处理繁琐、样品消耗多、分析时间长、耗费人力等。因此，一种选择性好、简单、快速、灵敏的tdm方法非常重要。
3、表面增强拉曼散射(surface-enhanced raman scattering，sers)是一种快速无损、灵敏的“指纹”分析技术，因具有高灵敏度、样品前处理简单、快速响应等优势被广泛应用于生物医药、食品检测、环境检测等领域。目前，贵金属纳米颗粒（nmnps）是最常用的sers基底，特别是金、银纳米粒子，具有尺寸可控、制备简单等优点。然而单纯的nmnps具有很高的表面能，极易发生团聚、导致后续分析结果重复性差。因此，将金属纳米粒子负载在合适的载体
4、微凝胶（microgel）是指尺寸在几百到一千纳米的水凝胶，是由化学键或物理相互作用交联的三维高分子网络，它与溶剂充分亲和、溶胀但是不溶解，具有粒径小、比表面积大、生物相容性好等特点，已在药物输送与可控释放、微反应器、医学诊断及生物传感器等许多领域呈现出良好的应用前景。
5、用微凝胶作为载体可以避免贵金属纳米粒子（nmnps）发生团聚，使其均匀分散在微凝胶的三维网孔内。liu等人通过原位还原的方法将agnps负载于pnipam微凝胶的三维网孔中，制备了ag@pnipam杂化微凝胶，将其用作温控催化活性的研究；khan等人通过沉淀聚合法制备了p(nipam-co-aaac)微凝胶，然后在p(nipam-co-aaac)微凝胶中原位还原合成银纳米颗粒。将制备得到的ag@ (nipam-co-aaac)杂化微凝胶做为催化剂，在不同的温度、催化剂用量、硼氢化钠(nabh4)浓度和水溶液中nb浓度条件下还原nb为苯胺(ab)；此外，该微凝胶可以将更多的sers“热点”嵌入网孔内部，提高sers检测的灵敏度；sun等人通过微流体方法，制备了负载aunps的水凝胶微球，将其作为sers基底用于全血中葡萄糖和牛奶中的三聚氰胺的检测，同时证明了该水凝胶微球具有尺寸选择性渗透性，可以排除血液和牛奶中的大分子，并允许小分子扩散进入。
6、目前未见有采用该水凝胶微球作为样品固相萃取吸附剂及sers基底用于人血清中氨茶碱的治疗药物监测。
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是：提供一种水凝胶微球固相萃取-sers用于人血清中氨茶碱的治疗药物监测方法，该方法制备了ag@pnipam杂化微凝胶作为sers基底，采用该sers基底进行样品的预处理和sers分析，该方法具有快速、灵敏、重现性好、样品预处理简单等优点。
2、解决上述技术问题的技术方案是：一种水凝胶微球固相萃取-sers用于人血清中氨茶碱的治疗药物监测方法，包括以下步骤：
3、a、pnipam微凝胶的制备：取1.00g单体n-异丙基丙烯酰胺（nipam）、0.13-0.20g交联剂n，n’-亚甲基双丙烯酰胺（mba）溶解于50-55 ml去离子水中，搅拌至完全溶解；氮气脱氧25-35 min后加热到67-75℃平衡10-20 min，然后加入溶解于10 ml去离子水中的0.20-0.30g过硫酸钾（kps），以引发自由基聚合反应；在n2气氛下于67-75℃恒温反应5.5-6.5 h；反应结束后冷却至室温，所得产物为乳白色的微凝胶水分散液；离心并用去离子水清洗，以去除未反应的单体、交联剂和引发剂，得到纯净的pnipam微凝胶水分散液；
4、b、ag@pnipam杂化微凝胶的制备：取2.0g pnipam微凝胶水分散液，稀释45-55倍后进行超声分散；在n2条件下，将0.01-0.03g agno3充分溶于微凝胶水分散液中，25-35℃温度下平衡25-35min，使得ag+能够充分扩散进入到微凝胶内；25-35min后，然后加入溶解于5ml去离子水中的0.04-0.08g的nabh4，在n2条件于25-35℃下恒温反应0.8-1.2h，所得产物为棕黄色杂化微凝胶分散液；离心并用去离子水清洗，以去除未进入微凝胶中的和其它残留的反应物，即得到纯净的ag@pnipam杂化微凝胶水分散液；
5、c、sers检测：以合成的ag @pnipam杂化微凝胶作为固相萃取吸附剂，吸附和富集血清中的amp，然后进行sers测量。
6、进一步的，步骤c的具体操作为：
7、c1、取不同浓度的18-22 µl氨茶碱标准溶液与等体积ag@pnipam杂化微凝胶水分散液超声混合，经过离心后，去掉上清液，将剩余部分滴在干净的硅晶片上，室温晾干后进行sers检测，绘制氨茶碱标准曲线；
8、c2、样品检测：取18-22 µl待测样品人血清与等体积ag@pnipam杂化微凝胶水分散液超声混合，经过离心后，去掉上清液，将剩余部分滴在干净的硅晶片上，室温晾干后进行sers检测，通过氨茶碱标准曲线计算得到人血清中氨茶碱的浓度。
9、进一步的，步骤c1中超声混合时间为5-15 min。
10、进一步的，所述氨茶碱标准曲线为： i(572 cm-1)=864.5·log[ amp]+484.09，r2=0.9947。
11、本专利技术采用n-异丙基丙烯酰胺为单体，n，n’-亚甲基双丙烯酰胺为交联剂，以水相沉淀聚合法制备了pnipam微凝胶，并通过原位还原法在其三维网孔负载ag纳米粒子（agnps），制备得到ag@pnipam杂化微凝胶。该微凝胶具有孔径可调的三维网状结构，表现出生物相容性好及比表面积较大等优点，可以用作复杂基体中目标分子的固相萃取吸附剂及sers基底，进行样品的预处理和sers分析，从而提高sers的检测灵敏度。该sers基底的优势在于：（1）由于ag原子与微凝胶中pnipam的-conh-基团会发生相互作用，使得agnps能够稳定地分散在微凝胶的网状结构中，有效防止agnps的聚集，形成稳定的ag@pnipam杂化微凝胶；（2）该微凝胶相邻的三维网状结构内agnps产生表面等离子体的耦合作用，使agnps表面电磁场得到本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种水凝胶微球固相萃取-SERS用于人血清中氨茶碱的治疗药物监测方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的水凝胶微球固相萃取-SERS用于人血清中氨茶碱的治疗药物监测方法，其特征在于：步骤C的具体操作为：
3.根据权利要求2所述的水凝胶微球固相萃取-SERS用于人血清中氨茶碱的治疗药物监测方法，其特征在于：步骤C1中超声混合时间为5-15 min。
4.根据权利要求2或3所述的水凝胶微球固相萃取-SERS用于人血清中氨茶碱的治疗药物监测方法，其特征在于：所述氨茶碱标准曲线为：I(572 cm-1)=864.5·log[AMP]+484.09，R2=0.9947。
【技术特征摘要】
1.一种水凝胶微球固相萃取-sers用于人血清中氨茶碱的治疗药物监测方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的水凝胶微球固相萃取-sers用于人血清中氨茶碱的治疗药物监测方法，其特征在于：步骤c的具体操作为：
3.根据权利要求2所述的水凝胶微球固相萃取-sers用于人血清...
【专利技术属性】
技术研发人员：冯军，孔红星，李利军，王英，程昊，黄文艺，陈瑞珏，周沛，唐婷范，
申请(专利权)人：广西科技大学，
类型：发明
国别省市：
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