【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体地，涉及一种利用环孢菌素a构建长期免疫功能低下小鼠模型的方法。
技术介绍
1、环孢菌素a(cyclosporine a，csa)，是一种分子量为1203da的环十一肽，于1976年偶然在土壤真菌中分离得到，由于其对肾移植患者的巨大免疫抑制功能，被美国食品和药物管理局(fda)允许用于临床使用。迄今，csa不仅作为一种免疫抑制药物被广泛应用于预防或减少器官移植手术后的排斥反应，而且还是牛皮癣，干眼病，再生障碍性贫血等疾病的重要药物。
2、在基础研究中，通常利用csa的副作用构建动物疾病模型，其在小鼠、大鼠以及兔身上使用非常广泛。理想的动物模型，除了能构建出目的疾病模型以外，还要关注构建方法是否稳定可靠，是否易于复制，是否容易导致大量动物死亡从而影响后续实验。人体和大鼠实验显示，给药后24小时，血浆中的活性csa极低。小鼠实验显示，摄入csa24小时后，肠道基本没有完整的csa。由此可见，csa代谢速度快，在24小时便基本代谢完毕，需及时补充剂量。现有的csa动物模型大多采取连续多天给药或短期隔间给药的方式，但未有研究者进行稳定的长期给药模型方法的探索。连续多天给药容易引起动物免疫功能过于脆弱而引起大量动物死亡，不适用于需要长期给药的动物模型，频繁的活体实施操作对动物的生理心理造成负面影响，也增加了实验人员的工作量；短期间隔给药方法则大多采取间隔注射3次，实现快速的小鼠免疫低下模型构建，但对于需要诱导肿瘤发生、建立长期细菌感染模型等实验时长较长者则不适用。
3、此外，常规实验室条件
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种利用环孢菌素a构建长期免疫功能低下小鼠模型的方法及其制备工艺，制备非接触式抗菌颗粒用于小鼠的安抚和抗抑郁，同时减少环境中的细菌，降低小鼠死亡率，同时降低小鼠抑郁导致的体重降低或激素水平变化，从而减少对免疫数据的影响。对实验小鼠进行归化处理，选择适宜归化小鼠，在22±2℃温度下给予维持饲料饲养，在环境中置放非接触式抗菌颗粒，实施光照-黑暗昼夜交替循环，在笼内可随意摄取食物和水，腹腔注射环孢菌素a药物，即得长期免疫功能低下小鼠模型，降低热因素和环境因素对小鼠免疫系统的影响。
2、解决了现有技术中存在的动物死亡率高，实验人员工作量大，实验数据受热因素、环境因素、动物的心理健康等方面影响数据的准确性。
3、本专利技术的目的可以通过以下技术方案实现：
4、一种利用环孢菌素a构建长期免疫功能低下小鼠模型的方法，包括以下步骤：
5、(1)制备非接触式抗菌颗粒；
6、(2)对实验小鼠进行归化处理，得到归化小鼠；
7、(3)选择适宜归化小鼠，在25.5℃-27.6℃温度下给予维持饲料饲养，在环境中置放非接触式抗菌颗粒，实施光照-黑暗昼夜交替循环，在笼内可随意摄取食物和水，腹腔注射环孢菌素a药物，即得长期免疫功能低下小鼠模型。
8、进一步地，非接触式抗菌颗粒由以下步骤制得：
9、将2.0g复合植物精油溶解在10ml乙醇中，以50rpm速率搅拌5分钟后，逐滴加入0.1％(w/v)酪蛋白酸钠溶液中，同时以10000rpm速率进行均质乳化，随后加入0.1％(w/v)阿拉伯树胶，使用hcl溶液将体系ph值调节至1，再次以10000rpm速率均质5分钟后，进行高压均质，得到抗菌乳液；
10、将抗菌乳液至于-80℃下冷冻24小时，随后置于冷冻干燥机中干燥48小时，即得非接触式抗菌颗粒。
11、进一步地，所述复合植物精油由柑橘精油、丁香精油、茶树精油和尤加利精油以5：2：1：1的质量比混合得到的。
12、进一步地，归化小鼠由以下步骤制得：
13、a1、选择健康的野生小鼠，采集其新鲜粪便，得到野生小鼠粪便；
14、a2、将年龄5-6周的实验鼠置于安静和无菌环境下，将灌肠液倒入灌肠管中，将灌肠管插入灌肠针的尾端，并将其与灌肠器相连；将小鼠放在一侧，轻轻地将尾巴向上翘起，将灌肠针缓慢地插入小鼠的肛门，轻轻地将灌肠管插入灌肠针中，并缓慢注入灌肠液，如果小鼠出现不适或异常反应，应立即停止灌肠并取出灌肠器，将灌肠针和灌肠管缓慢地拔出，得到肠道清空的实验鼠；
15、a3、按照spf级动物房选址要求建立鼠舍，在鼠舍中安置运动跑轮、鼠笼，鼠笼不经高压灭菌处理，根据2-4g/只的比例放置垫料，提供1-5g多样化和季节性的饮食，食物不经辐照处理，且不固定食盒，随机放置，环境温度控制在25.5℃-27.6℃，其余条件与spf级动物房要求相同，得到归化环境鼠舍；
16、a4、在归化环境鼠舍中，将野生小鼠粪便加入饮用水中，随后放置肠道清空的实验鼠，饲养1-2周后，即得归化小鼠。
17、进一步地，长期免疫功能低下小鼠模型由以下步骤制得:
18、b1、将鼠笼使用无菌去离子水洗涤后，进行高压灭菌处理，置于归化环境鼠舍中，保持鼠笼干燥，随后在鼠笼底部放置鼠笼垫，将非接触式抗菌颗粒均匀的洒布在鼠笼垫上，每周更换一次抗菌颗粒和鼠笼垫，并按spf级动物房对鼠舍进行清洁和消毒；
19、b2、选择体质量16-20g，年龄6-8周的雌性归化小鼠，在25.5℃-27.6℃环境温度下进行饲养，实施10-14小时光照-黑暗昼夜交替循环，每日8:00开灯，18:00～20:00关灯，在笼内可随意摄取食物和水；
20、b3、使用环孢菌素a药物对饲养的雌性归化小鼠进行腹腔注射，相隔一天注射一次，每次注射量为0.1-0.3ml，饲养4-8周，即得长期免疫功能低下小鼠模型。
21、进一步地，所述环孢菌素a药物由以下步骤制得：
22、将dmso、聚乙二醇-300、吐温-80和无菌生理盐水以1：8：1：10的体积比混合后，置于37℃恒温水浴锅中搅拌至均匀，得到注射基液；
23、将环孢菌素a加入注射基液中，在相同条件下继续搅拌至溶解，即得环孢菌素a药物。
24、进一步地，环孢菌素a与注射基液的质量体积比为1-2mg:100ml。
25、本专利技术的有益效果：
26、1.本专利技术技术方案中，对实验用鼠进行归化处理，设置运动轮，并且随机投放食物，可以促使小鼠模仿野生觅食、逃跑等行为，通过根据季节投喂多样化和季节性的饮食，使得小鼠可以更好的模拟人类的免疫活动，同时鼠笼不经高压灭菌处理、食物不经辐照处理和移植野生小鼠粪便的操作可以帮助还原实验鼠的免疫系统组成和反应性。此外，将环境温度控制在25.5℃-27.6℃之间，与21℃的标准饲养条件相比，小鼠可以将其基础代谢的能量消耗降低3倍左右，降低小鼠对白细胞介素不必要的消耗，降低热因素和环境因素对小鼠免疫系统的影响。
27、2.本专利技术技术方案中，使用复本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种利用环孢菌素A构建长期免疫功能低下小鼠模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种利用环孢菌素A构建长期免疫功能低下小鼠模型的方法，其特征在于，非接触式抗菌颗粒由以下步骤制得：
3.根据权利要求2所述的一种利用环孢菌素A构建长期免疫功能低下小鼠模型的方法，其特征在于，所述复合植物精油由柑橘精油、丁香精油、茶树精油和尤加利精油以5：2：1：1的质量比混合得到的。
4.根据权利要求1所述的一种利用环孢菌素A构建长期免疫功能低下小鼠模型的方法，其特征在于，归化小鼠由以下步骤制得：
5.根据权利要求1所述的一种利用环孢菌素A构建长期免疫功能低下小鼠模型的方法，其特征在于，长期免疫功能低下小鼠模型由以下步骤制得:
6.根据权利要求5所述的一种利用环孢菌素A构建长期免疫功能低下小鼠模型的方法，其特征在于，所述环孢菌素A药物由以下步骤制得：
7.根据权利要求6所述的一种利用环孢菌素A构建长期免疫功能低下小鼠模型的方法，其特征在于，环孢菌素A与注射基液的质量体积比为1-2mg:100mL。p>...
【技术特征摘要】
1.一种利用环孢菌素a构建长期免疫功能低下小鼠模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的一种利用环孢菌素a构建长期免疫功能低下小鼠模型的方法，其特征在于，非接触式抗菌颗粒由以下步骤制得：
3.根据权利要求2所述的一种利用环孢菌素a构建长期免疫功能低下小鼠模型的方法，其特征在于，所述复合植物精油由柑橘精油、丁香精油、茶树精油和尤加利精油以5：2：1：1的质量比混合得到的。
4.根据权利要求1所述的一种利用环孢菌素a构建长期免疫功能低下小...
【专利技术属性】
技术研发人员：苏汉福，王丽萍，何佩珊，
申请(专利权)人：广州医科大学附属口腔医院广州医科大学羊城医院，
类型：发明
国别省市：
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