【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于基因工程领域，具体涉及一种酿酒酵母组成型分泌表达组件、表达载体及应用。
技术介绍
1、酿酒酵母是生产化学品和燃料乙醇的重要生物平台。虽然，在酿酒酵母大多数途径工程研究中，使用的启动子在实验室常规操作的多种条件下已进行了平行表征和比较，比如，组成型启动子tef1p、gpdp、pgkp，以及诱导型启动子gal1p，但多数情况不是分泌表达。对酿酒酵母有害或者不能进到酿酒酵母内部的底物，其胞外分泌的酶更有利于执行催化功能。目前，酿酒酵母的分泌表达，常见于gal1强启动子的半乳糖诱导，但其极易受到葡萄糖的强烈抑制，这限制了碳源的广泛使用。
2、因此，亟需研究开发一种酿酒酵母组成型分泌表达组件，以便应用于基因工程、酶工程等领域。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是解决现有技术的不足，提供一种酿酒酵母组成型分泌表达组件、表达载体及应用，具体采用以下的技术方案：
2、本专利技术的第一方面，提供了一种酿酒酵母组成型分泌表达组件，所述酿酒酵母组成型分泌表达组件由酿酒酵母翻译延伸因子1组成型启动子、酿酒酵母α因子n-末端分泌信号肽dna序列和酿酒酵母乙醇脱氢酶2终止子组成。
3、其中，上述酿酒酵母翻译延伸因子1组成型启动子的序列如seq id no：1所示：
4、gccgaccgcgaatccttacatcacacccaatcccccacaagtgatcccccacacaccatagcttcaaaatgtttctactccttttttact
5、上述酿酒酵母α因子n-末端分泌信号肽dna序列如seq id no：2所示：
6、atgagatttccttcaatttttactgctgttttattcgcagcatcctccgcattagctgctccagtcaacactacaacagaagatgaaacggcacaaattccggctgaagctgtcatcggttactcagatttagaaggggatttcgatgttgctgttttgccattttccaacagcacaaataacgggttattgtttataaatactactattgccagcattgctgctaaagaagaaggggtatctctcgagaaaagagaggctgaagct。
7、上述酿酒酵母乙醇脱氢酶2终止子的序列如seq id no：3所示：
8、ccgatgccttcacgatttatagttttcattatcaagtatgcctatattagtatatagcatctttagatgacagtgttcgaagtttcacgaataaaagataatattctactttttgctccc。
9、本专利技术的第二方面，还提供了上述的酿酒酵母组成型分泌表达组件的构建方法，包括以下步骤：
10、提取酿酒酵母总基因组，以酿酒酵母总基因组为模板，采用高保真聚合酶，通过添加特异性引物、酶、dntp、缓冲液和mg2+进行pcr扩增，得到酿酒酵母组成型分泌表达组件由酿酒酵母翻译延伸因子1组成型启动子、酿酒酵母α因子n-末端分泌信号肽dna序列和酿酒酵母乙醇脱氢酶2终止子，并进行组装连接，最终得到酿酒酵母组成型分泌表达组件；
11、特异性引物分别如seq id no：7、seq id no：8、seq id no：9、seq id no：10、seqid no：11、seq id no：12所示：
12、seq id no：7：
13、ef1：5’-gccgaccgcgaatccttacatcaca-3’；
14、seq id no：8：
15、ef2：5’-tttgtaattaaaacttagattagattgctatgc-3’；
16、seq id no：9：
17、a1：5’-atgagatttccttcaatttttactgct-3’；
18、seq id no：10：
19、a2：5’-agcttcagcctctcttttctcgagagat-3’；
20、seq id no：11：
21、t1：5’-ccgatgccttcacgatttatagttttc-3’；
22、seq id no：12：
23、t2：5’-gggagcaaaaagtagaatattatcttttat-3’。
24、本专利技术的第三方面，还提供了上述酿酒酵母组成型分泌表达载体，其酿酒酵母组成型分泌表达载体包括上述的酿酒酵母组成型分泌表达组件。
25、进一步地，述酿酒酵母组成型分泌表达载体还包括含有尿嘧啶筛选标记基因表达组件、大肠杆菌克隆组件和酿酒酵母复制子。
26、其中，含有尿嘧啶筛选标记基因表达组件的序列如seq id no：4所示：
27、tataaaaataggcgtatcacgaggccctttcgtcttcaagaattagcttttcaattcaattcatcattttttttttattcttttttttgatttcggtttctttgaaatttttttgattcggtaatctccgaacagaaggaagaacgaaggaaggagcacagacttagattggtatatatacgcatttgtagtgttgaagaaacatgagattggtatatatacgcatttgtagtgttgaagaaacatgaaattgcccagtattcttaacccaactgcacagaacaaaaacatgcaggaaacgaagataaatcatgtcgaaagctacatataaggaacgtgctgctactcatcctagtcctgttgctgccaagctatttaatatcatgcacgaaaagcaaacaaacttgtgtgcttcattggatgttcgtaccaccaaggaattactggagttagttgaagcattaggtcccaaaatttgtttactaaaaacacatgtggatat本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种酿酒酵母组成型分泌表达组件，其特征在于，所述酿酒酵母组成型分泌表达组件由酿酒酵母翻译延伸因子1组成型启动子、酿酒酵母α因子N-末端分泌信号肽DNA序列和酿酒酵母乙醇脱氢酶2终止子组成。
2.根据权利要求1所述的酿酒酵母组成型分泌表达组件，其特征在于，酿酒酵母翻译延伸因子1组成型启动子的序列如SEQ ID NO：1所示；酿酒酵母α因子N-末端分泌信号肽DNA序列如SEQ ID NO：2所示；酿酒酵母乙醇脱氢酶2终止子的序列如SEQ ID NO：3所示。
3.一种权利要求1-2任一项所述的酿酒酵母组成型分泌表达组件的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.一种酿酒酵母组成型分泌表达载体，其特征在于，所述酿酒酵母组成型分泌表达载体包括权利要求1-2任一项所述的酿酒酵母组成型分泌表达组件。
5.根据权利要求4所述的酿酒酵母组成型分泌表达载体，其特征在于，所述酿酒酵母组成型分泌表达载体还包括含有尿嘧啶筛选标记基因表达组件、大肠杆菌克隆组件和酿酒酵母复制子。
6.根据权利要求5所述的酿酒酵母组成型分泌表达载体，其特征在于，
7.一种权利要求4-6任一项所述的酿酒酵母组成型分泌表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
8.一种重组载体，其特征在于，所述重组载体为插入异源蛋白基因的权利要求4-6任一项所述的酿酒酵母组成型分泌表达载体。
9.权利要求1-2任一项所述的酿酒酵母组成型分泌表达组件在酶工程、蛋白质制备领域中的应用。
10.权利要求4-6任一项所述的酿酒酵母组成型分泌表达载体在酶工程、蛋白质制备领域中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种酿酒酵母组成型分泌表达组件，其特征在于，所述酿酒酵母组成型分泌表达组件由酿酒酵母翻译延伸因子1组成型启动子、酿酒酵母α因子n-末端分泌信号肽dna序列和酿酒酵母乙醇脱氢酶2终止子组成。
2.根据权利要求1所述的酿酒酵母组成型分泌表达组件，其特征在于，酿酒酵母翻译延伸因子1组成型启动子的序列如seq id no：1所示；酿酒酵母α因子n-末端分泌信号肽dna序列如seq id no：2所示；酿酒酵母乙醇脱氢酶2终止子的序列如seq id no：3所示。
3.一种权利要求1-2任一项所述的酿酒酵母组成型分泌表达组件的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：
4.一种酿酒酵母组成型分泌表达载体，其特征在于，所述酿酒酵母组成型分泌表达载体包括权利要求1-2任一项所述的酿酒酵母组成型分泌表达组件。
5.根据权利要求4所述的酿酒酵母组成型分泌表达载体，...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵喜华，王国平，欧阳蓓，胡紫艳，刘启铃，
申请(专利权)人：江西师范大学，
类型：发明
国别省市：
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