【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及核酸纯化以及分析检测和表征的领域。特别地，本专利技术涉及从分子物质的混合物中分离富含鸟嘌呤的寡核苷酸的分子物质的方法，其中该混合物中的至少一种分子物质是由该富含鸟嘌呤的寡核苷酸形成的四联体。该方法允许分离、检测并纯化混合物中各单独富含鸟嘌呤的寡核苷酸的分子物质，包括单链寡核苷酸以及高级结构，例如双链体和四联体。
技术介绍
1、已经报道了用富含鸟嘌呤(富含g)的寡核苷酸处理各种细胞类型会产生各种各样的生物效应，包括抑制细胞增殖、诱导细胞死亡、改变细胞粘附、抑制蛋白质聚集和抗病毒活性(bates等人，exp mol pathol[实验与分子病理学]86(3):151-164(2009))。最近，已经对多种合成的富含g的寡核苷酸用作多种人类疾病的治疗剂进行了研究。
2、富含g的寡核苷酸可以在分子间或分子内缔合形成四链或四重链(g4)或“四联体”结构。这些结构通过形成g-四分体而形成，其中四个鸟嘌呤建立了氢键的环状模式。在结构上，四聚体聚集体由平面组件组成，其允许反式或顺式糖苷构象两者；来自相同方向的g链(即平行链)的...
【技术保护点】
1.一种从分子物质的混合物中分离富含鸟嘌呤的寡核苷酸的分子物质的方法，其中该混合物中的至少一种分子物质是由该富含鸟嘌呤的寡核苷酸形成的四联体，所述方法包括：
2.如权利要求1所述的方法，其中该富含鸟嘌呤的寡核苷酸是小干扰RNA(siRNA)的有义链或反义链。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中该混合物包含单链分子物质和/或双链分子物质。
4.如权利要求3所述的方法，其中该混合物包含一种或多种选自由以下组成的组的分子物质：反义单链、有义单链、双链体和四联体。
5.如权利要求4所述的方法，其中该富含鸟嘌呤的寡核苷酸是该反义
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【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种从分子物质的混合物中分离富含鸟嘌呤的寡核苷酸的分子物质的方法，其中该混合物中的至少一种分子物质是由该富含鸟嘌呤的寡核苷酸形成的四联体，所述方法包括：
2.如权利要求1所述的方法，其中该富含鸟嘌呤的寡核苷酸是小干扰rna(sirna)的有义链或反义链。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中该混合物包含单链分子物质和/或双链分子物质。
4.如权利要求3所述的方法，其中该混合物包含一种或多种选自由以下组成的组的分子物质：反义单链、有义单链、双链体和四联体。
5.如权利要求4所述的方法，其中该富含鸟嘌呤的寡核苷酸是该反义单链。
6.如权利要求4或5所述的方法，其中该双链体包括该反义单链和该有义单链。
7.如权利要求4至6中任一项所述的方法，其中该混合物包含以下分子物质：反义单链、有义单链、双链体和四联体。
8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中每种分子物质在与另一种分子物质的级分分开的级分中洗脱。
9.如权利要求8所述的方法，其中该混合物包含反义单链、有义单链、双链体和四联体并且该双链体在第一组洗脱级分中洗脱，该有义链在第二组洗脱级分中洗脱，该反义链在第三组洗脱级分中洗脱，并且该四联体在第四组洗脱级分中洗脱。
10.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中每种分子物质的loq为约0.03mg/ml至约0.08mg/ml。
11.如权利要求8至10中任一项所述的方法，其中每种分子物质的峰的分离分辨率为至少或约1.0，任选地，至少或约1.2。
12.如权利要求11所述的方法，其中每种分子物质的峰的分离分辨率为至少或约2.0，任选地，至少或约2.4。
13.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该混合物在溶液中制备，该溶液包含以下一种或多种：水、乙酸盐的来源、钾的来源和氯化钠。
14.如权利要求13所述的方法，其中该乙酸盐的来源是乙酸铵、乙酸钠或乙酸钾。
15.如权利要求13所述的方法，其中该钾的来源是磷酸钾。
16.如权利要求13至15中任一项所述的方法，其中该溶液包含约50mm至约150mm乙酸盐或钾。
17.如权利要求16所述的方法，其中该溶液包含约75mm至约100mm的乙酸铵、乙酸钠或乙酸钾。
18.如权利要求13至17中任一项所述的方法，其中该溶液包含磷酸钾和氯化钠。
19.如权利要求1所述的方法，其中该混合物在水中制备，任选地，在纯化的去离子水中制备。
20.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该疏水配体包含c4烷基链、c6烷基链或c8烷基链。
21.如权利要求20所述的方法，其中该疏水配体包含c4烷基链。
22.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该色谱基质容纳在具有2.1mm内径和/或约50mm柱长的色谱柱中。
23.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中柱温度是约20℃至约35℃。
24.如权利要求23所述的方法，其中柱温度是约29℃至约31℃，任选地约30℃。
25.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该基质包含1.7亚乙基桥杂化(beh)颗粒。
26.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该乙酸盐梯度由包含约50mm至约150mm乙酸盐的乙酸盐原液制成。
27.如权利要求26所述的方法，其中该乙酸盐原液包含约70mm至约80mm乙酸盐，任选地，约75mm乙酸盐。
28.如权利要求26所述的方法，其中该乙酸盐原液包含约90mm至约110mm乙酸盐，任选地，约100mm乙酸盐。
29.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该乙酸盐为乙酸铵、乙酸钠或乙酸钾。
30.如权利要求26至29中任一项所述的方法，其中该乙酸盐原液的ph是约6.5至约7.0。
31.如权利要求30所述的方法，其中该乙酸盐原液的ph是在5.0至8.5之间、约6.6、约6.7、约6.8、约6.9或约7.0。
32.如权利要求27至31中任一项所述的方法，其中该乙酸盐原液是75mm乙酸铵的水溶液，ph值为6.7±0.1。
33.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该乙腈梯度用乙腈原液制成并且该乙腈原液为100％乙腈。
34.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该流动相包含降低浓度梯度的乙酸盐和增加浓度梯度的乙腈。
35.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中该乙酸盐梯度在第一时间段内从最大浓度开始并且逐渐降低至最小浓度。
36.如权利要求35所述的方法，其中该第一时间段是约18至约19...
【专利技术属性】
技术研发人员：R·J·达夫，H·席林格，J·利彭斯，
申请(专利权)人：美国安进公司，
类型：发明
国别省市：
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