【技术实现步骤摘要】
本申请涉及中药检测，具体涉及附子有效成分的检测方法。
技术介绍
1、附子为毛茛科植物乌头（aconitum carmichaelii debx.）的子根的加工品，主要功效为回阳救逆，补火助阳，散寒止痛。附子主要分布在四川、陕西、贵州、湖南、云南等地。市场上出售的附子品种多样，而不同的附子由于其含有的有效成分含量有所不同，会直接影响附子的质量以及使用效果。
2、现有技术中有提供一些有关附子有效成分的检测方法。然而现有的检测方法无法通过检测不同来源附子的有效成分含量来对附子进行区分。且有些检测方法的检测效率不高。
3、因此，亟需提供一种新的有关附子的检测方法，用于检测不同来源附子的有效成分含量，从而对附子的质量进行辨别，这有利于附子的合理应用。另外，现有技术也需要提供一种新的高效的附子检测方法。
技术实现思路
1、有鉴于此，本申请提供一种附子有效成分的检测方法，旨在至少解决上述现有技术中的一种技术问题。本申请提供一种高效的附子检测方法，能够对不同来源的附子进行有效成分含量的检测，从而对附子的质量进行辨别，这有利于附子的合理应用。
2、本申请实施例是这样实现的：提供一种附子有效成分的检测方法，包括如下步骤：
3、取待测附子样品，加入盐酸水溶液浸出清液，并取所述清液加入氢溴酸高乌甲素-乙腈溶液中，得到供试品；
4、采用超高速液相色谱-三重四极杆质谱联用检测方法对所述供试品进行检测，获得特征物质的含量；
5、其中，所述特
6、所述超高速液相色谱-三重四极杆质谱联用检测过程中色谱柱为acquity uplcbeh c18色谱柱，规格为：1.7μm，2.1×100mm；所述超高速液相色谱-三重四极杆质谱联用检测的洗脱方式为：
7、在0~1.0min，采用体积比90%的流动相a和10%流动相b形成的混合流动相；在1.0~10min采用梯度洗脱，流动相a从体积比90%降至10%，流动相b从体积比10%增至90%；在10min及之后，采用体积比10%流动相a和90%流动相b形成的混合流动相；其中，流动相a为体积占比0.1%的甲酸水溶液，流动相b为乙腈，流动相的流速为0.2-0.6ml/min。
8、在一些实施例中，所述根据所述特征物质的含量范围，确定所述待测附子样品的质量，包括：
9、在所述水溶性生物碱的含量为30~250μg/g且尼奥林的含量为20~120μg/g，所述单酯型生物碱的含量为150~600μg/g，所述双酯型生物碱的含量≤180μg/g，则确定所述待测附子样品为a1质量水平；
10、在所述水溶性生物碱的含量≥50μg/g且尼奥林的含量≥50μg/g，所述单酯型生物碱的含量为60~340μg/g，则确定所述待测附子样品为a2质量水平；
11、在所述水溶性生物碱的含量为40~400μg/g且所述尼奥林的含量为20~310μg/g，所述单酯型生物碱的含量≥100μg/g，所述双酯型生物碱的含量为10~90μg/g，且所述新乌头碱的含量≤50μg/g，则确定所述待测附子样品为a3质量水平。此处的a1、a2、a3质量水平属于根据附子特征物质的含量进行人为的划分，划分的目的在于更好地区分不同有效成分的附子，从而满足附子的不同场景的合理应用。a1、a2、a3质量水平之间不存在直接的优劣等级区别。
12、在一些实施例中，所述水溶性生物碱的含量为100~200μg/g，所述尼奥林的含量为50~100μg/g，所述单酯型生物碱的含量为350~600μg/g，所述双酯型生物碱的含量为120~180μg/g，所述新乌头碱的含量为50~120μg/g，则确定所述待测附子样品为a1质量水平。
13、在所述水溶性生物碱的含量为250~400μg/g，且所述尼奥林的含量为150~350μg/g，所述单酯型生物碱的含量为350~600μg/g，所述双酯型生物碱的含量为50~90μg/g，且所述新乌头碱的含量为1~30μg/g，则确定所述待测附子样品为a2质量水平。
14、在一些实施例中，所述水溶性生物碱的含量为50~300μg/g，所述尼奥林的含量为50~250μg/g，所述单酯型生物碱的含量为60~340μg/g，所述双酯型生物碱的含量为50~300μg/g，则确定所述待测附子样品为a3质量水平。
15、在一些实施例中，所述确定所述待测附子样品为a2质量水平时，还包括：
16、在所述双酯型生物碱的含量为50~100μg/g，所述新乌头碱的含量≤50μg/g。
17、进一步的，在所述双酯型生物碱的含量为150~300μg/g，所述新乌头碱的含量≥50μg/g，则确定所述待测附子样品的为a2质量水平。
18、在一些实施例中，所述超高速液相色谱-三重四极杆质谱联用检测过程中色谱柱为acquity uplc beh c18色谱柱，规格为：1.7μm，2.1×100mm；
19、和/或，所述超高速液相色谱-三重四极杆质谱联用检测过程中色谱柱的柱温为32-38℃，检测波长为230-240nm；
20、和/或，每次对所述供试品进行检测，进样0.8-1.2μl，平衡时间0.8-1.2min；
21、和/或，所述高效液相色谱检测的洗脱方式为：0~1.0min，90%流动相a，10%流动相b；1.0~10min为梯度洗脱，90%→10%流动相a，10%→90%流动相b；10min之后，10%流动相a，90%流动相b；其中，流动相a为体积占比0.1%的甲酸水溶液，流动相b为乙腈，流动相的流速为0.2-0.6ml/min。
22、在一些实施例中，所述超高速液相色谱-三重四极杆质谱联用检测过程中质谱条件为：以三重四级杆质谱检测，电喷雾离子化方式，检测离子为正离子，监控模式为多级反应检测模式；
23、和/或，毛细管电压为5.5 kv，离子源温度为500 ℃，去簇电压为100 v。
24、在一些实施例中， 所述采用超高速液相色谱-三重四极杆质谱联用检测方法对所述供试品进行检测之前，还包括：
25、配制标准品混合液，使用超高速液相色谱-三重四极杆质谱联用检测标准品混合液，得到标准离子流色谱图；
26、以及，通过不同浓度的所述标准品混合液，确定各个所述标准品的标准曲线；
27、其中，所述标准品混合液的配制步骤包括：取新乌头碱、附子灵、次乌头碱、苯甲酰新乌头原碱、乌头碱、苯甲酰次乌头原碱、乌头原碱、去甲猪毛菜碱、新乌头原碱、滇乌头碱、次乌头原碱、宋果灵、尼奥林、塔拉萨敏的标准品，混合加入异丙醇-二氯甲烷混合溶液制成所述标准品混合液。...
【技术保护点】
1.一种附子有效成分的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，根据所述特征物质的含量，确定所述待测附子样品的质量，包括：
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述水溶性生物碱的含量为50~300μg/g，所述尼奥林的含量为50~250μg/g，所述单酯型生物碱的含量为60~340μg/g，所述双酯型生物碱的含量为50~300μg/g，确定所述待测附子样品为A2质量水平。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述待测附子样品为A2质量水平时，还包括：
5.根据权利要求1-4任一项所述的检测方法，其特征在于，所述超高速液相色谱-三重四极杆质谱联用检测过程中色谱柱的柱温为32-38℃，检测波长为230-240nm。
6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，每次对所述供试品进行检测，进样0.8-1.2μL，平衡时间0.8-1.2min。
7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述超高速液相色谱-三重四极杆质谱联用检测过程中质谱条件为：以三重
8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述采用超高速液相色谱-三重四极杆质谱联用检测方法对所述供试品进行检测之前，还包括：
9.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述取待测附子样品，加入盐酸水溶液浸出清液，包括：
10.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述取所述清液加入氢溴酸高乌甲素-乙腈溶液中得到供试品，包括：
...【技术特征摘要】
1.一种附子有效成分的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：
2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，根据所述特征物质的含量，确定所述待测附子样品的质量，包括：
3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述水溶性生物碱的含量为50~300μg/g，所述尼奥林的含量为50~250μg/g，所述单酯型生物碱的含量为60~340μg/g，所述双酯型生物碱的含量为50~300μg/g，确定所述待测附子样品为a2质量水平。
4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述待测附子样品为a2质量水平时，还包括：
5.根据权利要求1-4任一项所述的检测方法，其特征在于，所述超高速液相色谱-三重四极杆质谱联用检测过程中色谱柱的柱温为32-38℃，检测波长为230-240nm...
【专利技术属性】
技术研发人员：夏燕莉，薛慧玲，郭晓倩，杨玉霞，王欢，
申请(专利权)人：成都大学，
类型：发明
国别省市：
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