【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子标记及生物，具体涉及一种鉴别梨品种的特异kasp分子标记及其引物，并进一步公开其应用，尤其是基于特异kasp分子标记鉴别梨品种的方法。
技术介绍
1、梨作为生活中常见的水果，其栽培品种很多，诸如常见的“黄金”、“园黄”、“金秋”、“秋月”、“清香”、“蒲瓜”等品种均因其果品优良、结果性状好，已成为一些地区的重要栽培品种，其种苗在梨苗木市场上颇受梨种植户的青睐。由于梨的苗木定植后一般需要3-4年的时间才能结果，通常导致不同品种的植株在结果前很难依靠目测观察的方法加以区分，而影响栽培的优化。此外，梨苗木一般是嫁接繁殖而成，从品种的接穗采集、穗砧嫁接、苗木培管、出圃转运到种植户定植，需要由不同的人员在不同的地点来完成，且由于梨种苗生产流通的环节较多，加上少数不法经营者的趋利(以假乱真)行为，梨种苗市场上不免存在一些种苗混杂、错乱和假劣等苗木质量问题。因此，如何早期进行梨苗木品种的鉴定，对于梨的农业栽培及管理具有积极的意义。
2、目前，传统依靠植株的果实性状判定梨品种的方法，虽然准确性高，但从种苗到植株结果至少需要3年以上的时间，鉴别周期较长；而在梨植株结果前，凭借叶片、枝条等组织器官的生长性状鉴别梨品种，又需要有较强的专业性和极其丰富的经验，并且结果准确性并不稳定。因此，为保障梨种苗纯度，开发准确、简便和高通量的种苗鉴别方法一直是梨种苗生产者、经销者和使用者的迫切所需。
3、dna分子标记以生物个体间遗传物质核苷酸序列差异为基础，能在dna水平上反映生物的遗传信息特点。dna分子标记技术不受植
技术实现思路
1、为此，本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种鉴别梨品种的特异kasp分子标记，尤其是适应于“黄金”、“园黄”、“金秋”、“秋月”、“清香”、“蒲瓜”等梨品种的特异kasp分子标记，以实现简便、准确、快速和高通量鉴定区分不同梨品种的种苗植株；
2、本专利技术所要解决的第二个技术问题在于提供一种鉴别梨品种的特异kasp分子标记引物，并进一步公开其应用；
3、本专利技术所要解决的第三个技术问题在于提供一种基于特异kasp分子标记鉴别梨品种的方法。
4、为解决上述技术问题，本专利技术所述的一种鉴定梨品种的kasp分子标记，其包括如下kasp分子标记中的一种或几种的组合物：
5、kasp分子标记chr.8 15996928：具有如seq id no.1所示核苷酸序列的dna片段，其kasp位点位于该dna片段的第228位，其多态性为c/t；和/或，
6、kasp分子标记chr.12 7807358：具有如seq id no.2所示核苷酸序列的dna片段，其kasp位点位于该dna片段的第158位，其多态性为t/g；和/或，
7、kasp分子标记chr.14 1188673：具有如seq id no.3所示核苷酸序列的dna片段，其kasp位点位于该dna片段的第173位，其多态性为c/a；和/或，
8、kasp分子标记chr.17 15532632：具有如seq id no.4所示核苷酸序列的dna片段，其kasp位点位于该dna片段的第132位，其多态性为t/c。
9、本专利技术还公开了一种用于扩增权利要求1所述鉴定梨品种的kasp分子标记的引物对，包括如下引物对中的一种或几种的组合物：
10、构建所述kasp分子标记chr.8 15996928的引物对包括：
11、f1：cccttatcggtgtagtttgtcagc；
12、f2：gcccttatcggtgtagtttgtcagt；
13、r：aggaggtgacattcatagaggaacc；和/或，
14、构建所述kasp分子标记chr.12 7807358的引物对包括：
15、f：aaggtccatgaagaatttgattgaa；
16、r1：ctccaacaactaatgctgattcca；
17、r2：ctccaacaactaatgctgattccc；和/或，
18、构建所述kasp分子标记chr.14 1188673的引物对包括：
19、f1：gcaccatcacatctttgaacgtc；
20、f2：gcaccatcacatctttgaacgta；
21、r：tcccttgaaatgtgtatatctgtcatt；和/或，
22、构建所述kasp分子标记chr.17 15532632的引物对包括：
23、f：cggaaagaaatctaatggagagctg；
24、r1：cccttggaacaaacccataagataa；
25、r2：cccttggaacaaacccataagatag。
26、本专利技术还公开了一种可用于检测鉴定梨品种的kasp试剂盒，所述试剂盒包括权利要求2所述的引物对。
27、具体的，所述可用于检测鉴定梨品种的kasp试剂盒，所述梨植株的品种包括黄金、园黄、金秋、秋月、清香或蒲瓜中的至少一种。
28、本专利技术还公开了一种如所述可用于检测鉴定梨品种的kasp试剂盒的使用方法，包括提取待鉴定的梨植株样品dna模板的步骤，以及，以提取的dna为模板，利用所述试剂盒进行pcr扩增的步骤，并根据pcr扩增结果进行不同梨植株品质的判断及鉴定。
29、具体的，所述可用于检测鉴定梨品种的kasp试剂盒的使用方法，所述pcr扩增体系(0.8μl)包括：
30、kasp master mix，1×；
31、5’端带有荧光探针的正向引物1(r1或f1)，终浓度0.17μm；
32、5’端带有另一种荧光探针的正向引物2(r2或f2)，终浓度0.17μm；
33、反向引物(r或f)，终浓度0.42μm；
34、待检测样品的基因组dna，20ng-50ng。
35、本专利技术还公开了所述鉴定梨品种的kasp分子标所述鉴定梨品种的kasp分子标记的引物对或所述可用于检测鉴定梨品种的kasp试剂盒在梨植株品种鉴定、筛选、育种、或指导药物使用领域中的应用。
36、本专利技术还公开了一种鉴定梨品种的方法，包括利用所述用于扩增所述鉴定梨品种的kasp分子标记的引物对或所述可用于检测鉴定梨品种的kasp试本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种鉴定梨品种的KASP分子标记，其特征在于，其包括如下KASP分子标记中的一种或几种的组合物：
2.一种用于扩增权利要求1所述鉴定梨品种的KASP分子标记的引物对，其特征在于，包括如下引物对中的一种或几种的组合物：
3.一种可用于检测鉴定梨品种的KASP试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求2所述的引物对。
4.根据权利要求3所述可用于检测鉴定梨品种的KASP试剂盒，其特征在于，所述梨植株的品种包括黄金、园黄、金秋、秋月、清香或蒲瓜中的至少一种。
5.一种如权利要求3或4所述可用于检测鉴定梨品种的KASP试剂盒的使用方法，其特征在于，包括提取待鉴定的梨植株样品DNA模板的步骤，以及，以提取的DNA为模板，利用所述试剂盒进行PCR扩增的步骤，并根据PCR扩增结果进行不同梨植株品质的判断及鉴定。
6.根据权利要求5所述可用于检测鉴定梨品种的KASP试剂盒的使用方法，其特征在于，所述PCR扩增体系包括：
7.权利要求1所述鉴定梨品种的KASP分子标记或权利要求2所述用于扩增权利要求1所述鉴定梨品种的KAS
8.一种鉴定梨品种的方法，其特征在于，包括利用权利要求2所述用于扩增权利要求1所述鉴定梨品种的KASP分子标记的引物对或权利要求3或4所述可用于检测鉴定梨品种的KASP试剂盒进行鉴定的步骤。
9.根据权利要求8所述鉴定梨品种的方法，其特征在于，包括提取待鉴定的梨植株样品DNA模板的步骤，以及，以提取的DNA为模板，利用所述鉴定梨品种的KASP分子标记的引物对或所述可用于检测鉴定梨品种的KASP试剂盒进行PCR扩增的步骤，并根据PCR扩增结果进行不同梨植株品质的判断及鉴定。
10.根据权利要求8或9所述鉴定梨品种的方法，其特征在于，所述方法还包括筛选并鉴定不同梨品质的KASP分子标记的步骤。
...【技术特征摘要】
1.一种鉴定梨品种的kasp分子标记，其特征在于，其包括如下kasp分子标记中的一种或几种的组合物：
2.一种用于扩增权利要求1所述鉴定梨品种的kasp分子标记的引物对，其特征在于，包括如下引物对中的一种或几种的组合物：
3.一种可用于检测鉴定梨品种的kasp试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求2所述的引物对。
4.根据权利要求3所述可用于检测鉴定梨品种的kasp试剂盒，其特征在于，所述梨植株的品种包括黄金、园黄、金秋、秋月、清香或蒲瓜中的至少一种。
5.一种如权利要求3或4所述可用于检测鉴定梨品种的kasp试剂盒的使用方法，其特征在于，包括提取待鉴定的梨植株样品dna模板的步骤，以及，以提取的dna为模板，利用所述试剂盒进行pcr扩增的步骤，并根据pcr扩增结果进行不同梨植株品质的判断及鉴定。
6.根据权利要求5所述可用于检测鉴定梨品种的kasp试剂盒的使用方法，其特征在于，所述pcr扩增体系包括：<...
【专利技术属性】
技术研发人员：张平，孔佑涵，吴娟娟，胡其军，刘娟，杨丽颖，曾瑶，
申请(专利权)人：湖南省园艺研究所，
类型：发明
国别省市：
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