【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种鸡产气荚膜梭菌mbp基因及其应用，属于基因工程领域。
技术介绍
1、产气荚膜梭菌(clostridium perfringens，cp)是一种革兰氏阳性、兼性厌氧、可以形成芽孢的杆状细菌，其中的g型产气荚膜梭菌可以导致禽的坏死性肠炎(necroticenteritis，ne)，其急性临床型会导致2-4周龄的肉鸡突然死亡，而亚临床型则常导致肠道粘膜损伤、出血，以及各项生产性能下降等。此外禽坏死性肠炎还容易受到球虫感染、高蛋白饲料、免疫抑制疾病等易感因素的影响，其对肠道的破坏可能导致其他禽类病原的继发感染，从而导致更严重的疾病和经济损失。
2、防控禽坏死性肠炎的策略主要通过在饲料中补充抗生素添加剂进行预防和治疗。然而，为了应对威胁人类和动物健康的抗生素耐药菌株的出现，1999年欧洲联盟(eu)禁止使用促生长抗生素，禽坏死性肠炎感染问题也随之日益严重，因此迫切需要替代抗生素的防控方法。设计开发新型疫苗如亚单位疫苗是目前研究的热点。
3、mbp是麦芽糖abc转运底物结合蛋白，在猪链球菌上被报道为具有免疫原性的蛋白，其在革兰氏阳性菌中通常作为锚定在膜上的脂蛋白，参与麦芽糖和麦芽糖糊精的摄取利用。此外，还作为佐剂与其他保护性蛋白融合表达以作为亚单位疫苗进行应用。目前还没有关于产气荚膜梭菌mbp蛋白的报道。
技术实现思路
1、专利技术目的：本专利技术所要解决的技术问题是提供了一种具有良好的免疫反应性的鸡产气荚膜梭菌mbp基因及其应用。
2、技
3、本专利技术还提供了一种表达所述鸡产气荚膜梭菌mbp基因的蛋白，其氨基酸序列如seq id no.4所示。
4、本专利技术还提供了一种重组质粒、表达盒或重组细胞，其含有所述的鸡产气荚膜梭菌mbp基因。
5、本专利技术还提供了一种构建所述重组质粒的方法，包括以下步骤：将所述的鸡产气荚膜梭菌mbp基因插入表达载体pet28a，得到重组质粒pet28a-mbp。
6、其中，利用同源重组方法将所述鸡产气荚膜梭菌mbp基因插入表达载体pet28a。
7、其中，所述同源重组体系为：扩增片段，pet28a质粒，exnaseⅱ，5×ceⅱbuffer，ddh2o。
8、本专利技术还提供了一种重组菌，其含有所述的鸡产气荚膜梭菌mbp基因或所述的重组质粒、表达盒或重组细胞。
9、本专利技术还提供了一种构建所述重组菌的方法，包括以下步骤：将所述的重组质粒转化至大肠杆菌bl21，得到重组菌bl21(pet28a-mbp)。
10、本专利技术还提供了所述的鸡产气荚膜梭菌mbp基因、所述的蛋白、所述的重组质粒、表达盒或重组细胞或所述的重组菌在制备预防禽坏死性肠炎的疫苗中的应用。
11、其中，所述疫苗为亚单位疫苗。
12、有益效果：与现有技术相比，本专利技术具有如下显著优点：1、本专利技术通过从产气荚膜梭菌提取全基因组，设计引物扩增mbp基因，利用原核表达方法首次制备得到重组mbp蛋白；2、产气荚膜梭菌蛋白mbp具有良好的免疫反应性，可以显著减轻鸡产气荚膜梭菌引起的临床症状；3、本专利技术提供的具有免疫保护作用的鸡产气荚膜梭菌蛋白mbp具有作为研制鸡产气荚膜梭菌亚单位疫苗的潜力。
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1.一种鸡产气荚膜梭菌Mbp基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。
2.一种表达权利要求1所述鸡产气荚膜梭菌Mbp基因的蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。
3.一种重组质粒、表达盒或重组细胞，其特征在于，含有权利要求1所述的鸡产气荚膜梭菌Mbp基因。
4.一种构建权利要求3所述重组质粒的方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1所述的鸡产气荚膜梭菌Mbp基因插入表达载体pET28a，得到重组质粒pET28a-Mbp。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，利用同源重组方法将所述鸡产气荚膜梭菌Mbp基因插入表达载体pET28a；所述同源重组体系为：扩增片段，pET28a质粒，ExnaseⅡ，5×CEⅡBuffer，ddH2O。
6.一种重组菌，其特征在于，含有权利要求1所述的鸡产气荚膜梭菌Mbp基因或权利要求3所述的重组质粒、表达盒或重组细胞。
7.一种构建权利要求6所述重组菌的方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求3所述的重组质粒转化至大肠杆菌BL21
8.权利要求1所述的鸡产气荚膜梭菌Mbp基因、权利要求2所述的蛋白、权利要求3所述的重组质粒、表达盒或重组细胞或权利要求6所述的重组菌在制备预防禽坏死性肠炎的疫苗中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述疫苗包括亚单位疫苗。
...【技术特征摘要】
1.一种鸡产气荚膜梭菌mbp基因，其特征在于，其核苷酸序列如seq id no.3所示。
2.一种表达权利要求1所述鸡产气荚膜梭菌mbp基因的蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如seq id no.4所示。
3.一种重组质粒、表达盒或重组细胞，其特征在于，含有权利要求1所述的鸡产气荚膜梭菌mbp基因。
4.一种构建权利要求3所述重组质粒的方法，其特征在于，包括以下步骤：将权利要求1所述的鸡产气荚膜梭菌mbp基因插入表达载体pet28a，得到重组质粒pet28a-mbp。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，利用同源重组方法将所述鸡产气荚膜梭菌mbp基因插入表达载体pet28a；所述同源重组体系为：...
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