【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于肝癌诊断领域，具体地，本专利技术涉及乙型肝炎病毒相关肝细胞癌(hbv-hcc)患者经肝动脉化疗栓塞术(tace)的术后疗效的生物标志物及其应用。
技术介绍
1、肝癌严重影响人民的健康和患者的生活质量。其中，乙型肝炎病毒(hbv)感染是hcc发生的主要原因。值得注意的是，乙型肝炎病毒相关肝细胞癌(hbv-hcc)占中国hcc患者的80％以上，因此，该人群需要更多关注。
2、临床上对于肝癌患者可选择免疫治疗的方式，例如免疫检查点抑制剂(immunecheckpoint inhibitors，icis)，其在肝癌免疫治疗领域已取得了一定的成功。但是，icis的临床反应率相对较低，不足40％，而且对这类药物的耐药性也限制了获得持久反应的患者数量，免疫相关的不良事件使治疗更加复杂化。因此，需要更好地了解icis治疗后有效和安全的抗肿瘤免疫应答的需求。此外，也可将icis与其他免疫疗法相结合，以实现更广泛、更持久的疗效以及更大的安全性。
3、临床上也已提出将经肝动脉化疗栓塞术(tace)与icis联合的序贯疗法。tace是目前临床上治疗肝癌的常用的方法之一，是一种应用介入技术在肿瘤供血的动脉中进行治疗的技术，其主要过程是通过股动脉进入肝动脉，对血管进行栓塞和化疗药物注入，让肿瘤缺血缺氧性坏死，从而达到治疗肝脏肿瘤疾病的目的。tace的优点是对肝脏功能损伤比较小，适用于不适合手术切除肿瘤的姑息性治疗；并且，tace治疗可激活免疫系统并调节肿瘤微环境，增强对免疫检查点的反应性。但是，进行tace也存在一定的
4、目前肝癌开展的免疫治疗，更多的是对于局部肿瘤组织，而缺乏简便、无创的外周血免疫分型评估。因此，亟需关注外周血免疫分型，寻找免疫治疗突破。并且，无论对于tace本身，还是将tace联合免疫疗法进行序贯治疗，如果能预先评估tace术后疗效，将具有相当大的临床指导价值。
技术实现思路
1、本专利技术所要解决的技术问题是如何对hbv相关原发性肝癌tace术后疗效进行预后预测。
2、本专利技术的专利技术人通过“olink高灵敏度血浆蛋白质组”和“多色流式细胞术”相互补充的技术，检测了80例hbv-hcc患者外周血免疫细胞耗竭表型和免疫蛋白表达谱，根据患者的耗竭表型联合免疫蛋白表达谱的异质性，将患者分为不同免疫分型；进而，从中选择接受了tace的患者，基于不同免疫分型患者在tace术后的生存分析，获得了与患者tace术后临床应答情况或疗效直接相关的核心指标；基于该核心指标，本专利技术的专利技术人进一步构建了风险评分系统，该系统能够预测肝癌tace治疗风险和术后疗效。
3、基于上述发现，本专利技术提供以下技术方案。
4、一方面，本专利技术提供一种用于预测hbv-hcc患者经肝动脉化疗栓塞术的术后疗效的系统，所述系统包括：
5、(1)样本处理模块，其设置为从所述患者分离血浆和外周血单个核细胞；
6、(2)检测模块，其设置为检测样本处理模块步骤(1)中获得的血浆中gal9、il8、tnfrsf4的表达量，以及cd4+tigit+pd1+t细胞和cd8+tigit+tim3+t细胞分别占相对cd4+t细胞和cd8+t细胞的百分比，并且将所得结果代入以下风险评分公式：
7、风险评分＝0.293025556×gal9+0.082411012×il8+0.033152133×tnfrsf4+0.014714986×cd4+tigit+pd1+t细胞+0.045277334×cd8+tigit+tim3+t细胞，从而计算得到风险得分；
8、(3)术后疗效预测模块，其设置为将检测模块中得到的风险得分与参考值相比，高于(>)参考值则预测所述hbv-hcc患者的肝动脉化疗栓塞术的术后疗效差。
9、在本专利技术的上下文中，术语“hbv-hcc”被定义为患者乙型肝炎表面抗原阳性血清(hbsag≥6个月)，符合hcc诊断要求。
10、优选地，所述样本处理模块设置为从所述患者获得外周血，并从中分离血浆和外周血单个核细胞。
11、优选地，所述检测模块设置为使用流式细胞术来检测cd4+tigit+pd1+t细胞和cd8+tigit+tim3+t细胞的百分比；并且，所述检测模块进一步设置为使用olink多重邻近延伸分析来检测gal9、il8、tnfrsf4的表达量。根据本专利技术的具体实施方式，使用olink多重邻近延伸分析(pea)免疫遗传学小组(olink bioscience ab，uppsala，sweden)来检测三种蛋白的表达量，生成的数据被表示为标准化的蛋白质表达值。
12、优选地，所述术后疗效预测模块中采用的参考值为利用hbv-hcc患者群通过所述公式计算的风险评分的最佳截断值。根据本专利技术的具体实施方式，所述参考值具体为3.87。
13、优选地，本专利技术提供的系统中，所述术后疗效由患者的术后总生存率反映。
14、另一方面，本专利技术提供一种用于预测hbv-hcc患者经肝动脉化疗栓塞术的术后疗效的产品，所述产品可以在本专利技术提供的系统中使用。
15、优选地，所述产品为检测试剂盒，包括通过流式细胞术来检测cd4+tigit+pd1+t细胞和cd8+tigit+tim3+t细胞分别占相对cd4+t细胞和cd8+t细胞的百分比的试剂(例如分别特异性结合cd4、tigit、pd1、cd8、tim3的抗体或其片段)，以及通过olink多重邻近延伸分析来检测gal9、il8、tnfrsf4表达量的试剂。
16、更优选地，所述试剂盒还包括用于从所述患者获得外周血的试剂，和/或用于从中分离血浆或外周血单个核细胞的试剂。
17、本专利技术的专利技术人发现，基于免疫耗竭表型联合免疫蛋白表达，能够构建一种系统免疫分型，将hbv-hcc患者分成：cluster1(免疫活化型或非耗竭型)、cluster2(中间型)和cluster3(免疫耗竭或者抑制型)；其中，cluster3(免疫耗竭或者抑制型)临床特征更差、免疫检查点表达水平更高、预后更差。因此进而，本专利技术的专利技术人从中选择接受了tace的患者，基于不同免疫分型患者在tace术后的生存分析，获得了与患者tace术后临床应答情况或疗效直接相关的核心指标，即gal9、il8、tnfrsf4蛋白以及cd4+tigit+pd1+t细胞和cd8+tigit+tim3+t细胞。基于该核心指标，本专利技术的专利技术人进一步构建了风险评分系统，该系统能够预测肝癌tace治疗风险和术后疗效。实验证明，本专利技术提供的风险评分系统预测肝癌患者tace治疗后不同时间的总生存的roc面积均高于0.8。
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1.一种用于预测HBV-HCC患者经肝动脉化疗栓塞术的术后疗效的系统，所述系统包括：
2.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述样本处理模块设置为从所述患者获得外周血，并从中分离血浆和外周血单个核细胞。
3.根据权利要求1或2所述的系统，其特征在于，所述检测模块设置为使用流式细胞术来检测CD4+TIGIT+PD1+T细胞和CD8+TIGIT+TIM3+T细胞的百分比；并且，所述检测模块进一步设置为使用Olink多重邻近延伸分析来检测Gal9、IL8、TNFRSF4的表达量。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的系统，其特征在于，所述术后疗效预测模块中采用的参考值为利用HBV-HCC患者群通过所述公式计算的风险评分的最佳截断值。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的系统，其特征在于，所述参考值为3.87。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的系统，其特征在于，所述术后疗效由患者的术后总生存率反映。
7.一种用于预测HBV-HCC患者经肝动脉化疗栓塞术的术后疗效的产品，所述产品在权利要求1至6中任一项所述的系
8.根据权利要求7所述的产品，其特征在于，所述产品为检测试剂盒，包括通过流式细胞术来检测CD4+TIGIT+PD1+T细胞和CD8+TIGIT+TIM3+T细胞分别占相对CD4+T细胞和CD8+T细胞的百分比的试剂，以及通过Olink多重邻近延伸分析来检测Gal9、IL8、TNFRSF4表达量的试剂。
9.根据权利要求7所述的产品，其特征在于，所述试剂盒还包括用于从所述患者获得外周血的试剂，和/或用于从中分离血浆或外周血单个核细胞的试剂。
...【技术特征摘要】
1.一种用于预测hbv-hcc患者经肝动脉化疗栓塞术的术后疗效的系统，所述系统包括：
2.根据权利要求1所述的系统，其特征在于，所述样本处理模块设置为从所述患者获得外周血，并从中分离血浆和外周血单个核细胞。
3.根据权利要求1或2所述的系统，其特征在于，所述检测模块设置为使用流式细胞术来检测cd4+tigit+pd1+t细胞和cd8+tigit+tim3+t细胞的百分比；并且，所述检测模块进一步设置为使用olink多重邻近延伸分析来检测gal9、il8、tnfrsf4的表达量。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的系统，其特征在于，所述术后疗效预测模块中采用的参考值为利用hbv-hcc患者群通过所述公式计算的风险评分的最佳截断值。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的系统，其特征...
【专利技术属性】
技术研发人员：杨志云，于莉华，刘晓利，闫慧文，解宇晴，朴晴，江宇泳，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京地坛医院，
类型：发明
国别省市：
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