一种还原糖氧化酶及其分泌表达菌株的构建和应用制造技术

本发明专利技术公开了一种还原糖氧化酶及其分泌表达菌株的构建和应用，属于分子生物学和生物技术领域，该还原糖氧化酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1～12任一项所示；本发明专利技术还公开了该还原糖氧化酶在面制食品加工中的应用。本发明专利技术通过将还原糖氧化酶的编码基因转化到里氏木霉基因组中，依次代替里氏木霉中分泌表达量最高的两个纤维素酶基因——cbh1和cbh2，成功构建了分泌表达还原糖氧化酶的里氏木霉生产菌株。该生产菌株可用于食品级的还原糖氧化酶的生产，生产获得的还原糖氧化酶相较于同等酶活的葡萄糖氧化酶，显著提高烘焙食品的口感和白度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学和生物，特别是涉及一种还原糖氧化酶及其分泌表达菌株的构建和应用。

技术介绍

1、还原糖氧化酶可以将末端带有还原性糖残基的单糖和低聚糖氧化成相应的酸，产生过氧化氢，因此比葡萄糖氧化酶具有更加广泛的底物谱，将来会代替葡萄糖氧化酶应用在食品、饲料和动物保护等行业。同时，还原糖氧化酶还能氧化乳糖生产乳糖酸，氧化麦芽糖生产麦芽糖酸，可应用于各种糖酸的生产。elizabeth j团队最早从microdochiumnivale中发现还原糖氧化酶，此酶具有分泌肽，可以实现分泌表达。但在野生菌中还原糖氧化酶的表达产量低，酶活低且不易纯化。

2、毕赤酵母表达系统是目前商业化的真菌表达系统，具有操作简易、易于培养、生长速度快、表达量高、成本低、可以对外源蛋白翻译后修饰等优点。因此将还原糖氧化酶基因导入到载体ppic9k中，并在毕赤酵母gs115中胞外表达得到重组还原糖氧化酶，可以进行快速的酶活鉴定和筛选工作。

3、里氏木霉(trichoderma reesei或hypocreajecorina)是一种嗜温腐生性的丝状真菌，在二战期本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种还原糖氧化酶，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1～12任一项所示。

2.一种如权利要求1所述的还原糖氧化酶的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.13～36任一项所示。

3.一种表达载体，其特征在于，包含权利要求2所述的编码基因。

4.一种重组微生物菌株，其特征在于，包含权利要求3所述的表达载体。

5.根据权利要求4所述的重组微生物菌株，其特征在于，所述重组微生物菌株包含重组毕赤酵母或重组里氏木霉；

6.一种生产还原糖氧化酶的重组里氏木霉的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：<...

【技术特征摘要】

1.一种还原糖氧化酶，其特征在于，其氨基酸序列如seq id no.1～12任一项所示。

2.一种如权利要求1所述的还原糖氧化酶的编码基因，其特征在于，所述编码基因的核苷酸序列如seq id no.13～36任一项所示。

3.一种表达载体，其特征在于，包含权利要求2所述的编码基因。

4.一种重组微生物菌株，其特征在于，包含权利要求3所述的表达载体。

5.根据权利要求4所述的重组微生物菌株，其特征在于，所述重组微生物菌株包含重组毕赤酵母或重组里氏木霉；

6.一种生产还原糖氧化酶的重组里氏木霉的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

<...

【专利技术属性】
技术研发人员：王玮，喻超，丛家玮，蔡万钏，陈雨蒙，杨姣，黄浩，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：