【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及食品微生物与肝病药物，特别涉及一株筛选自老窖的酒醅、窖泥的酸鱼乳杆菌，应用于急性酒精性肝损伤中具有缓解作用。
技术介绍
1、在全球范围内，约有20亿人经常饮酒，其中约有7500万人患有酒精使用障碍。每年约有6％的人死于酗酒。机体摄入的酒精有超过90％在肝脏中代谢，因此酒精损伤的主要靶器官是肝脏，长期的乙醇暴露与酒精性肝损伤密切相关。酒精性肝损伤是全球发病率和死亡率最高的慢性疾病之一。酒精性肝损伤的病理性改变包括酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性纤维化、酒精性肝硬化与肝癌，这些变化可能在同一患者上单独、同时或依次发生。
2、酒精性肝损伤的发病机制较为复杂，主要有两个途径：(1)乙醇主要在肝脏通过三个酶系统代谢分解，分别为乙醇脱氢酶系、cyp2e1酶系和过氧化氢酶系。代谢中产生的乙醛和活性氧(ros)会显著提高肝脏的氧化应激压力，表现为损伤肝细胞的dna、蛋白质，抑制抗氧化酶系，引起脂质过氧化反应，导致肝细胞损伤，进而引起肝纤维化。(2)长期酒精摄入会致使肠道中革兰氏阴性菌含量上升，使得外周血液中脂多糖(lps)含量上升，过量的脂多糖会激活肝脏的内kupffer细胞，同时加剧对肠道黏膜屏障的损坏，产生促炎因子tnf-α、i l-6、i l-10和i l-1β，导致肝损伤和炎症发展。
3、目前，急性酒精性肝损伤的治疗主要以药物治疗为主，药物治疗有不同程度的抗炎抗氧化作用，但是，药物的摄入可能有一定副作用，也可能加重肝脏负担。因此，一种安全有效、低副作用的疗法亟待开发。近年来，乳酸菌作为一种益生菌，以
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术中的不足之处，提供了一种从老窖的酒醅、窖泥中分离出的酸鱼乳杆菌，其在酒精环境下具有良好的耐受性，旨在提供所述酸鱼乳杆菌的在预防、缓解酒精性肝损伤方向上的用途与应用。
2、为了实现本专利技术的目的，我们将采用如下所述的技术方案加以实施：
3、一株酸鱼乳杆菌菌株的保藏编号为gdmcc 63950，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心，保藏时间为三十年。
4、其中，保藏单位代码为gdmcc，保藏单位的wdcm编号为953，gdmcc 63950菌株的保藏日期为2023年11月01日，经检测gdmcc 63950菌株存活，gdmcc 63950菌株的分类命名为ligilactobacillus acidipiscis。
5、作为本专利技术进一步的技术方案，所述的一株酸鱼乳杆菌菌株的制备方法，该制备方法包括如下所述的步骤：
6、s1、从酒醅、窖泥样品中取样5g，经研钵研磨成泥状；
7、s2、将样品泥移入装有45ml 0.9％的无菌生理盐水的锥形瓶中，涡旋5min混匀；
8、s3、将锥形瓶移入转速500rpm，温度37℃的摇床中培养12h；
9、s4、在无菌条件下，取10ml活化后的样品加入到90ml 0.85％无菌生理盐水中，稀释成10-1浓度的稀释液，从稀释液中吸取1ml加入装有9ml 0.9％无菌生理盐水的试管中稀释为10-2浓度的稀释液；
10、s5、如此依次稀释，得到10-3、10-4、10-5、10-6、10-7倍数的稀释液；
11、s6、选取10-5、10-6、10-7浓度的稀释液，各吸取0.2ml分别均匀涂布于乳酸菌分离中，于37℃培养箱中倒置培养72h，挑取有明显碳酸钙透明圈，且透明圈较大的单菌落，接种于10ml mrs液体培养基中37℃培养18h，并进行编号；
12、s7、将各株菌液进行平板划线，在37℃下恒温倒置培养72h，挑取单菌落；如上反复纯化多次，将纯化得到的单菌落接种到10ml mrs液体培养基在37℃下恒温培养18h，充分涡旋菌液，吸取700μl菌液与300μl 70％甘油均匀混合，装入2ml保菌管，于-80℃冰箱保存。
13、作为本专利技术进一步的技术方案，所述的一株酸鱼乳杆菌gdmcc 63950菌株的16s测序鉴定的方法，在pcr扩增反应中，所使用的上游引物为27f((5′-ag agtttgatcctggctcag-3′)，下游引物为1492r(5′-ggttaccttgttacgactt-3′)。
14、所述的一株酸鱼乳杆菌菌株在缓解酒精性肝损伤方面的应用。
15、作为本专利技术进一步的技术方案，所述的一株酸鱼乳杆菌菌株在制备缓解酒精性肝损伤功能性饮料中的应用。
16、作为本专利技术进一步的技术方案，所述的功能性饮料包括：含酸鱼乳杆菌gd mcc63950的解酒乳酸菌饮料和含酸鱼乳杆菌gdmcc 63950的发酵非乳制品饮料。
17、作为本专利技术进一步的技术方案，所述的含酸鱼乳杆菌gdmcc 63950的解酒乳酸菌饮品的制备方法：将脱脂奶加热至85℃，保持15min，然后冷却至40℃；将酸鱼乳杆菌gdmcc63950以一定比例接种到脱脂奶中，进行发酵，直到ph值降至4.5作用；将发酵后的乳液加入木糖和木糖醇，进行美拉德反应，生成焦糖风味；将美拉德反应后将木糖、木糖醇和脱脂奶粉在水中搅拌分解，将得到的混合乳液在临时储罐中静置水合，通过板框的超高温加热，然后在发酵罐中进行褐变反应，在85℃下保持恒温反应0.8～1.2h，用冷水冷却，直接投入酸鱼乳杆菌gdmcc 63950菌株进行接种和活化，然后冷却发酵得到饮料原汁，破乳、混合、板框加热、均质化、灌装，最终得到含活性酸鱼乳杆菌gdmcc 63950的解酒乳酸菌饮品。
18、作为本专利技术进一步的技术方案，所述的含酸鱼乳杆菌gdmcc 63950的发酵非乳制品饮料的制备方法：选用清洗干净的豆类、谷物或果蔬等，进行初步榨汁得到原料汁，经过超高温灭菌后，转移入发酵罐并投入酸鱼乳杆菌gdmcc 63950菌株进行接种和活化，然后冷却发酵得到饮料原汁，经过破碎、混合、板框加热、均质化、灭菌、灌装，最终得到含酸鱼乳杆菌gdmcc 63950的发酵非乳制品饮料。
19、一株酸鱼乳杆菌gdmcc 63950菌株在抑制胃肠道致病菌方面的应用，所述的胃肠道致病菌包括：拟杆菌门、厚壁菌门与放线菌门。
20、一株酸鱼乳杆菌gdmcc 63950菌株在抑制血脂四项升高，血清alt、ast升高方面的应用。
21、有益效果
22、本专利技术从老窖的酒醅、窖泥中分离获得具有显著耐受乙醇能力的的益生菌—酸鱼乳杆菌gdmcc 63950，其对乙醇造成的肝脏组织病理学损伤，血脂四项升高，血清alt、ast升高有抑制作用；对酒精性肝损伤小鼠的抗氧化酶系酶活力降低起到显著恢复作用；对酒精性肝损伤小本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一株酸鱼乳杆菌菌株，其特征在于，所述的一株酸鱼乳杆菌菌株的保藏编号为GDMCC63950，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心，保藏时间为三十年。
2.根据权利要求1所述的一株酸鱼乳杆菌菌株的制备方法，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的一株酸鱼乳杆菌菌株的16s测序鉴定方法，其特征在于，PCR扩增所使用的上游引物为27F((5′-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3′)，下游引物为1492R(5′-GGTTACCTTGTTACGACTT-3′)。
4.根据权利要求1所述的一株酸鱼乳杆菌菌株在缓解酒精性肝损伤方面的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，制备缓解酒精性肝损伤的功能性饮料，所述的功能性饮料包括含酸鱼乳杆菌的解酒乳酸菌饮料和含酸鱼乳杆菌GDMCC 63950的发酵非乳制品饮料。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的含酸鱼乳杆菌GDMCC 63950的解酒乳酸菌饮品的制备方法：将脱脂奶加热至85℃，保持15min，然后冷却至40℃；将酸鱼乳杆菌GDMCC 63950以3％-5％
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的含酸鱼乳杆菌GDMCC 63950的发酵非乳制品饮料的制备方法：选用清洗干净的豆类、谷物或果蔬等，进行初步榨汁得到原料汁，经过超高温灭菌后，转移入发酵罐并投入酸鱼乳杆菌GDMCC 63950菌株进行接种和活化，然后冷却发酵得到饮料原汁，经过破碎、混合、板框加热、均质化、灭菌、灌装，最终得到含酸鱼乳杆菌GDMCC 63950的发酵非乳制品饮料。
8.根据权利要求1所述的一株酸鱼乳杆菌GDMCC 63950菌株在抑制胃肠道致病菌方面的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述的胃肠道致病菌包括：拟杆菌门、厚壁菌门与放线菌门。
10.根据权利要求1所述的一株酸鱼乳杆菌菌株在抑制血脂四项升高，血清ALT、AST升高方面的应用。
...【技术特征摘要】
1.一株酸鱼乳杆菌菌株，其特征在于，所述的一株酸鱼乳杆菌菌株的保藏编号为gdmcc63950，保藏单位为广东省微生物菌种保藏中心，保藏时间为三十年。
2.根据权利要求1所述的一株酸鱼乳杆菌菌株的制备方法，其特征在于，
3.根据权利要求1所述的一株酸鱼乳杆菌菌株的16s测序鉴定方法，其特征在于，pcr扩增所使用的上游引物为27f((5′-agagtttgatcctggctcag-3′)，下游引物为1492r(5′-ggttaccttgttacgactt-3′)。
4.根据权利要求1所述的一株酸鱼乳杆菌菌株在缓解酒精性肝损伤方面的应用。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，制备缓解酒精性肝损伤的功能性饮料，所述的功能性饮料包括含酸鱼乳杆菌的解酒乳酸菌饮料和含酸鱼乳杆菌gdmcc 63950的发酵非乳制品饮料。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的含酸鱼乳杆菌gdmcc 63950的解酒乳酸菌饮品的制备方法：将脱脂奶加热至85℃，保持15min，然后冷却至40℃；将酸鱼乳杆菌gdmcc 63950以3％-5％的比例接种到脱脂奶中，进行发酵，直到ph值降至4.5作用；将发酵后的乳液加入木糖和木糖醇，进行美拉德反应，生成焦糖风味；将...
【专利技术属性】
技术研发人员：陆颖健，李向菲，蔡子梵，孙静，庞心怡，
申请(专利权)人：南京财经大学，
类型：发明
国别省市：
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