【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于动物生物，具体地说，涉及一种十基因编辑异种器官移植供体猪的构建方法。
技术介绍
1、异种移植已被公认为是解决全球人类器官移植供需缺口的有效途径，猪-人异种器官移植被誉为是“下一次重大生物医学革命”。
2、异种器官移植仍需要克服排斥反应、控制炎症、调节凝血紊乱等问题，为了克服这些障碍，对异种移植的基因操作主要包括两个目的(i)失活猪来源异种抗原；(ii)转基因表达人类保护蛋白，包括凝血调节因子、补体调节因子、细胞免疫应答因子、抗凋亡和抗炎症因子等。近年来随着基因编辑技术的进步，各种基因编辑供体猪陆续报道。目前开展猪-人异种器官移植亚临床研究结果也有效证明了在ggta1基因敲除的基础上增加一些其他异种抗原基因敲除和人源化基因表达有助于降低异种器官移植产生的免疫排斥反应。针对这些主要异种抗原基因和大量的人源化基因表达修饰，现有的基因编辑技术应用普遍存在多基因组合同时编辑难度大、效率低、多基因编辑克隆猪存活率低、目的基因表达参差不齐等共性问题。
技术实现思路
1、针对以上...
【技术保护点】
1.GGTA1、β4GalNT2、CMAH基因sgRNA打靶载体，其特征在于：利用CRISPR/Cas9基因编辑技术，构建GGTA1、β4GalNT2、CMAH基因sgRNA打靶载体，sgRNA作用位点位于猪GGTA1基因的第3外显子、β4GalNT2基因的第2外显子、CMAH基因的第4外显子。
2.根据权利要求1所述的GGTA1、β4GalNT2、CMAH基因sgRNA打靶载体，其特征在于：包括：GGTA1-sgRNA1、GGTA1-sgRNA2、β4GalNT2-sgRNA1、β4GalNT2-sgRNA2、β4GalNT2-sgRNA3、CMAH-s...
【技术特征摘要】
1.ggta1、β4galnt2、cmah基因sgrna打靶载体，其特征在于：利用crispr/cas9基因编辑技术，构建ggta1、β4galnt2、cmah基因sgrna打靶载体，sgrna作用位点位于猪ggta1基因的第3外显子、β4galnt2基因的第2外显子、cmah基因的第4外显子。
2.根据权利要求1所述的ggta1、β4galnt2、cmah基因sgrna打靶载体，其特征在于：包括：ggta1-sgrna1、ggta1-sgrna2、β4galnt2-sgrna1、β4galnt2-sgrna2、β4galnt2-sgrna3、cmah-sgrna1和cmah-sgrna2；ggta1-sgrna1的核苷酸序列如seq id no:1所示；ggta1-sgrna2的核苷酸序列如seq id no:2所示；β4galnt2-sgrna1的核苷酸序列如seq id no:5所示；β4galnt2-sgrna2的核苷酸序列如seq id no:6所示；β4galnt2-sgrna3的核苷酸序列如seq id no:7所示；cmah-sgrna1的核苷酸序列如seq id no:8所示；cmah-sgrna2的核苷酸序列如seq id no:9所示。
3.根据权利要求1或2所述的ggta1、β4galnt2、cmah基因sgrna打靶载体，其特征在于：骨架载体为px458-sgrna-egfp，其基因序号为：addgeneno：112220。
4.用于敲除猪基因组中的ggta1、β4galnt2、cmah基因的重组质粒，其特征在于：重组质粒的核苷酸序列如seq id no:10所示。
5.ggta1基因sgrna打靶载体，其特征在于：sgrna作用位点位于猪ggta1基因的第8外显子，ggta1-sgrna3的核苷酸序列如seq id no:3所示；ggta1-sgrna4的核苷酸序列如seq idno:4所示，分别连接至骨架载体px458-sgrna-egfp，骨架载体的基因序号为：addgene no：112220。
6.用于敲除猪基因组中的ggta1基因的重组质粒，其特征在于：重组质粒的核苷酸序列如seq id n...
【专利技术属性】
技术研发人员：魏红江，赵恒，赵红业，王娇祥，角德灵，郭建雄，魏太云，徐凯祥，
申请(专利权)人：云南农业大学，
类型：发明
国别省市：
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