一种核酸绝对定量检测体系及核酸绝对定量方法技术

本发明专利技术公开了一种核酸绝对定量检测体系及核酸绝对定量方法。所述核酸绝对定量检测体系含有：四臂聚乙二醇丙烯酸酯、双巯基聚乙二醇、靶标核酸分子的引物和核酸扩增反应的试剂，所述核酸绝对定量检测体系中所述四臂聚乙二醇丙烯酸酯和双巯基聚乙二醇的质量比为(1～2):1。本发明专利技术设计独特水凝胶核酸扩增反应体系，利用水凝胶固有的多孔结构将待测样本中的靶标核酸分子均匀地限制在孔中，并对整个体系进行扩增和荧光成像，最后根据水凝胶中荧光亮点的个数，结合泊松分布定理计算出样本中靶标核酸分子的具体起始拷贝数，实现绝对定量，无需额外物理结构及制作标准曲线，显著降低成本，简化工艺。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分子生物学，涉及一种核酸绝对定量检测体系及核酸绝对定量方法。

技术介绍

1、核酸包括dna和rna，编码遗传信息，充当允许遗传物质在生物世代之间传递的存储介质。核酸扩增和定量一直是分子生物学领域的核心技术之一，已应用到分子测序、基因表达分析、基因突变研究、疾病早期分子诊断、单核苷酸多态性和药物筛选等研究领域，并起到重要作用。。

2、目前，应用最多的核酸定量技术是实时荧光定量聚合酶链式反应(qpcr)。这种方法在检测时根据加入的荧光分子探针信号实时观察模板的扩增情况，检测结果以线性的扩增信号形式输出，根据已知标准样品的扩增曲线来推算未知样品的起始模板拷贝量。因而qpcr技术是一种相对的核算定量方法，其灵敏度和准确性均受到限制。近年来，数字聚合酶链式反应(dpcr)技术发展迅速，该技术通过将单个核酸分子分隔在单个隔室中进行pcr反应以鉴定目标分子的存在。目前dpcr技术主要有微流控芯片阵列反应室或液滴数字分析技术和乳液微滴数字分析技术两种。基于微流控装置及芯片的dpcr技术的可扩展性有限、检测通量低。乳液微滴数字分析技术采用乳液密封磁本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种核酸绝对定量检测体系，其特征在于，所述核酸绝对定量检测体系含有：四臂聚乙二醇丙烯酸酯、双巯基聚乙二醇、靶标核酸分子的引物和核酸扩增反应的试剂；

2.根据权利要求1所述的核酸绝对定量检测体系，其特征在于，所述四臂聚乙二醇丙烯酸酯的重均分子量为5000～20000；

3.根据权利要求1或2所述的核酸绝对定量检测体系，其特征在于，所述靶标核酸分子包括大肠杆菌23S核糖体基因、细胞角蛋白19基因或HPV基因中任意一种或至少两种的组合。

4.根据权利要求1-3任一项所述的核酸绝对定量检测体系，其特征在于，所述核酸扩增反应包括环介导等温扩增反应、重组酶聚合...

【技术特征摘要】

1.一种核酸绝对定量检测体系，其特征在于，所述核酸绝对定量检测体系含有：四臂聚乙二醇丙烯酸酯、双巯基聚乙二醇、靶标核酸分子的引物和核酸扩增反应的试剂；

2.根据权利要求1所述的核酸绝对定量检测体系，其特征在于，所述四臂聚乙二醇丙烯酸酯的重均分子量为5000～20000；

3.根据权利要求1或2所述的核酸绝对定量检测体系，其特征在于，所述靶标核酸分子包括大肠杆菌23s核糖体基因、细胞角蛋白19基因或hpv基因中任意一种或至少两种的组合。

4.根据权利要求1-3任一项所述的核酸绝对定量检测体系，其特征在于，所述核酸扩增反应包括环介导等温扩增反应、重组酶聚合酶扩增反应、聚合酶链式扩增反应或滚环扩增反应中的任意一种。

5.根据权利要求3所述的核酸绝对定量检测体系，其特征在于，所述大...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈雯雯，陆曦，王纪东，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：