【技术实现步骤摘要】
本申请属于生物科学，尤其涉及一种抗肿瘤抗炎症相关的纳米抗体及其制备方法与应用。
技术介绍
1、基质金属蛋白酶可以通过降解细胞外基质促进肿瘤转移侵袭及对肠道上皮细胞屏障的破坏有着重要作用，因此基质金属蛋白酶一直是抗肿瘤和抑制肠炎疾病的主要靶点。基质金属蛋白酶9(mmp9)是基质金属蛋白酶家族重要的一员，已证明在乳腺癌、结肠癌和肠道炎症中高表达；并且已有研究证明其在血管生成、肿瘤转移和侵袭以及肠道炎症中对组织损伤起关键作用。因此，阻断mmp9为肿瘤和炎症疾病提供新的策略。
2、然而，大多数mmp9抑制剂都为小分子广谱抑制剂，因选择性不高引起严重的副作用最终止步于临床研究。此外，mmp9单克隆抗体虽弥补了小分子抑制剂的部分功能缺陷，但因其难以进入mmp9凹槽结构的酶活性中心在临床试验中也宣告失败。虽然在治疗癌症和炎症性肠病中，大多mmp9抑制剂均止步于临床试验。但由于在其中发挥的重要作用，迫切需要选择性更高且能作用与催化域的mmp9抑制剂。
3、首先，纳米抗体具有分子量小、亲和力高、特异性强和免疫原性低的优势，使其易于穿透组织屏障靶向病灶与酶活性位点结合，大大降低副作用；其次，由于其结构相对简单，易于改造和修饰，可以与小分子或蛋白药物偶联，更有效杀伤肿瘤或治疗相关的疾病；并且还具有良好的稳定性，可以在原核或真核系统中高表达，使其在运输和生产过程中可以降低成本，更有利于应用。纳米抗体作为抗肿瘤抗炎症药物有望提高治疗的特异性和效力，同时减少副作用，为患者带来更有效和更安全的治疗选择。因此，亟需提供一种抗肿瘤抗炎症相
技术实现思路
1、本申请的目的在于提供一种抗肿瘤抗炎症相关的纳米抗体及其制备方法与应用，旨在解决现有技术中缺乏一种具有广谱性的能够同时抗肿瘤抗炎症的纳米抗体的问题。
2、为实现上述申请目的，本申请采用的技术方案如下：
3、第一方面，本申请提供一种抗肿瘤抗炎症相关的纳米抗体，纳米抗体包括纳米抗体vhh02-8d，其中，纳米抗体vhh02-8d的氨基酸序列如seq.id no.1所示。
4、在一些实施例中，纳米抗体包括4个框架区fr1、fr2、fr3、fr4和3个互补决定区cdr1、cdr2、cdr3；其中，纳米抗体vhh02-8d中，fr1的氨基酸序列如seq id no.2所示，fr2的氨基酸序列如seq id no.3所示，fr3的氨基酸序列如seq id no.4所示，fr4的氨基酸序列如seq id no.5所示，cdr1的氨基酸序列如seq id no.6所示，cdr2的氨基酸序列如seq idno.7所示，cdr3的氨基酸序列如seq id no.8所示。
5、在一些实施例中，纳米抗体vhh02-8d的碱基序列如seq.id no.9所示。
6、第二方面，本申请提供一种抗肿瘤抗炎症相关的纳米抗体的制备方法，包括如下步骤：
7、提供抗肿瘤抗炎症相关目的蛋白抗原进行羊驼免疫，收集羊驼血液并进行cdna提取，以cdna为模板进行pcr扩增，得到目的dna片段；
8、将目的dna片段连接至载体中进行转化得到目的dna-载体文库；
9、将目的dna-载体文库进行扩增得到噬菌体文库，再进行富集筛选，并进行单克隆抗体表达和纯化，得到抗肿瘤抗炎症相关的纳米抗体序列。
10、在一些实施例中，抗肿瘤抗炎症相关目的蛋白抗原为mmp9催化域。
11、在一些实施例中，载体细胞选自噬菌粒pcomb3x。
12、在一些实施例中，富集筛选的步骤中，进行2～3轮富集筛选。
13、第三方面，本申请提供抗肿瘤抗炎症相关的纳米抗体在制备防治肿瘤或炎症相关的药物中的应用。
14、第四方面，本申请提供抗肿瘤抗炎症相关的纳米抗体在制备检测肿瘤或炎症的检测试剂或检测试剂盒中的应用。
15、第五方面，本申请提供一种治疗肿瘤或炎症的药物，药物包括抗肿瘤抗炎症相关的纳米抗体；其中，肿瘤包括乳腺肿瘤或结肠肿瘤，炎症包括肠炎。
16、本申请第一方面提供的一种抗肿瘤抗炎症相关的纳米抗体，纳米抗体包括纳米抗体vhh02-8d，其中，纳米抗体vhh02-8d的氨基酸序列如seq.id no.1所示；该纳米抗体vhh02-8d能够特异性针对与肿瘤和炎症相关蛋白mmp9结合，能够有效抑制mmp9蛋白酶的活性，能够作为mmp9抑制剂，并且，提供的纳米抗体vhh02-8d在小鼠乳腺癌、结肠癌以及炎症性肠病模型中均发挥出良好的治疗作用，能够明显的抑制乳腺癌的转移，以及乳腺癌和结肠癌的发发展，还能通过抑制mmp9酶的活性从而很好的缓解结肠炎的炎症反应，可用于制备抗肿瘤抗炎症相关的药物，应用范围广泛。
17、本申请第二方面提供的抗肿瘤抗炎症相关的纳米抗体的制备方法，该制备方法使用抗肿瘤抗炎症相关的目的蛋白抗原对羊驼进行免疫来获得免疫文库，通过筛选获得针对mmp9催化域的特异性纳米抗体，该制备方法简单方便，有利于广泛应用。
18、本申请第三方面提供的抗肿瘤抗炎症相关的纳米抗体在制备防治肿瘤或炎症相关的药物中的应用；由于抗肿瘤抗炎症相关的纳米抗体能够有效抑制mmp9蛋白酶的活性，能够作为mmp9抑制剂，因此，有利于在制备防治肿瘤或炎症相关的药物中的应用。
19、本申请第四方面提供的抗肿瘤抗炎症相关的纳米抗体在制备检测肿瘤或炎症的检测试剂或检测试剂盒中的应用；由于抗肿瘤抗炎症相关的纳米抗体能够有效抑制mmp9蛋白酶的活性，能够作为mmp9抑制剂，因此，有利于在制备检测肿瘤或炎症的检测试剂或检测试剂盒中的应用。
20、本申请第五方面提供的治疗肿瘤或炎症的药物，药物包括抗肿瘤抗炎症相关的纳米抗体；其中，肿瘤包括乳腺肿瘤或结肠肿瘤，炎症包括肠炎；由于提供的纳米抗体能够有效抑制mmp9蛋白酶的活性，能够作为mmp9抑制剂，因此，该纳米抗体能够作为制备治疗肿瘤或炎症的药物进行使用。
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1.一种抗肿瘤抗炎症相关的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包括纳米抗体VHH02-8D，其中，所述纳米抗体VHH02-8D的氨基酸序列如Seq.ID NO.1所示。
2.根据权利要求1所述的抗肿瘤抗炎症相关的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包括4个框架区FR1、FR2、FR3、FR4和3个互补决定区CDR1、CDR2、CDR3；其中，所述纳米抗体VHH02-8D中，FR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，FR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，FR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示，FR4的氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示，CDR1的氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示，CDR2的氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示，CDR3的氨基酸序列如SEQ ID NO.8所示。
3.根据权利要求1所述的抗肿瘤抗炎症相关的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体VHH02-8D的碱基序列如Seq.ID NO.9所示。
4.一种如权利要求1～3任一项所述的抗肿瘤抗炎症相关的纳米抗体的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
...【技术特征摘要】
1.一种抗肿瘤抗炎症相关的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包括纳米抗体vhh02-8d，其中，所述纳米抗体vhh02-8d的氨基酸序列如seq.id no.1所示。
2.根据权利要求1所述的抗肿瘤抗炎症相关的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体包括4个框架区fr1、fr2、fr3、fr4和3个互补决定区cdr1、cdr2、cdr3；其中，所述纳米抗体vhh02-8d中，fr1的氨基酸序列如seq id no.2所示，fr2的氨基酸序列如seq id no.3所示，fr3的氨基酸序列如seq id no.4所示，fr4的氨基酸序列如seq id no.5所示，cdr1的氨基酸序列如seq id no.6所示，cdr2的氨基酸序列如seq id no.7所示，cdr3的氨基酸序列如seq id no.8所示。
3.根据权利要求1所述的抗肿瘤抗炎症相关的纳米抗体，其特征在于，所述纳米抗体vhh02-8d的碱基序列如seq.id no.9所示。
4.一种如权利...
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