【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及活性寡糖的降解制备领域，具体涉及一种张文宏拟杆菌菌株及其在降解制备透明质酸寡糖中的应用。
技术介绍
1、透明质酸(hyaluronic acid，ha)，俗称玻尿酸，是一种线性糖胺聚糖。透明质酸由d-葡萄糖醛酸和n-乙酰基氨基-d-葡萄糖组成的二糖重复单元交替连接而成(doi:10.3390/biom10111525)。透明质酸存在于关节滑液和多种组织的细胞外基质中，在组织重塑、炎症和癌症形成中发挥着重要作用，并且其已广泛应用于医药、食品和医疗保健等领域(doi:10.1016/j.carbpol.2021.118320)。高分子量透明质酸具有较强的保水作用，但缺乏免疫活性；低分子量透明质酸，尤其是透明质酸寡糖，具有促血管生成、促进伤口修复(doi:
2、10.3390/ijms20153722)、抑制肿瘤细胞多药耐药性(doi:10.1038/bjc.2014.332)等作用。研究表明，透明质酸四糖能够通过增强cd44基因表达、cd44磷酸化蛋白调控和人角质形成细胞分化促进表皮分化(doi:10.1111/ics.12105)。另外，不饱和透明质酸寡糖对人类喉癌细胞、成神经管细胞癌、人类乳腺癌细胞和结肠腺癌细胞的增殖具有抑制作用，同时具有抗氧化作用(doi:10.1016/j.carbpol.2010.06.042)。
3、目前制备透明质酸寡糖的方法主要有物理法、化学法和生物酶法。物理降解法主要通过超声波和加热使大分子量的透明质酸降解，该方法得到的透明质酸分子量分布较窄，且很难达到10kd
4、拟杆菌在复杂碳水化合物的降解代谢中起着重要作用(doi:10.3389/fmicb.2022.1033355)，虽然萨利尔斯氏拟杆菌可以降解制备透明质酸寡糖，但是其降解产生的寡糖聚合度较高(中国专利技术专利申请号：cn202310238846.8)。此外，是否存在其他的拟杆菌能够降解制备特定分子量的透明质酸寡糖并未得到研究。透明质酸四糖具有良好的显著免疫增强和促进表皮细胞分化的作用(doi:10.1016/j.carbpol.2021.118699；doi:10.1111/ics.12105)，因此，通过微生物降解制备以四糖为主的透明质酸寡糖具有重要的应用前景。张文宏拟杆菌是健康人体肠道中的正常共生菌(doi:10.1099/ijsem.0.004772)，然而其是否能够用于降解制备透明质酸寡糖目前并未有研究报道。本研究首次发现，健康人体肠道来源的张文宏拟杆菌(bacteroides zhangwenhongii)d2-16能够将透明质酸降解为聚合度主要为4的不饱和寡糖。本研究为微生物发酵降解制备透明质酸寡糖提供了新思路，具有广阔的市场应用前景。
技术实现思路
1、基于现有技术中的不足，本专利技术公开了一种张文宏拟杆菌菌株及其在降解制备透明质酸寡糖中的应用。
2、本专利技术的第一方面，提供了一种张文宏拟杆菌菌株，所述张文宏拟杆菌菌株具体为张文宏拟杆菌菌株d2-16(bacteroides zhangwenhongii d2-16)，该菌株源分离自健康人体粪便，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为cctccno:m 20232720。
3、进一步的，所述的菌株d2-16分离自健康人体粪便。
4、进一步的，所述的菌株d2-16的dna序列如seq id no.1所示。
5、本专利技术的第二方面，提供了一种张文宏拟杆菌菌株d2-16在降解制备透明质酸寡糖的应用。
6、进一步的，所述张文宏拟杆菌菌株d2-16降解的透明质酸分子量为40～2000kda。
7、进一步的，张文宏拟杆菌菌株d2-16在降解制备透明质酸寡糖的应用的方法为：将张文宏拟杆菌菌株d2-16经活化培养后获得的种子液接种至透明质酸培养基中进行厌氧发酵培养，薄层层析法检测菌株对透明质酸的降解。
8、进一步的，所述透明质酸培养基终浓度组成为：透明质酸6～10g/l、胰蛋白胨2～4g/l、蛋白胨2～4g/l、酵母提取物2～4g/l、粘液素0.4～0.6g/l、3号胆盐0.3～0.5g/l、半胱氨酸盐酸盐0.7～0.9g/l、血红素0.04～0.06g/l、吐温80 0.8～1.2ml/l、氯化钠4～5g/l、氯化钾2～3g/l、氯化镁4～5g/l、氯化钙0.1～0.3g/l、磷酸二氢钾0.3～0.5g/l、微量元素1～3ml/l，溶剂为蒸馏水，ph值为6.4～6.5。
9、进一步的，具体的应用步骤具体为：步骤1)种子培养：将张文宏拟杆菌菌株d2-16接种至种子培养基，25～42℃培养1～4天，获得种子液；所述种子培养基将透明质酸培养基中的透明质酸用6～10g/l葡萄糖替换，其他组成同透明质酸培养基其他组成；步骤2)发酵培养：将步骤1)获得的种子液以体积比1％～10％的接种量接种至透明质酸培养基中，25～42℃培养，薄层色谱层析跟踪透明质酸的降解。
10、进一步的，所述的降解制备的透明质酸寡糖为不饱和二糖、饱和三糖、不饱和四糖、不饱和六糖和不饱和八糖。
11、本专利技术的优点及有益效果
12、本专利技术提供的一株张文宏拟杆菌菌株d2-16，该菌株能够将分子量为40～2000kda的透明质酸降解为聚合度主要为4的不饱和透明质酸寡糖。
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1.一种张文宏拟杆菌菌株D2-16，其特征在于，所述张文宏拟杆菌菌株命名为Bacteroides zhangwenhongii D2-16，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M 20232720。
2.根据权利要求1所述的一种张文宏拟杆菌菌株D2-16，其特征在于，所述的菌株D2-16分离自健康人体粪便。
3.根据一种权利要求1所述的张文宏拟杆菌菌株D2-16，其特征在于，所述的菌株D2-16的DNA序列如SEQ ID NO.1所示。
4.权利要求1所述的张文宏拟杆菌菌株D2-16在降解制备透明质酸寡糖的应用。
5.根据权利要求4所述的一种张文宏拟杆菌菌株D2-16在降解制备透明质酸寡糖的应用，其特征在于，所述透明质酸分子量为40～2000kDa。
6.根据权利要求4所述的一种张文宏拟杆菌菌株D2-16在降解制备透明质酸寡糖的应用，其特征在于，所述应用的方法为：将张文宏拟杆菌菌株D2-16经活化培养后获得的种子液接种至透明质酸培养基中进行厌氧发酵培养，薄层层析法检测菌株对透明质酸的降解。
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