System.ArgumentOutOfRangeException: 索引和长度必须引用该字符串内的位置。 参数名: length 在 System.String.Substring(Int32 startIndex, Int32 length) 在 zhuanliShow.Bind() 一种用于鉴定肺炎链球菌血清型分子靶标组合及鉴定肺炎链球菌血清型的方法技术_技高网
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一种用于鉴定肺炎链球菌血清型分子靶标组合及鉴定肺炎链球菌血清型的方法技术

技术编号：41260906 阅读：4 留言：0更新日期：2024-05-11 09:19
本申请涉及微生物检验的技术领域，具体公开了一种用于鉴定肺炎链球菌血清型分子靶标组合及鉴定肺炎链球菌血清型的方法。本申请公开的用于鉴定肺炎链球菌血清型分子靶标组合包括如SEQ ID NO.1‑23所示的核苷酸序列；所述SEQ ID NO.1‑23所示的核苷酸序列的分子靶标分别用于鉴别1、2、4、5、6A、6B、7F、8、9V、9N、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F、33F型肺炎链球菌。利用上述分子靶标组合鉴定不同血清型的肺炎链球菌，具有检测时间短、成本低、操作简单、特异性强的优点。

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【技术实现步骤摘要】

本申请涉及微生物检验的，具体涉及一种用于鉴定肺炎链球菌血清型分子靶标组合及鉴定肺炎链球菌血清型的方法。


技术介绍

1、肺炎链球菌是一种兼性厌氧的革兰氏阳性细菌，人类是肺炎链球菌唯一的天然宿主。肺炎链球菌可在人体鼻咽部定殖，并通过呼吸道飞沫传播。在一定情况下，肺炎链球菌会导致局部感染，如鼻炎、中耳炎、肺炎等，此外，肺炎链球菌还会引起病死率较高的全身性感染，如菌血症和脑膜炎。肺炎链球菌感染在全球范围内引起了较大的医疗负担。

2、荚膜多糖是肺炎链球菌的主要毒力因子，抗荚膜多糖的抗体对肺炎链球菌感染具有保护作用。根据荚膜多糖的免疫特性，肺炎链球菌已被发现超过100种血清型。目前已有以肺炎链球菌荚膜多糖为主要组分的23价肺炎链球菌多糖疫苗和20价肺炎链球菌结合疫苗上市。上述疫苗生产时均需肺炎链球菌作为菌毒种进行培养发酵。

3、疫苗生产用菌毒种均需进行分子遗传特性和遗传稳定性进行检测。常用的分子生物学方法为16s rrna测序和全基因测序测定等。但肺炎链球菌所有血清型16s rrna均高度保守，无法区分不同血清型的肺炎链球菌；而全基因组测序则耗时较久且成本较高，无法作为常规检项应用于肺炎链球菌的检测中。传统的生化手段则操作繁琐，费时费力。

4、近些年，随着分子生物学的发展，pcr和一代测序方法日趋成熟，成本愈加减低，且具有快速、简便的特点。但该方法需明确具体的分子检测靶标，目前市面尚未有针对不同血清型肺炎链球菌分子靶标的报道。寻找特异性的分子靶标对于降低肺炎链球菌的血清型的鉴别成本具有重要意义。

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技术实现思路

1、为了寻找特异性的分子靶标，降低肺炎链球菌的血清型的鉴别成本，本申请提供一种用于鉴定肺炎链球菌血清型分子靶标组合及鉴定肺炎链球菌血清型的方法。

2、第一方面，本申请提供了一种用于鉴定肺炎链球菌血清型的分子靶标组合，其特征在于，所述分子靶标组合包括如seq id no.1-23所示的核苷酸序列；所述seq id no.1-23所示的核苷酸序列的分子靶标分别用于鉴别1、2、4、5、6a、6b、7f、8、9v、9n、10a、11a、12f、14、15b、17f、18c、19a、19f、20、22f、23f、33f型肺炎链球菌。

3、其中，所述seq id no.1所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别1型肺炎链球菌，

4、所述seq id no.2所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别2型肺炎链球菌，

5、所述seq id no.3所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别4型肺炎链球菌，

6、所述seq id no.4所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别5型肺炎链球菌，

7、所述seq id no.5所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别6a型肺炎链球菌，

8、所述seq id no.6所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别6b型肺炎链球菌，

9、所述seq id no.7所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别7f型肺炎链球菌，

10、所述seq id no.8所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别8型肺炎链球菌，

11、所述seq id no.9所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别9v型肺炎链球菌，

12、所述seq id no.10所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别9n型肺炎链球菌，

13、所述seq id no.11所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别10a型肺炎链球菌，

14、所述seq id no.12所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别11a型肺炎链球菌，

15、所述seq id no.13所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别12f型肺炎链球菌，

16、所述seq id no.14所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别14型肺炎链球菌，

17、所述seq id no.15所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别15b型肺炎链球菌，

18、所述seq id no.16所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别17f型肺炎链球菌，

19、所述seq id no.17所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别18c型肺炎链球菌，

20、所述seq id no.18所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别19a型肺炎链球菌，

21、所述seq id no.19所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别19f型肺炎链球菌，

22、所述seq id no.20所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别20型肺炎链球菌，

23、所述seq id no.21所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别22f型肺炎链球菌，

24、所述seq id no.22所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别23f型肺炎链球菌，

25、所述seq id no.23所示的核苷酸序列的分子靶标用于鉴别33f型肺炎链球菌。

26、利用上述分子靶标组合鉴定不同血清型的肺炎链球菌，具有检测时间短、成本低、操作简单、特异性强的优点。

27、第二方面，本申请提供了一种用于扩增上述分子靶标组合的引物对，所述引物对的序列按5’到3’如seq id no.24-69所示。

28、其中，seq id no.24、25所示的引物对用于扩增所述seq id no.1所示核苷酸序列的分子靶标，

29、seq id no.26、27所示的引物对用于扩增所述seq id no.2所示的核苷酸序列的分子靶标，

30、seq id no.28、29所示的引物对用于扩增所述seq id no.3所示的核苷酸序列的分子靶标，

31、seq id no.30、31所示的引物对用于扩增所述seq id no.4所示的核苷酸序列的分子靶标，

32、seq id no.32、33所示的引物对用于扩增所述seq id no.5所示的核苷酸序列的分子靶标，

33、seq id no.34、35所示的引物对用于扩增所述seq id no.6所示的核苷酸序列的分子靶标，

34、seq id no.36、37所示的引物对用于扩增所述seq id no.7所示的核苷酸序列的分子靶标，

35、seq id no.38、39所示的引物对用于扩增所述seq id no.8所示的核苷酸序列的分子靶标，

36、seq id no.40、41所示的引物对用于扩增所述seq id no.9所示的核苷酸序列的分子靶标，

37、seq id no.42、43所示的引物对用于扩增所述seq id no.10所示的核苷酸序列的分子靶标，

38、seq id no.44、45所示的引物对用于扩增所述seq id no.11所示的核苷酸序列的分子靶标，

39、seq id no.46、47所示的引物对用于扩增所述seq id no.12所示本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种用于鉴定肺炎链球菌血清型的分子靶标组合，其特征在于，所述分子靶标组合包括如SEQ ID NO.1-23所示的核苷酸序列；所述SEQ ID NO.1-23所示的核苷酸序列的分子靶标分别用于鉴别1、2、4、5、6A、6B、7F、8、9V、9N、10A、11A、12F、14、15B、17F、18C、19A、19F、20、22F、23F、33F型肺炎链球菌。

2.一种用于扩增如权利要求1所述分子靶标组合的引物对，其特征在于，所述引物对的序列按5’到3’如SEQ ID NO.24-69所示。

3.一种鉴定肺炎链球菌血清型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求2所述的引物对。

4.如权利要求1所述的分子靶标组合或如权利要求2所述的引物对或权利要求3所述的试剂盒在鉴定肺炎链球菌血清型中的应用，所述应用为非疾病诊断和治疗目的应用。

5.一种用于非疾病诊断和治疗目的鉴定肺炎链球菌血清型的方法，其特征在于，包括如下步骤：

6.根据权利要求5所述鉴定肺炎链球菌血清型的方法，其特征在于，PCR反应体系为：含Mg2+PCR缓冲液、dNTP、扩增引物对、Taq聚合酶和双蒸水。

7.根据权利要求6所述鉴定肺炎链球菌血清型的方法，其特征在于，PCR反应体系为：含Mg2+PCR缓冲液2.5μl、dNTP 2.0μl、模板DNA 1.0μl、扩增引物对1μl+1μl、Taq聚合酶1U、双蒸水补足体积至25μl。

8.根据权利要求5所述鉴定肺炎链球菌血清型的方法，其特征在于，所述PCR扩增程序为：94℃预变性5min，94℃变性30s，65℃退火30s，72℃延伸90s，反应30个循环，最后72℃延伸8min。

9.根据权利要求5所述鉴定肺炎链球菌血清型的方法，其特征在于，测序过程为：将PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，电压220v运行45min，电泳结束后将目的条带切下，用胶回收试剂盒进行回收；将纯化后检测成功的样品进行BDT反应；依次加入引物，纯化后PCR产物，buffer，测序酶；上PCR仪进行扩增；扩增后产物使用酒精纯化法进行纯化，纯化后产物加入HIDI混匀，上机测序。

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【技术特征摘要】

1.一种用于鉴定肺炎链球菌血清型的分子靶标组合，其特征在于，所述分子靶标组合包括如seq id no.1-23所示的核苷酸序列；所述seq id no.1-23所示的核苷酸序列的分子靶标分别用于鉴别1、2、4、5、6a、6b、7f、8、9v、9n、10a、11a、12f、14、15b、17f、18c、19a、19f、20、22f、23f、33f型肺炎链球菌。

2.一种用于扩增如权利要求1所述分子靶标组合的引物对，其特征在于，所述引物对的序列按5’到3’如seq id no.24-69所示。

3.一种鉴定肺炎链球菌血清型的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求2所述的引物对。

4.如权利要求1所述的分子靶标组合或如权利要求2所述的引物对或权利要求3所述的试剂盒在鉴定肺炎链球菌血清型中的应用，所述应用为非疾病诊断和治疗目的应用。

5.一种用于非疾病诊断和治疗目的鉴定肺炎链球菌血清型的方法，其特征在于，包括如下步骤：

6.根据权利要求5所述鉴定肺炎链球菌血清型的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：马宏初，孙述学，张景春，
申请(专利权)人：北京成大天和生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：

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