【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及一种mdth变体以及使用其生产o-磷酸丝氨酸和半胱氨酸以及半胱氨酸的衍生物的方法。
技术介绍
1、l-半胱氨酸是所有活生物体硫代谢中的重要氨基酸，不仅用于诸如毛发角蛋白、谷胱甘肽、生物素、蛋氨酸以及其他含硫代谢产物等体内蛋白质的合成，还作为辅酶a的生物合成的前体。
2、关于通过使用微生物生产l-半胱氨酸，公开了：1)通过使用微生物生物转化d,l-2-氨基噻唑啉-4-羧酸(d，l-atc)的方法；2)使用大肠杆菌生产l-半胱氨酸的直接发酵方法(欧洲专利ep 0885962 b；和wada m与takagi h,appl.microbiol.biochem.,73:48-54,2006)；以及3)通过使用微生物发酵生产o-磷酸丝氨酸(以下简称“ops”)，然后在o-磷酸丝氨酸巯基酶(以下称为“opss”)的催化作用下，通过使ops与硫化物反应将ops转化为l-半胱氨酸的方法(欧洲专利公开ep 2444481)。
3、然而，由于对l-半胱氨酸的需求不断增加，仍然需要研究有效的l-氨基酸生产方法。特别是，为了通过方法3)高产率地生产半胱氨酸，需要过量生产前体ops。
技术实现思路
1、技术问题
2、作为过度生产其前体ops以生产高产量半胱氨酸的大量努力的结果，本专利技术人通过证实mdth变体增加了ops的生产能力而完成了本申请。
3、技术方案
4、本公开内容的一个方面是提供mdth变体，其中对应于seq id no：
5、本公开内容的另一个方面是提供编码本公开内容的变体的多核苷酸。
6、本公开内容的仍一个方面是提供包含本公开内容的多核苷酸的载体。
7、本公开内容的仍另一个方面是提供一种含有mdth变体或编码该变体的多核苷酸的大肠杆菌属重组微生物，其中对应于seq id no：1的氨基酸序列中第125位的氨基酸被另一种氨基酸取代。
8、本公开内容的仍另一个方面是提供一种生产o-磷酸丝氨酸的方法，该方法包括在培养基中培养含有mdth变体或编码该变体的多核苷酸的微生物，其中对应于seq id no：1的氨基酸序列中第125位的氨基酸被另一种氨基酸取代。
9、本公开内容的仍另一个方面是提供一种生产半胱氨酸或其衍生物的方法，该方法包括：a)在培养基中培养含有mdth变体或编码该变体的多核苷酸的微生物，其中对应于seqid no：1的氨基酸序列中第125位的氨基酸被另一种氨基酸取代，从而产生o-磷酸丝氨酸或含有o-磷酸丝氨酸的培养基；和b)使硫化物与o-磷酸丝氨酸巯基酶(opss)或表达opss的微生物和步骤a)中产生的o-磷酸丝氨酸或包含o-磷酸丝氨酸的培养基反应。
10、有益效果
11、与使用现有的未修饰或变体蛋白质相比，通过使用本公开内容的具有ops输出活性的新型变体多肽培养具有产生ops能力的微生物可以高产率地产生ops。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种MdtH变体，其中对应于SEQ ID NO：1的氨基酸序列中第125位的氨基酸被另一种氨基酸取代。
2.根据权利要求1所述的MdtH变体，其中所述另一种氨基酸是异亮氨酸。
3.根据权利要求2所述的MdtH变体，其中对应于第125位的氨基酸是缬氨酸。
4.根据权利要求1所述的MdtH变体，其中所述变体具有O-磷酸丝氨酸输出活性。
5.根据权利要求1所述的MdtH变体，其中对应于所述SEQ ID NO：1的氨基酸序列中第60位的氨基酸是谷氨酰胺或精氨酸。
6.根据权利要求1所述的MdtH变体，其中对应于所述SEQ ID NO：1的氨基酸序列中第180位的氨基酸是苯丙氨酸或亮氨酸。
7.根据权利要求1所述的MdtH变体，其中对应于所述SEQ ID NO：1的氨基酸序列中第398位的氨基酸是亮氨酸或脯氨酸。
8.根据权利要求1所述的MdtH变体，其中所述变体与所述SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有不小于80％且小于100％的序列同一性。
9.根据权利要求1所述的MdtH变体，其中所
10.一种编码权利要求1所述的变体的多核苷酸。
11.一种大肠杆菌属重组微生物，其包含MdtH变体或编码所述变体的多核苷酸，其中对应于SEQ ID NO：1的氨基酸序列中第125位的氨基酸被另一种氨基酸取代。
12.根据权利要求11所述的重组微生物，其中所述重组微生物进一步具有与其内源性活性相比弱化的磷酸丝氨酸磷酸酶(SerB)活性。
13.一种生产O-磷酸丝氨酸的方法，所述方法包括在培养基中培养包含MdtH变体或编码所述变体的多核苷酸的微生物，其中对应于SEQ ID NO：1的氨基酸序列中第125位的氨基酸被另一种氨基酸取代。
14.一种生产半胱氨酸或其衍生物的方法，所述方法包括：
15.MdtH变体用于生产OPS、半胱氨酸或半胱氨酸衍生物的用途，其中对应于SEQ IDNO：1的氨基酸序列的第125位的氨基酸被另一种氨基酸取代。
16.MdtH变体用于从微生物中排出OPS的用途，其中对应于SEQ ID NO：1的氨基酸序列的第125位的氨基酸被另一种氨基酸取代。
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种mdth变体，其中对应于seq id no：1的氨基酸序列中第125位的氨基酸被另一种氨基酸取代。
2.根据权利要求1所述的mdth变体，其中所述另一种氨基酸是异亮氨酸。
3.根据权利要求2所述的mdth变体，其中对应于第125位的氨基酸是缬氨酸。
4.根据权利要求1所述的mdth变体，其中所述变体具有o-磷酸丝氨酸输出活性。
5.根据权利要求1所述的mdth变体，其中对应于所述seq id no：1的氨基酸序列中第60位的氨基酸是谷氨酰胺或精氨酸。
6.根据权利要求1所述的mdth变体，其中对应于所述seq id no：1的氨基酸序列中第180位的氨基酸是苯丙氨酸或亮氨酸。
7.根据权利要求1所述的mdth变体，其中对应于所述seq id no：1的氨基酸序列中第398位的氨基酸是亮氨酸或脯氨酸。
8.根据权利要求1所述的mdth变体，其中所述变体与所述seq id no：1的氨基酸序列具有不小于80％且小于100％的序列同一性。
9.根据权利要求1所述的mdth变体，其中所述变体由seq id no...
【专利技术属性】
技术研发人员：沈熙陈，朴慧珉，崔珍根，李珍南，丁辉敏，
申请(专利权)人：CJ第一制糖株式会社，
类型：发明
国别省市：
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