【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物医药，尤其是一种特异性识别cldn18.2的核酸适体及其应用。
技术介绍
1、紧密连接蛋白18.2(cldn18.2)蛋白是紧密连接蛋白18的一个特异亚型，属于紧密连接蛋白家族。作为一种高度选择性的生物标志物，它在正常组织中的表达相对有限，但在胃癌[1]与胰腺癌[2]中常表现出异常高水平的表达。这种特异性使得cldn18.2成为早期诊断和治疗这些肿瘤的一个潜在目标。在疾病的进展中，cldn18.2不仅参与肿瘤细胞的增殖和分化，还涉及到肿瘤细胞的迁移和侵袭过程，影响肿瘤的扩散和患者的预后[3]。因此，对cldn18.2的研究不仅有助于我们深入理解肿瘤的生物学特性，也为开发针对这些恶性肿瘤的新型诊疗方法提供了可能性。
2、核酸适配体(aptamer)是指通过指数富集的配基系统进化技术(selex)筛选分离得到的dna或者rna分子，它可以与其他靶标如蛋白质、金属离子、小分子、多肽甚至整个细胞进行高亲和力和特异性的结合，因此在生化分析，环境监测，基础医学，新药合成等方面展示广阔的前景[4]。核酸适配体与抗体相比分子量小，稳定性更好，易改造修饰，无免疫原性，制作周期短，可以通过人工合成等优势，免去了动物免疫、饲养、蛋白提取和纯化等一系列流程[5]。因此如果能找到与cldn18.2蛋白具有更高的亲和力，并且具有高特异性的核酸适配体，将有助于实现cldn18.2蛋白的高灵敏度和高特异性检测，有助于靶向cldn18.2蛋白的药物开发。
3、因此，需要设计一种特异性识别cldn18.2的核酸适体及其应用
4、[1]sanada y,oue n,mitani y,et al.down-regulation of theclaudin-18gene,identified through serial analysis of geneexpression data analysis,ingastric cancer with an intestinalphenotype[j].j pathol,2006,208(5):633-42.
5、doi:10.1002/path.1922
6、[2]karanjawala z e,illei p b,ashfaq r,et al.new markers ofpancreaticcancer identified through differential gene expressionanalyses:claudin 18andannexin a8[j].am j surg pathol,2008,
7、32(2):188-96.doi:10.1097/pas.0b013e31815701f3
8、[3]kyuno d,takasawa a,takasawa k,et al.claudin-18.2as atherapeutictarget in cancers:cumulative findings from basicresearch and clinical trials[j].tissue barriers,2022,10(1):1967080.doi:10.1080/21688370.2021.1967080
9、
10、[4]zhao y,xu d,tan w.aptamer-functionalizednano/micro-materials forclinical diagnosis:isolation,release andbioanalysis of circulating tumorcells[j].integr biol(camb),2017,
11、9(3):188-205.doi:10.1039/c6ib00239k
12、[5]jin c,qiu l,li j,et al.cancer biomarker discovery using dna
13、aptamers[j].analyst,2016,141(2):461-6.
14、doi:10.1039/c5an01918d
技术实现思路
1、为了克服现有技术中的缺陷，提供一种特异性识别cldn18.2的核酸适体及其应用。
2、本专利技术通过下述方案实现：
3、一种特异性识别cldn18.2的核酸适体，所述核酸适体具有如cldn18.2-5、cldn18.2-13、cldn18.2-35、cldn18.2-3所示的序列或与其同源性70％以上的核苷酸序列。
4、所述核酸适体经过修饰，所述修饰为碱基或磷酸骨架的修饰。
5、所述碱基修饰为f取代、moe修饰、ome修饰。
6、所述磷酸骨架修饰为部分硫代或全硫代。
7、所述核酸适体经过末端偶连，所述偶连物包括荧光基团、药物、碱基类似物、糖修饰、肽、放射性物质、生物素以及量子点。
8、所述核酸适体是经过序列转换的核酸适体；
9、所述序列转换为将dna序列翻译为rna序列，和/或翻译成肽核酸序列。
10、一种特异性识别cldn18.2的核酸适体的制备方法，该方法包括以下步骤：
11、第一步、通过蛋白筛选的方式获得cldn18.2靶向的aptamer文库；
12、第二步、从第一步得到的aptamer文库中挑选出多条丰度最高的核酸适体；
13、第三步、从第二步得到的多条丰度最高的核酸适体中挑选出对cldn18.2亲和力较高的序列，即为特异性识别cldn18.2的核酸适体；
14、在第二步中，通过测序及序列进化分析挑选出多条丰度最高的核酸适体；
15、在第二步中，挑选出至少96条丰度最高的核酸适体；
16、在第三步中，从第二步得到的多条丰度最高的核酸适体中挑选进化较好的序列进行结合验证，得到亲和力较高的序列即为特异性识别cldn18.2的核酸适体；
17、在第三步中，得到至少3条亲和力较高的序列。
18、一种特异性识别cldn18.2的核酸适体的应用，所述特异性识别cldn18.2的核酸适体用于cldn18.2的靶向。
19、所述特异性识别cldn18.2的核酸适体用于cldn18.2的靶向降解、靶向治疗、靶向给药、检测分析。
20、所述特异性识别cldn18.2的核酸适体用于胃癌的靶向治疗。
21、本专利技术的有益效果为：
22、本专利技术通过蛋白筛选技术获得一种可以识别cldn18.2蛋白的核酸适体，可以用于cldn18.2阳性的鉴别及靶向。
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1.特异性识别CLDN18.2的核酸适体，其特征在于：所述核酸适体具有如CLDN18.2-5、CLDN18.2-13、CLDN18.2-35、CLDN18.2-3所示的序列或与其同源性70％以上的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的特异性识别CLDN18.2的核酸适体，其特征在于：所述核酸适体经过修饰，所述修饰为碱基或磷酸骨架的修饰。
3.根据权利要求2所述的特异性识别CLDN18.2的核酸适体，其特征在于：所述碱基修饰为F取代、MOE修饰、OME修饰。
4.根据权利要求2所述的特异性识别CLDN18.2的核酸适体，其特征在于：所述磷酸骨架修饰为部分硫代或全硫代。
5.根据权利要求1所述的特异性识别CLDN18.2的核酸适体，其特征在于：所述核酸适体经过末端偶连，所述偶连物包括荧光基团、药物、碱基类似物、糖修饰、肽、放射性物质、生物素以及量子点。
6.根据权利要求1所述的特异性识别CLDN18.2的核酸适体，其特征在于：所述核酸适体是经过序列转换的核酸适体；
7.制备如权利要求1-6任一权利项所述的特异性识
8.如权利要求1-6任一权利项所述的特异性识别CLDN18.2的核酸适体的应用，其特征在于：所述特异性识别CLDN18.2的核酸适体用于CLDN18.2的靶向。
9.根据权利要求8所述的特异性识别CLDN18.2的核酸适体的应用，其特征在于：所述特异性识别CLDN18.2的核酸适体用于CLDN18.2的靶向降解、靶向治疗、靶向给药、检测分析。
10.根据权利要求8所述的特异性识别CLDN18.2的核酸适体的应用，其特征在于：所述特异性识别CLDN18.2的核酸适体用于胃癌的靶向治疗。
...【技术特征摘要】
1.特异性识别cldn18.2的核酸适体，其特征在于：所述核酸适体具有如cldn18.2-5、cldn18.2-13、cldn18.2-35、cldn18.2-3所示的序列或与其同源性70％以上的核苷酸序列。
2.根据权利要求1所述的特异性识别cldn18.2的核酸适体，其特征在于：所述核酸适体经过修饰，所述修饰为碱基或磷酸骨架的修饰。
3.根据权利要求2所述的特异性识别cldn18.2的核酸适体，其特征在于：所述碱基修饰为f取代、moe修饰、ome修饰。
4.根据权利要求2所述的特异性识别cldn18.2的核酸适体，其特征在于：所述磷酸骨架修饰为部分硫代或全硫代。
5.根据权利要求1所述的特异性识别cldn18.2的核酸适体，其特征在于：所述核酸适体经过末端偶连，所述偶连物包括荧光基团、药物、碱基类似物、糖修饰、肽、放射性物质、生物素...
【专利技术属性】
技术研发人员：谭蔚泓，孙洋，曹晖，屠霖，潘涛，郑一菡，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属仁济医院，
类型：发明
国别省市：
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