【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及pdx模型构建领域，具体涉及一种肾癌pdx模型构建方法。
技术介绍
1、pdx模型主要应用在癌症的治疗上，即通过建立针对个人的动物模型，能反映不同肿瘤患者来源的样本差异，从而能够提供个性化用药指导，便于后续对患者进行用药。pdx模型的构建方式为将癌症患者的肿瘤组织移植到免疫缺陷小鼠中，获得p0代pdx模型，从p0代取出肿瘤组织再移植到新的免疫缺陷小鼠中，依次传代，则可获得p1代，p2代，p3代等等。
2、现有的肿瘤组织一般是被置入至基本都是在nog小鼠的皮下植入进行pdx模型构建的，但我们在实际操作过程中发现，肾透明细胞癌作为对血供要求极高的肿瘤，皮下种植并不能让肾透明细胞癌组织生存，导致肾透明细胞癌难以生存。如图5所示的对比例，对小鼠采用皮下肾透明细胞癌组织一个月后，肿瘤组织已被吸收，未成瘤。
3、是否能够在传代过程中保留肿瘤异质性是建立pdx模型的关键，而肾癌组织中存在混杂的成纤维细胞，在传代过程中成纤维细胞对癌细胞的繁殖造成影响，导致后续构建的模型在反映单纯肾癌的基因信息时其准确度下降，进而导致肾癌pdx模型更加难以构建。
4、故需要一套稳定构建肾癌pdx模型的方法，来解决上述问题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种肾癌pdx模型构建方法，以解决现有技术中肾癌pdx模型难以构建的技术问题。
2、为解决上述技术问题，本专利技术具体提供下述技术方案：
3、本专利技术提供了一种肾癌pdx模型构建
4、构建组织悬液：使用胶原酶混合溶液对肿瘤块进行处理，进行第一次孵育，得到胶原酶-肿瘤块混合液，以消化分离所述肿瘤块组织中混杂的成纤维细胞，个性化培养后得到组织混合物；
5、实验体处理：选取实验体腹正中线偏右侧0.5cm处，划开至覆膜深度，形成创口，进一步切开所述创口处的1-2根膜毛细血管，形成血管破损；
6、植入：将所述组织混合物注入至实验体的血管破损处，进行创口处理，构建得到所述肿瘤块的pdx模型。
7、作为本专利技术的一种优选方案，还包括如下步骤：
8、制备胶原酶混合溶液：
9、将胶原酶ⅰ、胶原酶ⅳ加入至dmem中，混合均匀，再加入1％的青链霉素；
10、其中，按质量份计，胶原酶ⅰ：胶原酶ⅳ(100mg/ml)：dmem＝1:1：100。
11、作为本专利技术的一种优选方案，所述胶原酶ⅰ与所述胶原酶ⅳ的作用浓度为1mg/ml。
12、作为本专利技术的一种优选方案，还包括对肿瘤块进行预处理，步骤如下：
13、将肿瘤样本转移到含1毫克/毫升gentamicin的预冷dbps的培养皿中；
14、在所述培养皿中将所述肿瘤样本切成1～2毫米的块，得到所述肿瘤块。
15、作为本专利技术的一种优选方案，所述第一次孵育满足以下条件：温度为37℃，时间为30分钟。
16、作为本专利技术的一种优选方案，所述个性化培养包括如下步骤：
17、用中和液对胶原酶-肿瘤块混合液进行中和，离心处理，得到组织沉淀；
18、使用accutase重悬所述组织沉淀，进行第二次孵育，得到accutase-肿瘤混合物；
19、用中性溶液对所述accutase-肿瘤混合物进行中和，过滤，得到所述组织混合物。
20、作为本专利技术的一种优选方案，第二次孵育满足以下条件：温度为37℃，时间为30分钟。
21、作为本专利技术的一种优选方案，所述离心处理满足以下条件：转速为1,000rpm，时间为5分钟。
22、本专利技术与现有技术相比较具有如下有益效果：
23、本专利技术在制备组织悬液过程中利用稀释的胶原酶进行处理，从而消化分离掉肿瘤组织中混杂的成纤维细胞，使后续构建的模型更能反映单纯肾癌的基因信息，减少无关细胞的产生，降低癌组织生长所需血供；
24、本专利技术采取在植入癌症的组织样本时采取腹腔植入，较皮下植入具有更加丰富的血供，使得移植成功率达到70％，腹腔种植弥补了肾癌细胞血供不足的要求，使得肾癌pdx模型构建更加稳定，成瘤率达到65％。
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【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：史健，缪道嘉，汪科杉，吕庆洋，谭刁弋，章小平，
申请(专利权)人：华中科技大学同济医学院附属协和医院，
类型：发明
国别省市：
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