【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物工程，尤其是涉及一种高产庆大霉素的多基因过表达链霉菌工程菌株及获得方法与应用。
技术介绍
1、棘孢小单孢菌是庆大霉素主要的生产菌，属于链霉菌属，其基因组dna中g+c百分含量高达71.4％-72.8％。棘孢小单孢菌菌落表面呈光滑或突出状，主要进行孢子生殖，其菌丝具有很细的分支结构。基丝一般为橘红色，少部分为褐色或紫褐色。
2、庆大霉素是具有热稳定性的广谱抗生素之一。庆大霉素是一种碱性物质，易溶于水，性质相对稳定，与硫酸结合可以形成硫酸庆大霉素供临床使用。庆大霉素的母体结构2-dos是通过一个糖苷键分别与加拉糖胺和绛红糖胺相连。由于绛红糖胺有不同的取代基和取代部位，其可以被分为四大族，a、b、x和c。
3、对于庆大霉素整个合成途径的完全剖析有助于对其进行分子层面的改造，进而提升庆大霉素的整体效价或者某一组分的效价。随着基因操作手段的发展，利用微生物代谢方面的研究来提升目标抗菌物质的产量成为研究重点。一方面，可以利用某些起决定作用的调节因子来调控抗生素的合成，这些因子所起到的作用主要集中在激活抗生素合成的基因簇或者改变链霉菌的形态上。另一方面，可以从整个合成中的前体着手，补加一定量的基本结构物质或者对某些关键基因进行过表达，来实现抗生素产量的提高。根据已公布的庆大霉素合成路径可知，genc负责前体d-葡萄糖-6-磷酸的转化。在庆大霉素合成过程中涉及到很多转氨基和转甲基反应。其中，大多数转甲基酶都属于sam依赖的甲基转移酶，特别是庆大霉素x2到g418这一分支途径的genk。在链霉菌中，编码该
技术实现思路
1、基于现有技术中缺少在基因调控层面提高庆大霉素效价的有效方法，本专利技术提供一种高产庆大霉素的多基因过表达链霉菌工程菌株及获得方法与应用。
2、本专利技术的目的可以通过以下技术方案来实现：
3、本专利技术第一方面，提供基因bldd、metk、genc中的两种或三种的组合在制备高产庆大霉素的多基因过表达链霉菌工程菌株中的应用；
4、其中，基因genc的序列如seq id no.1所示，基因metk的序列如seq id no.2所示，基因bldd的序列如seq id no.3所示。
5、具体地，基因genc的序列(如seq id no.1所示)为：
6、tcaaccatcggcagcacccaccgtgtccggcacccggccttcctccaccgtctcgaccggagccaccaactcgaagttcgggatctccggacgggcgatctcgttgacgacctcaccgaccagcgccatcggaacggagaccagcgggcgcccgtcgtgccacagcggctcgcccagtccaccgaggaggaccatcgcgctgctctcggccgggtcggcgaggtagccgcgcttgttgtcgaaccgcagccggtgcatcacctcgtcgaggtcgacctcctcggggatggtcaccatcgcgcccgcccgggtcaacagctcccggtgcagggcgaccgcctcctggtcgaggtgacccagccggtgggacacctcggcggccaccaccatgccgaggccgatcgcctggccgtgggagagcccgccggcggcggtgtactcgatggcgtgtccgaccgtgtggccgtactccagcacgagaccggcgcggcactcgtgcatgtcgtccacggtcaccgaggccttcgccaggatgctctcggagatgatctcgtacatcgtctcgtcgtcgtagacggcgtcctgccgcagcgacgtgcggagcatctcgaccatgctgggccggatggccagcgagttcttgacgacctcgcagaggccggagaccgtctcccggaacggcaggctccgcagcatggcggtgtcggccaggacggactccggcgcgtagaaggtccccatcaggttcttgcccacgcaggcgttgaccgcctgcttgagcgagaggaccgagtcggacatcgcgatgagcgacgtcgggatgtgcacgaggcggatcccgcggaagagcagggcggccatcaggccagcgatgttgccgatcacgccgccgccgacggcgaccaccaccgaggcgcggtccgcgccgagctggagcgccgagtcggccaacgtgccgacggcctgtagatccttgtacggctcaccggcgcggtggatgagcaggttcgccggaacccgtggggagagccgttcgaccagttccgcgccgaacagtggaccggtgttgctgtcacagacgatcaggagccgactggccgacatggcgaccaggtcttccacgatggcaccgaggcagtcggtgccgagccggaacggataccgaaccgagcccaggcgtatctcgacctccat。
7、基因metk的序列(如seq id no.2所示)为：
8、tcaggctcctgcggccgacttgaggtcggcggcgcggtcggtgttctcccaggtcagttcgggtaggtcccggccgaagtggccgtacgcggcggtctgccggtagatcggccggagcaggtccaggtcccggatgatcgccgcgggacgcaggtcgaacacctcgttcacggccttctcgatccgctcgaccggcacgttctccgtgccgaacgtctcgatgaacaaactcaccggatg cgccttaccgatcgcgtaggcgacctgcgtctcacagcgctccgccaacccggcggcgaccacgttcttcgccacccaccgcatcgcataagccgccgaccggtcgaccttcgaggggtccttaccggagaacgccccaccaccgtgccgggcgtacccaccgtaggtgtccacgatgatcttccgaccggtcaggccggcgtcacccatcggcccaccgatctcgaaccgacccgtcgggttcaccaacaaccggtacccgtcagtgtccaaccccaggccctcgacctcgggggcgatcacatggtcccgcacgtccggcgtcaacaacgactccagactgatgtccgccgcatgctgcgaggagacgaccaccgtgttcagacggaccggcc本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.基因BldD、metK、genC中的两种或三种的组合在制备高产庆大霉素的多基因过表达链霉菌工程菌株中的应用，其特征在于，基因genC的序列如SEQ ID NO.1所示，基因metK的序列如SEQ ID NO.2所示，基因BldD的序列如SEQ ID NO.3所示。
2.一种高产庆大霉素的多基因过表达链霉菌工程菌株，其特征在于，所述多基因过表达链霉菌工程菌株中含有基因BldD、metK、genC中的两种或三种，表达基因BldD、metK、genC中的两种或三种对应的酶，基因genC的序列如SEQ ID NO.1所示，基因metK的序列如SEQ IDNO.2所示，基因BldD的序列如SEQ ID NO.3所示。
3.根据权利要求2所述的一种高产庆大霉素的多基因过表达链霉菌工程菌株，其特征在于，所述多基因过表达链霉菌工程菌株中同时含有基因BldD、metK、genC。
4.权利要求2所述的高产庆大霉素的多基因过表达链霉菌工程菌株的获得方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的高产庆大霉素的多基因过表达链霉菌工程菌株的获
6.根据权利要求4所述的高产庆大霉素的多基因过表达链霉菌工程菌株的获得方法，其特征在于，当所述高产庆大霉素的多基因过表达链霉菌工程菌株为同时过表达基因BldD、metK、genC时，基因metK的引物为：
7.根据权利要求4所述的高产庆大霉素的多基因过表达链霉菌工程菌株的获得方法，其特征在于，当所述高产庆大霉素的多基因过表达链霉菌工程菌株为同时过表达基因BldD、metK、genC时，基因genC的引物为：
8.权利要求2所述的高产庆大霉素的多基因过表达链霉菌工程菌株的应用，其特征在于，所述高产庆大霉素的多基因过表达链霉菌工程菌株用于发酵生产庆大霉素。
9.根据权利要求8所述的高产庆大霉素的多基因过表达链霉菌工程菌株的应用，其特征在于，发酵时，以10％接种量，将种子液转移至发酵液中培养，调整发酵液的PH至8.0-8.1。
10.根据权利要求9所述的高产庆大霉素的多基因过表达链霉菌工程菌株的应用，其特征在于，培养时，温度35-36℃、湿度40％-60％。
...【技术特征摘要】
1.基因bldd、metk、genc中的两种或三种的组合在制备高产庆大霉素的多基因过表达链霉菌工程菌株中的应用，其特征在于，基因genc的序列如seq id no.1所示，基因metk的序列如seq id no.2所示，基因bldd的序列如seq id no.3所示。
2.一种高产庆大霉素的多基因过表达链霉菌工程菌株，其特征在于，所述多基因过表达链霉菌工程菌株中含有基因bldd、metk、genc中的两种或三种，表达基因bldd、metk、genc中的两种或三种对应的酶，基因genc的序列如seq id no.1所示，基因metk的序列如seq idno.2所示，基因bldd的序列如seq id no.3所示。
3.根据权利要求2所述的一种高产庆大霉素的多基因过表达链霉菌工程菌株，其特征在于，所述多基因过表达链霉菌工程菌株中同时含有基因bldd、metk、genc。
4.权利要求2所述的高产庆大霉素的多基因过表达链霉菌工程菌株的获得方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的高产庆大霉素的多基因过表达链霉菌工程菌株的获得方法，其特征在于，当所述高产庆大...
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