【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于通过抗原抗体反应检测样本液体中的对象细菌的免疫层析装置、制造该免疫层析装置的方法、以及使用了该免疫层析装置的对象细菌的检测方法。
技术介绍
1、以往，作为对各种样本中有无各种细菌进行检测的方法，已知有对样本进行培养并确认细菌的增殖的培养法、对样本中的细菌的细胞内atp(腺苷三磷酸)进行检测的atp法。但是，在前者的培养法中具有培养需要长时间、并且耗费精力的问题。另外，在后者的atp法中，由于atp不仅存在于细菌细胞中、而且也存在于真核细胞(动物细胞、植物细胞)等中，因而具有难以将来自生物体、饮食品、环境的真核细胞与细菌区分出的问题。
2、因此，为了迅速且高灵敏度地对样本中的细菌污染进行检查，已经普及了使用色谱法的简易测定装置(层析装置)，其能够利用基于对被检测物质特异性的特异结合物质的特异性反应，迅速、简便地对样本中的特定的被检测物质进行检测。作为该特异结合物质，使用了各种物质，其中使用了抗体作为特异结合物质的免疫层析装置能够对各种被检测物质进行检测，被用于研究领域、医疗领域、食品领域等各种领域中。
3、作为免疫层析装置的代表性方式，多数利用侧流式。侧流式的免疫层析装置主要可大致分为浸染棒型和层析卡板型。在食品或畜产现场，要求能够简易操作、并且成本低，从而使用不需要外壳、仅通过将试纸条插入到样本液体中即能够进行检查的浸染棒型的免疫层析装置(专利文献1：日本专利第6325895号)。另外，以提高细菌检测灵敏度为目的，已知有使用溶菌剂或酶进行溶菌来提取被检测物质的技术(专利文献2：日本专利第
4、另外，作为该免疫层析装置的测定对象，可以举出家畜等的乳汁样本，家畜的乳汁并非是无菌的，可能由于疾病、环境的原因而混入有某些微生物。特别是已知在因微生物对乳房的感染所致的疾病中，大量的微生物往往会排菌到乳汁中。以微生物的感染为原因而引起的代表性的家畜疾病中包括乳房炎。乳房炎是乳管系、乳腺组织的炎症，主要是由于微生物侵入、固定在乳房内并进行增殖而引起的。许多动物会患有乳房炎，特别是在乳牛中，据称乳牛整体的15～40％罹患牛乳房炎，对于奶农来说，是一种非常重要的疾病。乳牛若罹患乳房炎，则会妨碍乳汁的合成功能，不仅会导致泌乳量的减少或根据情况会导致泌乳的停止，而且还会使奶农承受重大的经济损失，如治疗费、因乳质降低所致的乳价罚金等。此外，为了防止传染而对罹患乳房炎的乳区单独进行挤奶等，奶农所耗费的劳动负担也增加。
5、乳房炎是由于各种微生物的感染而引起的。致病菌中，以大肠杆菌、克雷伯氏菌为代表的大肠菌群会引起发热等全身症状、乳房的热感、肿胀和硬结等局部症状。作为乳汁中的大肠菌群的检测方法，广泛使用了培养法。培养法中，得到结果需要数天时间，不适于快速鉴定致病菌。另一方面，基于使用针对致病菌特异性成分的抗体的抗原抗体反应的鉴定法、特别是免疫层析法能够利用数十分钟对结果进行判定，因此作为迅速、简便的检查方法，在家庭、诊察室等中广泛使用。
6、作为使用免疫层析法对乳汁样本进行检测的方法，可以举出上述记载的各种方法，但作为乳汁样本特有的课题，由于乳汁中大量含有的脂肪球会妨碍层析膜展开，因此需要去除脂肪球(专利文献6：日本专利第5693938号)。
7、现有技术文献
8、专利文献
9、专利文献1：日本专利第6325895号公报
10、专利文献2：日本专利第6280567号公报
11、专利文献3：日本专利第6314156号公报
12、专利文献4：日本专利第6370807号公报
13、专利文献5：日本专利第6081457号公报
14、专利文献6：日本专利第5693938号公报
技术实现思路
1、专利技术所要解决的课题
2、现有的免疫层析装置中，要求提高被检测物质的检测灵敏度和/或检测效率。即，本专利技术的目的之一在于，在免疫层析装置中，提高被检测物质的检测灵敏度和/或检测效率。
3、另外，根据本专利技术等的研究，现有的免疫层析装置是通过将包含对被检测物质特异性的特异结合物质的捕捉试剂固定于层析展开用膜载体的检测区域而制造的，但已判明，这样制造的层析装置在制造后的保存期间，灵敏度会经时地上升。即，本专利技术的目的之一在于，从免疫层析装置在制造时的品质管理的方面出发，减小保存期间的灵敏度的经时变化。
4、另外，将现有的免疫层析装置用于乳汁样本的情况下，要求改善因脂肪球去除部件(以下为方便起见也称为“过滤器部件”)所引起的展开不良。即，本专利技术的目的之一在于，在将免疫层析装置用于乳汁样本的情况下，改善因脂肪球去除部件所引起的展开不良。
5、用于解决课题的手段
6、本申请人等进行了深入研究，结果发现，在使用免疫层析装置时，通过使标记用抗体扩散到样本液体中而在样本液体中产生抗原抗体反应，由此，能够确保反应时间比现有技术长，其结果可提高检测灵敏度和/或检测效率。另外发现，将特异结合物质固定于层析展开用膜载体的检测区域时，通过在比通常使用的干燥温度高的温度下进行更长时间的干燥处理，所得到的免疫层析装置在保存期间的灵敏度的经时变化减小。进而发现，在以乳汁样本作为对象的配置有脂肪球去除部件的免疫层析装置中，作为层析展开的对象的液量(以下为方便起见也称为“合计吸水液量y”)与多个脂肪球去除部件的重叠对于使用时的层析膜展开特性具有较大的影响，进而通过优化这些参数，能够改善因脂肪球去除部件所引起的展开不良。本申请人等基于这些技术思想进一步进行了深入研究，结果完成了本专利技术。
7、即，本专利技术涉及下述方案：
8、[项1]一种细菌的检测方法，其是使用免疫层析装置通过抗原抗体反应对样本液体中的对象细菌进行检测的方法，其包括：
9、1)将附着有标记用抗体的标记用抗体附着部件的至少一部分浸渍在上述样本液体中，在样本液体中进行上述对象细菌来源的抗原与上述标记用抗体的抗原抗体反应的至少一部分而形成第1复合体的工序；
10、2)使固定于上述免疫层析装置的捕捉用抗体与上述第1复合体发生抗原抗体反应而形成第2复合体，基于上述标记用抗体的标记对细菌进行检测的工序。
11、[项2]如项1所述的方法，其中，将上述标记用抗体附着部件的至少一部分与附着有溶菌剂的溶菌剂附着部件的至少一部分浸渍在上述样本液体中。
12、[项3]如项2所述的方法，其中，将上述标记用抗体附着部件的至少一部分与附着有溶菌剂的溶菌剂附着部件的至少一部分同时浸渍在上述样本液体中。
13、[项4]如项1～3中任一项本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种细菌的检测方法，其是使用免疫层析装置通过抗原抗体反应对样本液体中的对象细菌进行检测的方法，其包括：
2.如权利要求1所述的方法，其中，将所述标记用抗体附着部件的至少一部分与附着有溶菌剂的溶菌剂附着部件的至少一部分浸渍在所述样本液体中。
3.如权利要求2所述的方法，其中，将所述标记用抗体附着部件的至少一部分与附着有溶菌剂的溶菌剂附着部件的至少一部分同时浸渍在所述样本液体中。
4.如权利要求1～3中任一项所述的方法，其进一步包括在所述浸渍后、所述检测前对所述样本液体进行搅拌的步骤。
5.如权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，所述对象细菌的抗原为细胞内抗原。
6.如权利要求5所述的方法，其中，所述细胞内抗原为核糖体蛋白。
7.如权利要求6所述的方法，其中，所述核糖体蛋白为L7/L12蛋白。
8.如权利要求1～7任一项所述的方法，其中，在所述浸渍后，使附着于所述标记用抗体附着部件的标记用抗体以及附着于所述溶菌剂附着部件的溶菌剂的至少一部分溶出到样本液体中。
9.一种免疫层析装置，其
10.如权利要求9所述的免疫层析装置，其中，进行配置以使所述标记用抗体附着部件的至少一部分包含在所述浸渍区域中。
11.如权利要求9或10所述的免疫层析装置，其中，
12.如权利要求11所述的免疫层析装置，其中，所述溶菌剂附着部件以及所述标记用抗体附着部件以各自分开的部件的形式形成。
13.如权利要求11所述的免疫层析装置，其中，所述溶菌剂附着部件以及所述标记用抗体附着部件以单一的部件的形式形成。
14.如权利要求11～13任一项所述的免疫层析装置，其中，进行配置以使所述溶菌剂附着部件的至少一部分包含在所述浸渍区域中。
15.如权利要求11～14任一项所述的免疫层析装置，其中，所述溶菌剂附着部件以及所述标记用抗体附着部件中的一者或两者以与所述层析展开用部件分开的部件的形式提供。
16.如权利要求11～15任一项所述的免疫层析装置，其中，所述免疫层析装置进一步包括(d)试样接触用部件，
...【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.一种细菌的检测方法，其是使用免疫层析装置通过抗原抗体反应对样本液体中的对象细菌进行检测的方法，其包括：
2.如权利要求1所述的方法，其中，将所述标记用抗体附着部件的至少一部分与附着有溶菌剂的溶菌剂附着部件的至少一部分浸渍在所述样本液体中。
3.如权利要求2所述的方法，其中，将所述标记用抗体附着部件的至少一部分与附着有溶菌剂的溶菌剂附着部件的至少一部分同时浸渍在所述样本液体中。
4.如权利要求1～3中任一项所述的方法，其进一步包括在所述浸渍后、所述检测前对所述样本液体进行搅拌的步骤。
5.如权利要求1～4中任一项所述的方法，其中，所述对象细菌的抗原为细胞内抗原。
6.如权利要求5所述的方法，其中，所述细胞内抗原为核糖体蛋白。
7.如权利要求6所述的方法，其中，所述核糖体蛋白为l7/l12蛋白。
8.如权利要求1～7任一项所述的方法，其中，在所述浸渍后，使附着于所述标记用抗体附着部件的标记用抗体以及附着于所述溶菌剂附着部件的溶菌剂的至少一部分溶出到样本液体中。
9.一种免疫...
【专利技术属性】
技术研发人员：高桥克佳，前花浩志，小田光太郎，安藤优，菅田三加，
申请(专利权)人：旭化成株式会社，
类型：发明
国别省市：
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