【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物，涉及一种基于h9亚型禽流感病毒ha1蛋白t细胞表位多肽及其应用。
技术介绍
1、1992年，我国首次从家禽中分离出了h9亚型禽流感病毒(avian influenzavirus,aiv)，随后该病毒在国内传播。在1992年至1998年期间，由于未能及时采取扑杀受感染禽类的措施，错过了净化h9n2亚型aiv的最佳时机。h9n2亚型病毒目前已在家禽中广泛分布，并演化出不同的分支，严重影响我国家禽养殖业的健康发展，造成巨大的经济损失。鉴于该病毒已在我国家禽中稳定传播并在绝大部分地区流行，目前主要依靠广泛接种疫苗来进行防控。
2、禽流感病毒的ha蛋白在免疫应答中扮演关键角色，是诱导机体产生免疫应答的主要靶蛋白。t细胞在流感病毒免疫中的重要性体现在cd4和cd8 t细胞的多功能性。特定cd4t细胞与b细胞的特异性相互作用促进了免疫反应。cd4 t细胞通过增强初级反应、扩增记忆cd8 t细胞，并在感染部位促进cd8 t细胞的定位，展现了其多面的功能。此外，cd4 t细胞还具有直接的细胞毒性和调节修复功能，减轻病毒感染引起的严重炎症反应。在研制广谱流感疫苗方面，诱导流感病毒特异性cd8 t细胞反应被认为至关重要，尤其针对病毒内部保守蛋白的抗原表位。尽管已发现多个cd8 t细胞抗原表位，但对ha蛋白的t细胞表位研究相对有限。目前主要集中在人源h1n1、h2n2和h3n2亚型流感病毒，研究人员基于h1n1单价分裂疫苗筛选到了ha437–445tynaellvl是t细胞表位，并通过免疫保护试验发现其可提供针对异源毒株
技术实现思路
1、本专利技术的目的是解决基于h9亚型aiv ha1蛋白t细胞表位鉴定较少的问题。针对这一挑战，我们通过免疫学试验成功鉴定出了新的h9亚型ha1的t细胞表位，填补了现有表位信息的不足。随后，我们致力于开发基于这一新表位的亚单位疫苗fpe，旨在提高亚单位疫苗的适用性，并加强对h9亚型禽流感病毒的防控效果。通过这一创新性的技术手段，我们致力于为应对h9亚型禽流感病毒带来的挑战提供更全面、有效的解决方案。
2、本专利技术以h9n2亚型aiv毒株血凝素(ha)蛋白氨基酸序列为模版，结合肽序列扫描法、淋巴细胞增殖和elispot技术，筛选h9n2亚型ha1蛋白的广谱t细胞表位；利用大肠杆菌表达系统，对源自h9亚型ha1的b、t细胞表位与分子佐剂dc诱导肽和鸡il-2进行串联表达，以获得融合表位的亚单位疫苗fpe，并利用spf鸡模型对fpe的免疫保护效果进行评价。
3、本专利技术提供基于h9亚型禽流感病毒ha1蛋白t细胞表位多肽，所述基于h9亚型禽流感病毒ha1蛋白t细胞表位多肽的氨基酸序列如seq id no.23和seq id no.53所示。
4、本专利技术还提供一种融合蛋白，所述融合蛋白由上述的基于h9亚型禽流感病毒ha1蛋白t细胞表位多肽与载体蛋白融合所形成的。
5、本专利技术还提供一种核酸分子，所述核酸分子编码上述的基于h9亚型禽流感病毒ha1蛋白t细胞表位多肽。所述核酸分子的序列如seq id no.56和seq id no.57所示。
6、seq id no.56：
7、aactactactggagcgtattaaagccgggtcagacactgcgtatcaagtcagatggtaac；
8、seq id no.57：
9、gactactactggagcgtattaaagccgggtcagacactgcgtatcaagtcagatggtaac
10、进一步的，所述核酸分子并不限于上述的序列，只需满足翻译出上述的h9亚型禽流感病毒ha1蛋白广谱性b细胞表位肽即可。
11、本专利技术还提供一种重组表达载体，所述重组表达载体含有上述的核酸分子。
12、本专利技术还提供一种重组细胞，所述重组细胞含有上述的重组表达载体。
13、本专利技术还提供上述的基于h9亚型禽流感病毒ha1蛋白t细胞表位多肽或融合蛋白在制备检测h9亚型禽流感病毒感染或h9亚型禽流感病毒抗体检测试剂或试剂盒中的应用。
14、本专利技术还提供上述的基于h9亚型禽流感病毒ha1蛋白t细胞表位多肽或融合蛋白在制备防治h9亚型禽流感病毒感染的药物中的应用。
15、本专利技术还提供上述的基于h9亚型禽流感病毒ha1蛋白t细胞表位多肽或融合蛋白在制备h9亚型禽流感病毒疫苗中的应用。
16、进一步的，将上述的基于h9亚型禽流感病毒ha1蛋白t细胞表位多肽与分子佐剂dc诱导肽和鸡il-2进行串联表达，得到h9亚型禽流感病毒疫苗fpe。
17、fpe蛋白的核酸序列：
18、ttttacccaagttatcactcaacaccccaaagacctggtggaggcggcagcggcggcggtggaagcggtggtggcggtagcatgatgtgtaaagttctgatcttcggctgcattagcgtggcgaccttgatgaccactgcctatggtgcgagtctgagcagcgctaagcgcaaaccgttgcaaaccttaatcaaggacttggagattctggagaacatcaagaacaagattcatctggaactttataccccgactgaaacccaagagtgcacccaacagaccctgcaatgttacctgggtgaggtcgtgacgttgaagaaagaaaccgaagatgatactgagatcaaggaggaattcgtgaccgcgattcagaatattgaaaaaaacctaaagtctttgacgggcctgaatcacacgggttccgaatgtaagatctgcgaagcgaacaacaaaaagaaattcccggattttctgcacgaactgaccaattttgttcgttatctgcagaaaggtggcggtggctccggtggcggtggctctggtggcggcgggtcggaaaataacgtgccggttacgcatgccaaagagctcctccacaccgagcacaacggtatggggccgggtccgcgtatcttcaaaccgctgatcggtccgcgtccgttggttaatggtctgatgggtcgcatcggcggcagcggtgagagccatggtcgcatcctgaagaccgacctgaagcgcggttcttgcaccgttggtggctacgcatttggtaactgcagcaaatacatcggcattaagtccttgaagctggctg本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.基于H9亚型禽流感病毒HA1蛋白T细胞表位多肽，其特征在于，所述基于H9亚型禽流感病毒HA1蛋白T细胞表位多肽的氨基酸序列如SEQ IDNo.23和SEQ ID NO.53所示。
2.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白由权利要求1中所述的基于H9亚型禽流感病毒HA1蛋白T细胞表位多肽与载体蛋白融合所形成的。
3.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1所述的基于H9亚型禽流感病毒HA1蛋白T细胞表位多肽，所述核酸分子的序列如SEQ ID NO.56和SEQ ID NO.57所示。
4.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体含有权利要求3所述的核酸分子。
5.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞含有权利要求4所述的重组表达载体。
6.根据权利要求1所述的基于H9亚型禽流感病毒HA1蛋白T细胞表位多肽或权利要求2所述的融合蛋白在制备检测H9亚型禽流感病毒感染或H9亚型禽流感病毒抗体检测试剂或试剂盒中的应用。
7.根据权利要求1所述的基于H9亚型禽流感病毒HA1蛋白T细胞表位多肽或权利
8.根据权利要求1所述的基于H9亚型禽流感病毒HA1蛋白T细胞表位多肽或权利要求2所述的融合蛋白在制备H9亚型禽流感病毒疫苗中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，将权利要求1所述的基于H9亚型禽流感病毒HA1蛋白T细胞表位多肽与分子佐剂DC诱导肽和鸡IL-2进行串联表达，得到H9亚型禽流感病毒疫苗fPE。
10.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，权利要求1所述的基于H9亚型禽流感病毒HA1蛋白T细胞表位多肽或权利要求2所述的融合蛋白用于提高IL-2、IL-4、IL-5和INF-γ的表达水平。
...【技术特征摘要】
1.基于h9亚型禽流感病毒ha1蛋白t细胞表位多肽，其特征在于，所述基于h9亚型禽流感病毒ha1蛋白t细胞表位多肽的氨基酸序列如seq idno.23和seq id no.53所示。
2.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白由权利要求1中所述的基于h9亚型禽流感病毒ha1蛋白t细胞表位多肽与载体蛋白融合所形成的。
3.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子编码权利要求1所述的基于h9亚型禽流感病毒ha1蛋白t细胞表位多肽，所述核酸分子的序列如seq id no.56和seq id no.57所示。
4.一种重组表达载体，其特征在于，所述重组表达载体含有权利要求3所述的核酸分子。
5.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞含有权利要求4所述的重组表达载体。
6.根据权利要求1所述的基于h9亚型禽流感病毒ha1蛋白t细胞表位多肽或权利要求2...
【专利技术属性】
技术研发人员：陈素娟，全柯吉，彭大新，秦涛，印云聪，
申请(专利权)人：扬州大学，
类型：发明
国别省市：
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