【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药，涉及一种靶向发热伴血小板减少综合征病毒gn蛋白的高中和单克隆抗体b1g11及其应用。
技术介绍
1、发热伴血小板减少综合征病毒(sftsv)是属于布尼亚病毒目，白纤病毒科，班大病毒属。该病毒既可以感染野生动物和家畜，也能感染人类并引起急性发热、血小板减少、白细胞减少、呕吐以及腹泻，少数重症患者可因多器官衰竭而死亡，致死率可高达10％-30％。而目前防治sftsv感染的手段，主要是针对症状进行支持治疗，临床上仍缺乏安全有效的疫苗和抗病毒药物。
2、抗体介导的免疫反应是机体对抗病毒感染的重要手段之一，也是疫苗发挥预防保护作用的决定因素之一。另外高效的中和保护抗体可以用于应急治疗突发病毒的感染和控制疫情的扩散，也可以帮助易感、高危人群预防病毒的感染。同时抗体的研发也有助于血清学诊断试剂盒的快速开发，帮助感染性疾病的快速诊断。针对各种病毒的研究发现，分离纯化的单克隆抗体可以有效地抑制病毒的复制，而被动转移多克隆血清和单克隆抗体给实验动物又可以有效地预防和保护动物免受对应病毒的感染。市场上已有用于治疗病毒感染的抗体药物(如针对呼吸道合胞病毒感染的palivizumab和针对艾滋病毒的ibalizumab等)，同时还有多支针对不同病毒感染的抗体药物处于在研和临床试验阶段。
3、sftsv的m片段编码gn和gc两个囊膜蛋白，gn和gc构成的异聚体覆盖在整个病毒粒子表面，是病毒吸附与进入宿主细胞的关键蛋白。针对白蛉病毒属中裂谷热病毒(riftvalley fever virus，rvfv)和sftsv
4、因此，亟需开发一种针对sftsv的高中和的单克隆抗体。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种靶向gn的高效中和发热伴血小板减少综合征病毒的单克隆抗体及其应用。本专利技术首先用sftsv gn胞外域蛋白免疫balb/c小鼠，取小鼠脾脏和淋巴结后，研磨制成单细胞悬液，以表达的gn蛋白为诱饵蛋白，经流式分选，筛选出特异结合sftsv gn的单b细胞。然后对筛选到的单b细胞进行反转录pcr和巢式pcr，获得抗体的重链可变区和轻链可变区核苷酸片段，克隆至含有恒定区的抗体表达载体上。经expi293细胞表达、纯化，通过elisa、wb和间接免疫荧光实验验证与抗原的结合能力以及对病毒的中和能力等，获得了对sftsv病毒有高中和活性的单克隆抗体b1g11。
2、为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案。
3、在一个方面，本专利技术提供了单克隆抗体b1g11或其抗原结合片段，其靶向sftsv gn蛋白，其重链可变区包括三个互补决定区：氨基酸序列如seq id no：1所示的cdr1(gftfsdyy)，氨基酸序列如seq id no：2所示的cdr2(irnkakgytt)，氨基酸序列如seq idno：3所示的cdr3(ardyryddeyyyamdy)；其轻链可变区包括三个互补决定区：氨基酸序列如seq id no：6所示的cdr1(qgisny)，氨基酸序列如seq id no：7所示的cdr2(yts)，氨基酸序列如seq id no：8所示的cdr3(qqyskfprt)。
4、在一个实施方案中，所述单克隆抗体b1g11或其抗原结合片段的重链可变区的氨基酸序列如seq id no：4所示；所述单克隆抗体b1g11或其抗原结合片段的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no：9所示。
5、在一个实施方案中，所述单克隆抗体b1g11或其抗原结合片段的重链的氨基酸序列如seq id no：5所示；所述单克隆抗体b1g11或其抗原结合片段的轻链的氨基酸序列如seq id no：10所示。
6、在一个实施方案中，所述单克隆抗体还包括：所述的单克隆抗体的氨基酸序列经取代、缺失和/或增加一个或多个氨基酸得到的具有相同功能的抗体；或者对鼠源的抗体可变区进行人源化改造后得到的具有相同或相近功能的抗体。
7、在一个实施方案中，所述抗原结合片段选自fab、fab’、fab’-sh、scfv、f(ab’)2。
8、在另一个方面，本专利技术提供了一种多肽，其含有选自seq id no：4、seq id no：5、seq id no：9或seq id no：10所示的氨基酸序列。
9、在另一个方面，本专利技术提供了一种多核苷酸，其编码前述任一单克隆抗体或抗原结合片段或多肽，包括能够编码b1g11抗体重链可变区(如seq id no：12)和/或轻链可变区(如seq id no：14)的序列，以及能够编码b1g11抗体重链(如seq id no：13)和/或轻链(如seq id no：15)的序列。
10、在另一个方面，本专利技术提供了一种表达载体，其包含上述多核苷酸，能够在原核或者真核宿主细胞中表达上述多核苷酸。
11、所述表达载体具体可以为但不局限于原核表达载体、噬菌体载体、病毒载体或哺乳动物表达载体，本专利技术具体采用哺乳动物表达载体。
12、在另一个方面，本专利技术提供了一种宿主细胞，其含有上述表达载体，所述宿主细胞包括原核或者真核表达细胞，其能够表达上述表达载体。
13、在另一个方面，本专利技术提供了所述单克隆抗体b1g11或其抗原结合片段在制备治疗或预防抗发热伴血小板减少综合征病毒感染的药物或检测发热伴血小板减少综合征病毒或其gn蛋白的产品中的应用。
14、一种治疗或预防抗发热伴血小板减少综合征病毒感染的药物或药物组合，其包含所述单克隆抗体b1g11或其抗原结合片段。
15、一种检测抗发热伴血小板减少综合征病毒或其gn蛋白的试剂或试剂盒，其包含所述单克隆抗体b1g11或其抗原结合片段。
16、本专利技术提供的单克隆抗体b1g11，靶向sftsv的gn这一关键表面抗原，显示出优秀的中和效果，在细胞水平的假病毒感染的半数抑制浓度(ic50)为0.04μg/ml，针对真毒ic50可低至0.4μg/ml。同时，b1g11对sftsv两种不同毒株的假毒和真毒均有中和效果，说明其对不同毒株的sftsv有广谱中和活性。本专利技术的结果显示，所述单克隆抗体b1g11在制备抗发热伴血小板减少综合征治疗药物或检测产品中有广泛应用的前景。
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1.一种靶向发热伴血小板减少综合征病毒Gn糖蛋白的中和单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区；所述的重链可变区包括三个互补决定区，其氨基酸序列分别为GFTFSDYY、IRNKAKGYTT、ARDYRYDDEYYYAMDY；所述的轻链可变区包括三个互补决定区，其氨基酸序列分别为QGISNY、YTS、QQYSKFPRT。
2.如权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述的重链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示，所述的轻链可变区的氨基酸序列如SEQ ID NO：9所示。
3.如权利要求1或2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述的单克隆抗体或其抗原结合片段含有氨基酸序列如SEQ ID NO：5所示的重链，和氨基酸序列如SEQID NO：10所示的轻链。
4.如权利要求1-3中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述单克隆抗体或其抗原结合片段还包括下述中的任一种：
5.一种多肽，其特征在于：含有选自SEQ ID NO：4、SE
6.一种多核苷酸，其特征在于：编码权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段或权利要求5所述的多肽。
7.一种表达载体，其特征在于：包含权利要求6所述的多核苷酸。
8.一种宿主细胞，其特征在于：所述宿主细胞含有权利7所述的表达载体。
9.权利要求1-4任一项所述的单克隆抗体及其抗原结合片段在制备产品中的应用，其特征在于：所述的产品包含下述产品中的至少一种：治疗或者预防发热伴血小板减少综合征病毒感染的药物或药物组合，检测发热伴血小板减少综合征病毒或其Gn蛋白的试剂或试剂盒。
10.一种产品，其特征在于：包含1-4任一项所述的单克隆抗体及其抗原结合片段；
...【技术特征摘要】
1.一种靶向发热伴血小板减少综合征病毒gn糖蛋白的中和单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述单克隆抗体或其抗原结合片段包括重链可变区和轻链可变区；所述的重链可变区包括三个互补决定区，其氨基酸序列分别为gftfsdyy、irnkakgytt、ardyryddeyyyamdy；所述的轻链可变区包括三个互补决定区，其氨基酸序列分别为qgisny、yts、qqyskfprt。
2.如权利要求1所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述的重链可变区的氨基酸序列如seq id no：4所示，所述的轻链可变区的氨基酸序列如seq id no：9所示。
3.如权利要求1或2所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，其特征在于：所述的单克隆抗体或其抗原结合片段含有氨基酸序列如seq id no：5所示的重链，和氨基酸序列如seqid no：10所示的轻链。
4.如权利要求1-3中任一项所述的单克隆抗体或其抗原结合片段，...
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