【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药，具体涉及抑制7-脱氢胆固醇合成在治疗肿瘤中的应用，尤其涉及一种大b细胞淋巴瘤等肿瘤的治疗靶点及其应用。
技术介绍
1、恶性肿瘤是当今世界危害人类生命健康的重大疾病。2022年世界卫生统计报告表明，恶性肿瘤已成为威胁人类生命的全球非传染性疾病中的最大杀手。肿瘤微环境是指由肿瘤细胞及周围浸润的炎性细胞、血管、营养以及多种生长因子等组成的特殊环境。肿瘤微环境的复杂性导致了肿瘤的高度异质性，也导致临床上现有的常规肿瘤疗法对某些恶性肿瘤并未起到良好的治疗效果。靶向肿瘤微环境已然是癌症治疗的重要手段，也是现代肿瘤生物学研究的前沿领域和重要方向。肿瘤微环境中的代谢紊乱是恶性肿瘤的主要特征之一，它为肿瘤细胞的存活、增殖、转移提供足够的能量和生物量，其主要包括糖代谢，脂代谢和氨基酸代谢等，靶向肿瘤代谢微环境也成为一种极具前景的治疗手段。目前，靶向肿瘤代谢微环境的治疗策略主要通过抑制肿瘤所依赖的代谢途径来限制肿瘤细胞生长必需的营养因子，或选择性的减少饮食中相关的营养素摄入两方面来进行。
2、恶性肿瘤另一大特征是表现出对细胞死亡的强大抗性。细胞程序性死亡是受基因调控的的细胞死亡方式，与生命体的稳态维持和疾病发生密切相关，其主要包括凋亡、程序性坏死和焦亡等形式。近年来，随着人们对铁死亡机制研究的不断深入，铁死亡在治疗癌症上的潜力也越来受到研究者们的重视。越来越多的研究表明铁死亡至少部分介导了几种常规肿瘤治疗方法，包括免疫治疗、辐照、化疗和靶向治疗，，同时，铁死亡诱导剂的联合使用可通过进一步增强铁死亡作用使这些常规疗法
3、研究者们一直致力于将铁死亡的关键调控分子作为靶点来直接诱导肿瘤细胞发生铁死亡。由于gpx4在机体细胞中的功能十分重要，非靶向的药物难以区分机体细胞和肿瘤细胞而对肿瘤进行杀伤，故其并不是一个很好的药物靶点。而对临床数据库的分析发现在大部分肿瘤中，slc7a11都呈现高表达，且与病人愈后呈现明显相关性，故其可作为诱导铁死亡药物研发的有效靶点。另一方面，研究者们发现几种常规肿瘤治疗方法也会诱导铁死亡的发生。有研究表明当使用pd-l1抗体进行免疫治疗时，肿瘤微环境中的cd8+t细胞在进行肿瘤杀伤时会释放出的大量ifnγ一方面会诱导肿瘤细胞中slc7a11蛋白的表达下降，从而限制细胞摄入cystine，限制gsh的合成而抑制gpx4的活性，另一方面则会上调acsl4的表达，使更多的pufas活化后掺入到细胞膜上，两者共同增强了肿瘤细胞对铁死亡的敏感性，增强了cd8+t细胞对肿瘤细胞的杀伤能力。而近来来自不同研究团队的几项研究表明辐照可直接影响肿瘤细胞内slc7a11和acsl4的水平从而限制gsh的含量和增加脂质过氧化物的积累来直接诱导铁死亡。但同时辐照杀伤肿瘤也是多机制共同作用的结果，其中铁死亡的参与程度也部分取决于肿瘤细胞的代谢特征及对铁死亡的响应能力。而现有临床治疗方案中，并未出现7-dhc(7-脱氢胆固醇)合成通路代谢酶抑制剂治疗肿瘤的相关报道。
技术实现思路
1、为了克服现有技术中存在的问题，本专利技术提供一种抑制7-脱氢胆固醇合成在治疗肿瘤中的应用。专利技术人发现靶向代谢诱导铁死亡研究，有助于为肿瘤病人提供潜在治疗方案。抑制7-dhc合成显著促进铁死亡敏感性或直接诱导肿瘤细胞发生铁死亡，降低细胞内7-dhc的水平导致细胞内过氧化的磷脂大量积累，促进肿瘤细胞对铁死亡的敏感性，这提示靶向7-dhc合成可能是潜在的干预靶点。进一步，敲除7-dhc合成的关键代谢酶ebp等，能够明显降低细胞内7-dhc的水平，促进肿瘤细胞铁死亡，且ebp的抑制剂tasin-30能够促进荷瘤小鼠皮下肿瘤铁死亡，抑制皮下肿瘤的生长和增殖。本专利技术发现ebp等7-dhc合成关键代谢酶是肿瘤治疗的潜在靶点，ebp抑制剂可以作为肿瘤病人的潜在治疗方案。本专利技术为肿瘤临床治疗方案提供了重要参照依据。
2、为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：
3、本专利技术第一方面提供一种抑制7-脱氢胆固醇合成的试剂在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
4、在某一较佳实施方案中，所述肿瘤为细胞中7-脱氢胆固醇水平较高的肿瘤，例如为大b细胞淋巴瘤、肝癌、肾癌、结肠癌、乳腺癌或骨肉瘤。
5、在某一较佳实施方案中，所述抑制7-脱氢胆固醇合成能促进肿瘤细胞对铁死亡的敏感性。
6、在某一较佳实施方案中，所述试剂包括抑制7-脱氢胆固醇合成通路的中间代谢酶的抑制剂。
7、在某一较佳实施方案中，所述试剂包括抑制编码7-脱氢胆固醇合成通路的中间代谢酶的基因表达的抑制剂。
8、在某一较佳实施方案中，所述中间代谢酶为cyp51a1、msmo1、ebp和sc5d中的一种或多种。
9、其中，cyp51a1(cytochrome p450 family 51subfamily amember 1)，为细胞色素p450家族51亚家族a成员1；ebp(cholestenol delta-isomerase)为胆固醇δ异构酶；sc5d(sterol-c5-desaturase)为甾醇-5-去饱和酶；msmo1(methylsterol monooxygenase 1)为甲基甾醇单加氧酶1。
10、在某一较佳实施方案中，所述抑制剂为tasin-30，其结构式如下所示：
11、
12、在某一较佳实施方案中，所述试剂的唯一有效成分为tasin-30，所述试剂还含有1％～10％dmso、20％～40％ peg300、1％～10％tween80和40％～60％ h2o。
13、较佳地，所述试剂还含有5％ dmso、30％ peg300、5％ tween80和60％ h2o。
14、在某一较佳实施方案中，所述试剂还可包括药学上可接受的辅剂。
15、在某一较佳实施方案中，所述抑制剂tasin-30抑制7-dhc的合成，导致过氧化磷脂的大量积累，增加肿瘤细胞铁死亡的敏感性。
16、在某一较佳实施方案中，抑制剂tasin-30腹腔注射6周龄荷瘤裸鼠，每天注射含量为40mg/kg。
17、在某一具体的实施方案中，抑制ebp促进肿瘤细胞铁死亡的检测：选用ebp基因敲除的细胞系作为对照，质谱检测细胞内7-dhc的含量，选择铁死亡诱导剂处理的实验方法检测细胞活力；和/或，在某一具体的实施方案中，ebp抑制剂tasin30促进肿瘤细胞铁死亡检测：选用溶剂dmso处理的细胞系作为对照，质谱检测细胞内7-dhc的含量，选择铁死亡诱导剂处理的实验方法检测细胞活力；和/或，在某一具体的实施方案中，ebp抑制剂在体内治疗效果：选择裸鼠皮下移植肿瘤的疾病模型。
18、在某一较佳实施方案中，所述抑制剂为敲除编码cyp51a1、msmo1、ebp或sc5d的基因的试剂，例如为针对敲除编码cyp51a1、ms本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.抑制7-脱氢胆固醇合成的试剂在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为细胞中7-脱氢胆固醇水平较高的肿瘤，例如为大B细胞淋巴瘤、肝癌、肾癌、结肠癌、乳腺癌或骨肉瘤。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂包括抑制7-脱氢胆固醇合成通路的中间代谢酶的抑制剂。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂包括抑制编码7-脱氢胆固醇合成通路的中间代谢酶的基因表达的抑制剂。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述中间代谢酶为CYP51A1、MSMO1、EBP和SC5D中的一种或多种。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述抑制剂为TASIN-30，其结构式如下所示：
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述试剂的唯一有效成分为TASIN-30，所述试剂还含有1％～10％DMSO、20％～40％PEG300、1％～10％Tween80和40％～60％H2O；较佳地，所述试剂还含有5％DMSO、30％PEG300、5％Tween80和60％
8.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述抑制剂为敲除编码CYP51A1、MSMO1、EBP或SC5D的基因的试剂，例如为针对敲除编码CYP51A1、MSMO1、EBP或SC5D的基因设计的CRISPR-Cas9试剂盒，所述试剂盒例如包含序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的敲除编码CYP51A1的基因的sgRNA；序列如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示的敲除编码MSMO1的基因的sgRNA；序列如SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.6所示的敲除编码EBP的基因的sgRNA；或者，序列如SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8所示的敲除编码SC5D的基因的sgRNA。
9.一种非治疗目的的诱导细胞铁死亡的方法，其特征在于，通过抑制参与7-脱氢胆固醇合成通路的中间代谢酶的活性诱导细胞铁死亡；较佳地，所述细胞为肿瘤细胞，例如大B细胞淋巴瘤、肝癌、肾癌、结肠癌、乳腺癌或骨肉瘤。
10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述中间代谢酶为CYP51A1、MSMO1、EBP和SC5D的一种或多种。
11.如权利要求10所述的方法，其特征在于，使用含TASIN-30作为唯一有效成分的试剂抑制编码EBP的基因的表达，所述TASIN-30结构式如下所示：
12.如权利要求10所述的方法，其特征在于，使用敲除编码CYP51A1、MSMO1、EBP或SC5D的基因的试剂盒实现抑制中间代谢酶的活性，例如使用敲除编码CYP51A1、MSMO1、EBP或SC5D的基因设计的CRISPR-Cas9试剂盒，所述试剂盒例如包含序列如SEQ ID NO.1或SEQ IDNO.2所示的敲除编码CYP51A1的基因的sgRNA；序列如SEQ ID NO.3或SEQ ID NO.4所示的敲除编码MSMO1的基因的sgRNA；序列如SEQ ID NO.5或SEQ ID NO.6所示的敲除编码EBP的基因的sgRNA；或者，序列如SEQ ID NO.7或SEQ ID NO.8所示的敲除编码SC5D的基因的sgRNA。
13.含TASIN-30作为唯一有效成分的试剂在制备诱导细胞铁死亡的药物中的应用，所述TASIN-30结构式如下所示：
...【技术特征摘要】
1.抑制7-脱氢胆固醇合成的试剂在制备治疗肿瘤的药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述肿瘤为细胞中7-脱氢胆固醇水平较高的肿瘤，例如为大b细胞淋巴瘤、肝癌、肾癌、结肠癌、乳腺癌或骨肉瘤。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述试剂包括抑制7-脱氢胆固醇合成通路的中间代谢酶的抑制剂。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂包括抑制编码7-脱氢胆固醇合成通路的中间代谢酶的基因表达的抑制剂。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述中间代谢酶为cyp51a1、msmo1、ebp和sc5d中的一种或多种。
6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述抑制剂为tasin-30，其结构式如下所示：
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述试剂的唯一有效成分为tasin-30，所述试剂还含有1％～10％dmso、20％～40％peg300、1％～10％tween80和40％～60％h2o；较佳地，所述试剂还含有5％dmso、30％peg300、5％tween80和60％h2o。
8.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述抑制剂为敲除编码cyp51a1、msmo1、ebp或sc5d的基因的试剂，例如为针对敲除编码cyp51a1、msmo1、ebp或sc5d的基因设计的crispr-cas9试剂盒，所述试剂盒例如包含序列如seq id no.1或seq id no.2所示的敲除编码cyp51a1的基因的sgrna；序列如seq id no.3或seq id no.4所示的敲除编码msmo1的基因的sgrna；序列如seq id no...
【专利技术属性】
技术研发人员：王平，李亚旭，段秋慧，冉巧，余蕾，
申请(专利权)人：上海市第十人民医院，
类型：发明
国别省市：
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