【技术实现步骤摘要】
(一)本专利技术涉及一种对金黄色葡萄球菌(cmcc(b)26003)和白色念珠菌(canidiaalbicans)(cmcc(f)98001)具有抑制能力的抑菌剂，具体涉及一种青霉菌lp.py-01代谢产物及在制备抑菌剂中的应用。
技术介绍
0、(二)
技术介绍
1、毛冬青(ilex pubescens hook.et arn)，别名乌尾丁、六月霜，是冬青科冬青属植物，花期4-5月，果期8-11月。分布于中国安徽、浙江等地。研究发现，毛冬青树中化学成分的主要有三萜皂苷类、环烯醚萜苷类、木质素类、苯丙素类、酚酸类、黄酮类、绿原酸类。毛冬青为中国南方常用中药，有抗氧化、抗炎、抗病毒、镇咳祛痰、清热解毒、消肿镇痛之功效，此外毛冬青提取物被报道具有抗疲劳和抗菌作用。
2、植物内生菌(endophyte)是特指一类在其整个生活史或者生活史的部分阶段寄生于健康植物的部分细胞间隙、器官或者组织中，而不使宿主植物出现任何反常症状或者病症的微生物。从植物中能分离出具有多种生物活性的内生菌，其中部分内生菌通过次生代谢途径可以产生与植物次生代谢产物相似的产物。不同植物内生菌产生的次级代谢产物可能具有多样性，这为发现新型抗菌化合物提供了机会。这对于应对不断出现的新型病原体和耐药菌株具有重要意义。
3、与合成抗菌剂相比，植物内生菌产生的次级代谢产物通常更环保。它们在生产和分解过程中对环境的影响相对较小，因此在可持续农业和生态系统管理中具有潜在的优势。
技术实现思路
0、(三
1、本专利技术目的是提供一种青霉菌代谢产物及在制备抑菌剂中的应用，本专利技术青霉菌lp.py-01发酵产的代谢产物具有对金黄色葡萄球菌(cmcc(b)26003)和白色念珠菌(canidia albicans)(cmcc(f)98001)抑制能力，作为天然抑菌剂有望为农业和医学领域提供一种更可持续和环保的解决方案。
2、本专利技术采用的技术方案是：
3、本专利技术提供一种青霉菌lp.py-01代谢产物，所述代谢产物按如下方法制备：(1)将青霉菌(penicillium macrosclerotiorum)lp.py-01发酵液经超声破碎后抽滤，滤液及滤渣分别用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯相并浓缩至恒重，获得代谢粗产物；青霉菌(penicillium macrosclerotiorum)lp.py-01，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：cctcc no:m 20232576，保藏日期为2023年12月15日，保藏地址：中国武汉，武汉大学，邮编：430072；(2)将步骤(1)代谢粗产物用乙酸乙酯溶解后进行硅胶柱层析，以体积比100:0、100:1、100:2、100:5、100:10、100:20、50:50、0:100的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，洗脱速度均为5ml/min，洗脱量均为2～3个柱体积，收集的体积比100:2石油醚-乙酸乙酯的流出液浓缩至干，记为组分e.1；(3)将步骤(2)组分e.1用乙酸乙酯溶解后再次进行硅胶柱层析，以体积比10:1-0:1石油醚-乙酸乙酯为流动相洗脱，收集的体积比8:1到4:1的流出液浓缩至干，记为组分e.1-2；(4)步骤(3)组分e.1-2用乙酸乙酯重结晶，收集晶体，获得青霉菌lp.py-01的代谢产物。
4、进一步，步骤(1)所述发酵液按如下方法制备：将青霉菌lp.py-01接种于发酵培养基中，28℃，180r/min培养5d，获得发酵液；所述发酵培养基组成：蛋白胨10g/l，蔗糖40g/l，溶剂为蒸馏水，ph为5.6。
5、进一步，步骤(1)所述代谢粗产物按如下方法制备：发酵液在405w条件下，每工作3s，间歇4s，进行300次循环对发酵液超声破壁处理后抽滤，滤液用1倍体积乙酸乙酯萃取3次，滤渣用乙酸乙酯浸泡12h后过滤，合并乙酸乙酯相，浓缩至恒重，获得代谢粗产物。
6、进一步，所述步骤(2)是将步骤(1)代谢粗产物用乙酸乙酯溶解，加入硅胶，混合均匀后，真空干燥，即为吸附样品的硅胶；将吸附样品的硅胶上样于硅胶色谱柱中；所述硅胶与发酵粗产物质量比为1:1。
7、进一步，所述步骤(3)是将步骤(2)组分e.1用乙酸乙酯溶解，加入硅胶，混合均匀后，真空干燥，即为吸附组分e.1的硅胶；将吸附组分e.1的硅胶上样于硅胶色谱柱中；组分e.1与硅胶质量比为1:1。
8、本专利技术还提供一种所述青霉菌lp.py-01代谢产物在制备抑菌剂中的应用，所述抑菌剂包括金黄色葡萄糖球菌抑菌剂或白色念珠菌抑菌剂。
9、所述金黄色葡萄球菌包括金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)cmcc(b)26003，所述白色念珠菌包括白色念珠菌(canidia albicans)cmcc(f)98001。
10、与现有技术相比，本专利技术有益效果主要体现在：
11、本专利技术提供一株青霉菌lp.py-01发酵提取的代谢产物，以及代谢产物作为抑菌剂的应用，所述代谢产物抑制金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus)(cmcc(b)26003)的mic＝0.3906mg/ml，抑制白色念珠菌(canidia albicans)(cmcc(f)98001)的mic＝0.7813mg/ml。本专利技术通过青霉菌lp.py-01微生物发酵的方法制备得到抑菌剂，为天然成分，安全性高，有望开发成天然抑菌产品。
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1.一种青霉菌Lp.PY-01代谢产物，其特征在于，所述代谢产物按如下方法制备：(1)将青霉菌Lp.PY-01发酵液经超声破碎后抽滤，滤液及滤渣分别用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯相并浓缩至恒重，获得代谢粗产物；青霉菌(Penicillium macrosclerotiorum)Lp.PY-01，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：CCTCC NO:M 20232576；(2)将步骤(1)代谢粗产物用乙酸乙酯溶解后进行硅胶柱层析，以体积比100:0、100:1、100:2、100:5、100:10、100:20、50:50、0:100的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，洗脱速度均为5mL/min，洗脱量均为2～3个柱体积，收集的体积比100:2石油醚-乙酸乙酯的流出液浓缩至干，记为组分E.1；(3)将步骤(2)组分E.1用乙酸乙酯溶解后再次进行硅胶柱层析，以体积比10:1-0:1石油醚-乙酸乙酯为流动相洗脱，收集的体积比8:1到4:1的流出液浓缩至干，记为组分E.1-2；(4)组分E.1-2用乙酸乙酯重结晶，收集晶体，获得青霉菌Lp.PY-01代谢产物。
2.如权利要求1所
3.如权利要求1所述青霉菌Lp.PY-01代谢产物，其特征在于，步骤(1)所述代谢粗产物按如下方法制备：发酵液在405W条件下，每工作3s，间歇4s，进行300次循环对发酵液超声破壁处理后抽滤，滤液用1倍体积乙酸乙酯萃取3次，滤渣用乙酸乙酯浸泡12h后过滤，合并乙酸乙酯相，浓缩至恒重，获得代谢粗产物。
4.如权利要求1所述青霉菌Lp.PY-01代谢产物，其特征在于，所述步骤(2)是将步骤(1)代谢粗产物用乙酸乙酯溶解，加入硅胶，混合均匀后，真空干燥，即为吸附样品的硅胶；将吸附样品的硅胶上样于硅胶色谱柱中；所述硅胶与发酵粗产物质量比为1:1。
5.如权利要求1所述青霉菌Lp.PY-01代谢产物，其特征在于，所述步骤(3)是将步骤(2)组分E.1用乙酸乙酯溶解，加入硅胶，混合均匀后，真空干燥，即为吸附组分E.1的硅胶；将吸附组分E.1的硅胶上样于硅胶色谱柱中。
6.一种权利要求1所述青霉菌Lp.PY-01代谢产物在制备抑菌剂中的应用。
7.如权利要求6所述的应用，其特征在于，所述抑菌剂包括金黄色葡萄糖球菌抑菌剂或白色念珠菌抑菌剂。
8.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述金黄色葡萄球菌包括金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)CMCC(B)26003。
9.如权利要求7所述的应用，其特征在于，所述白色念珠菌包括白色念珠菌(CanidiaAlbicans)CMCC(F)98001。
...【技术特征摘要】
1.一种青霉菌lp.py-01代谢产物，其特征在于，所述代谢产物按如下方法制备：(1)将青霉菌lp.py-01发酵液经超声破碎后抽滤，滤液及滤渣分别用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯相并浓缩至恒重，获得代谢粗产物；青霉菌(penicillium macrosclerotiorum)lp.py-01，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为：cctcc no:m 20232576；(2)将步骤(1)代谢粗产物用乙酸乙酯溶解后进行硅胶柱层析，以体积比100:0、100:1、100:2、100:5、100:10、100:20、50:50、0:100的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，洗脱速度均为5ml/min，洗脱量均为2～3个柱体积，收集的体积比100:2石油醚-乙酸乙酯的流出液浓缩至干，记为组分e.1；(3)将步骤(2)组分e.1用乙酸乙酯溶解后再次进行硅胶柱层析，以体积比10:1-0:1石油醚-乙酸乙酯为流动相洗脱，收集的体积比8:1到4:1的流出液浓缩至干，记为组分e.1-2；(4)组分e.1-2用乙酸乙酯重结晶，收集晶体，获得青霉菌lp.py-01代谢产物。
2.如权利要求1所述青霉菌lp.py-01代谢产物，其特征在于，步骤(1)所述发酵液按如下方法制备：将青霉菌lp.py-01接种于发酵培养基中，28℃，180r/min培养5d，获得发酵液；所述发酵培养基组成：蛋白胨10g/l，蔗糖40g/l，溶剂为蒸馏水，ph为5.6。
3.如权利要求1...
【专利技术属性】
技术研发人员：陶昭阳，陈建澍，杨胜利，张慧，肖功年，刘兴全，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：
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