【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本申请对在2021年9月28日提出申请的日本专利申请第2021-158346主张优先权和其利益，其全部内容通过参照并入本申请中。本专利技术涉及纯化二氯乙酸的制造方法、其分析方法和使用纯化二氯乙酸的基于酰胺法的核酸分子的合成方法。
技术介绍
1、近年来，对核酸分子在医疗领域的应用的兴趣不断高涨。例如，可举出反义核酸、适配体、核酶和sirna等诱导rna干扰(rnai)的核酸等，它们被称为核酸药物。
2、核酸分子可利用固相合成法合成，将在固相载体上使核酸延伸而合成的核酸分子从固相载体切出，接着，对包含核糖的核酸分子而言，对核糖的2’位的羟基的保护基进行脱保护以将其除去，从而制造作为目标的核酸分子。已知固相合成法中使用核苷的亚磷酰胺(以下，称为称为“酰胺(amidite)”)作为原料，使用二氯乙酸溶液对5’位的羟基的保护基进行脱保护，但以往使用二氯乙酸溶液所合成的核酸分子的收率并不总令人满意，合成也并非是高效的(专利文献1)。
3、现有技术文献
4、专利文献
5、专利文献1：国际公开第99/43694号公报
技术实现思路
1、专利技术所要解决的课题
2、本专利技术的目的在于提供核酸分子的高效的制造方法。
3、用于解决课题的手段
4、本申请的专利技术人为了达成上述目的而反复进行了深入研究，结果提供核酸分子的高效的制造方法、以及上述二氯乙酸的分析方法，所述制造方法中，在合成核酸分子时，使用甲醛和二氯乙酸酐的含
5、本专利技术包括以下的方式，但不限于这些。
6、1.纯化二氯乙酸的制造方法(以下，记为本专利技术纯化方法)，其是制造甲醛相对于二氯乙酸而言的摩尔比为81×10-5以下、并且二氯乙酸酐相对于二氯乙酸而言的摩尔比为20×10-5以下的纯化二氯乙酸的方法，
7、使甲醛和二氯乙酸酐中的两者或一者的含量超过上述比率的二氯乙酸、与选自由脂肪族醇、脂肪族胺和水组成的组中的至少一种具有比二氯乙酸低的沸点的化合物接触，在具有比二氯乙酸低的沸点的非质子性的非活性溶剂的共存下，从生成的混合液中蒸馏除去含有上述溶剂的馏分。
8、2.如前项1所述的制造方法，其中，上述非质子性的非活性溶剂为具有181℃以下的沸点的非质子性的非活性溶剂。
9、3.如前项1或2所述的制造方法，其中，上述非质子性的非活性溶剂为二氯甲烷、乙腈或芳香族有机溶剂。
10、4.如前项3所述的制造方法，其中，芳香族有机溶剂为甲苯。
11、5.如前项1～4中任一项所述的制造方法，其中，脂肪族醇为c1-c6的脂肪族醇。
12、6.如前项1～5中任一项所述的制造方法，其中，上述纯化二氯乙酸中，甲醛相对于二氯乙酸而言的摩尔比为41×10-5以下。
13、7.如前项1～6中任一项所述的制造方法，其中，上述纯化二氯乙酸中，二氯乙酸酐相对于二氯乙酸而言的摩尔比为10×10-5以下。
14、8.如前项1～7中任一项所述的制造方法，其中，上述纯化二氯乙酸中，甲醛相对于二氯乙酸而言的摩尔比为81×10-6以下。
15、9.如前项1～8中任一项所述的制造方法，其中，上述纯化二氯乙酸中，二氯乙酸酐相对于二氯乙酸而言的摩尔比为50×10-6以下。
16、10.核酸分子的制造方法，其为基于酰胺法的核酸分子的制造方法，包括：准备甲醛相对于二氯乙酸而言的摩尔比为81×10-5以下、并且二氯乙酸酐相对于二氯乙酸而言的摩尔比为20×10-5以下的纯化二氯乙酸的工序；和使上述纯化二氯乙酸与5’末端的羟基被保护的核酸分子反应，将上述羟基的保护基除去的工序。
17、11.如前项10所述的制造方法，其中，上述准备工序为前项1～9中任一项所述的方法。
18、12.如前项10或11所述的制造方法，其中，5’末端的羟基被保护的核酸分子为式(1)表示的核酸分子，
19、[化学式1]
20、
21、(式中，
22、g2表示羟基的保护基，
23、ba相同或彼此不同，各自独立地表示可被保护基保护的核酸碱基，
24、r1、r2和r3相同或彼此不同，各自独立地表示氢原子或烷氧基，
25、r相同或彼此不同，各自独立地表示经保护的羟基、氢原子、氟原子、甲氧基、2-甲氧基乙基、或oq’基，
26、q’相同或彼此不同，各自独立地表示与核糖的4’位的碳原子键合的亚甲基、与核糖的4’位的碳原子键合的亚乙基、或与核糖的4’位的碳原子键合的乙叉基，
27、y相同或彼此不同，各自独立地表示氧原子或硫原子，
28、n表示1～200中的任一整数，
29、w1表示oz基，且x1表示r基，或者
30、w1表示ov基，且x1表示oz基，
31、v表示羟基的保护基，
32、z为具有由固相载体和连接基团组成的结构的基团。
33、并且，n为2以上的整数时，式(1)表示的核酸分子可以在各核苷酸之间组入非核苷酸接头。)
34、经脱保护的核酸分子为式(2)表示的核酸分子，
35、[化学式2]
36、
37、(式中，
38、g2、ba、r、y、x1、w1和n与前述相同，并且，
39、可以以式(1)中所定义的方式，在核苷酸之间组入非核苷酸接头。)。
40、13.式(2’)表示的核酸分子的制造方法，其包括：
41、前项12所述的工序；
42、进一步从该工序中生成的式(2)表示的核酸分子除去z表示的基团的工序；以及
43、除去羟基和核酸碱基的保护基的工序，
44、[化学式3]
45、
46、(式中，
47、y和n与前述相同，
48、bc相同或彼此不同，各自独立地表示核酸碱基，
49、g4相同或彼此不同，各自独立地表示氢离子、碱金属离子、铵离子、烷基铵离子、或羟基烷基铵离子，
50、r’相同或彼此不同，各自独立地表示羟基、氢原子、氟原子、甲氧基、2-甲氧基乙基、或oq’基，
51、q’与前述相同，并且，
52、x3和w3各自独立地表示羟基，或者
53、x3表示r’基，且w3表示羟基。并且，
54、可以以式(1)中所定义的方式，在核苷酸之间组入非核苷酸接头。)。
55、14.如前项10～13中任一项所述的制造方法，其中，核酸分子为包含核糖核酸(rna)的核酸分子。
56、15.如前项14所述的制造方法，其中，核酸分子为核糖核酸(rna)，其核糖的2’位的羟基的保护基为式(6)表示的保护基。
57、式(6)：
58、[化学式4]本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.纯化二氯乙酸的制造方法，其是制造甲醛相对于二氯乙酸而言的摩尔比为81×10-5以下、并且二氯乙酸酐相对于二氯乙酸而言的摩尔比为20×10-5以下的纯化二氯乙酸的方法，
2.如权利要求1所述的制造方法，其中，所述非质子性的非活性溶剂为具有181℃以下的沸点的非质子性的非活性溶剂。
3.如权利要求1或2所述的制造方法，其中，所述非质子性的非活性溶剂为二氯甲烷、乙腈或芳香族有机溶剂。
4.如权利要求3所述的制造方法，其中，芳香族有机溶剂为甲苯。
5.如权利要求1～4中任一项所述的制造方法，其中，脂肪族醇为C1-C6的脂肪族醇。
6.如权利要求1～5中任一项所述的制造方法，其中，所述纯化二氯乙酸中，甲醛相对于二氯乙酸而言的摩尔比为41×10-5以下。
7.如权利要求1～6中任一项所述的制造方法，其中，所述纯化二氯乙酸中，二氯乙酸酐相对于二氯乙酸而言的摩尔比为10×10-5以下。
8.如权利要求1～7中任一项所述的制造方法，其中，所述纯化二氯乙酸中，甲醛相对于二氯乙酸而言的摩尔比为81×10-6以下。<...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】
1.纯化二氯乙酸的制造方法，其是制造甲醛相对于二氯乙酸而言的摩尔比为81×10-5以下、并且二氯乙酸酐相对于二氯乙酸而言的摩尔比为20×10-5以下的纯化二氯乙酸的方法，
2.如权利要求1所述的制造方法，其中，所述非质子性的非活性溶剂为具有181℃以下的沸点的非质子性的非活性溶剂。
3.如权利要求1或2所述的制造方法，其中，所述非质子性的非活性溶剂为二氯甲烷、乙腈或芳香族有机溶剂。
4.如权利要求3所述的制造方法，其中，芳香族有机溶剂为甲苯。
5.如权利要求1～4中任一项所述的制造方法，其中，脂肪族醇为c1-c6的脂肪族醇。
6.如权利要求1～5中任一项所述的制造方法，其中，所述纯化二氯乙酸中，甲醛相对于二氯乙酸而言的摩尔比为41×10-5以下。
7.如权利要求1～6中任一项所述的制造方法，其中，所述纯化二氯乙酸中，二氯乙酸酐相对于二氯乙酸而言的摩尔比为10×10-5以下。
8.如权利要求1～7中任一项所述的制造方法，其中，所述纯化二氯乙酸中，甲醛相对于二氯乙酸而言的摩尔比为81×10-6以下。
9.如权利要求1～8中任一项所述的制造方法，其中，所述纯化二氯乙酸中，二氯乙酸酐相对于二氯乙酸而言的摩尔比为50×10-6以下。
10.核酸分子的制造方法，其为基于酰胺法的核酸分子的制造方法，包括：
11.如权利要求10所述的制造方法，其中，所述准备工序为权利要求1～9中任一项所述的方法。
12.如权利要求10或11所述的制造方法，其中，5’末端的羟基被保护的核酸分子为式(1)表示的核酸分子，
13.式(2’)表示的核酸分子的制造方法，其包括：
14.如权利要求10～13中任一项所述的制造方法，其中，核酸分子为包含核糖核酸(rna)的核酸分子。
15.如权利要求14所述的制造方法，其中，核酸分子为核糖核酸(rna)，其核糖的2’位的羟基的保护基为式(6)表示的保护基，
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【专利技术属性】
技术研发人员：加纳俊史，田中雄树，河合隼人，
申请(专利权)人：住友化学株式会社，
类型：发明
国别省市：
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