一种基于农杆菌介导的水曲柳瞬时转化体系及其建立方法技术

本发明专利技术属于基因工程技术领域，具体涉及一种基于农杆菌介导的水曲柳瞬时转化体系及其建立方法。该基于农杆菌介导的水曲柳瞬时转化体系是指在农杆菌菌液中添加5‑氮胞苷(Azac)、二硫苏糖醇(DTT)、乙酰丁香酮(AS)获得农杆菌侵染液，以水曲柳无菌幼苗为外植体，通过农杆菌侵染液瞬时侵染得到瞬时转化幼苗，构成了本发明专利技术所述的基于农杆菌介导的水曲柳瞬时转化体系。本发明专利技术提供的基于农杆菌介导的水曲柳瞬时转化体系可以在短时间内，高转化效率的得到水曲柳瞬时转化幼苗，可用于水曲柳基因功能的验证。该体系为研究水曲柳基因功能提供高效快速的技术平台，为水曲柳分子育种提供技术支撑。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程，具体涉及一种基于农杆菌介导的水曲柳瞬时转化体系及其建立方法。

技术介绍

1、农杆菌介导的瞬时转化是一种高效的研究基因功能的方法，作为稳定转化系统的补充，为快速研究基因功能提供有力工具，为没有稳定遗传转化体系的植物进行同源表达和反向遗传研究提供了可能。以往对于瞬时转化的研究大多集中在草本植物，在木本植物中的研究相对薄弱。而木本植物在生理和形态结构以及生长发育等方面都与草本植物存在很大的差异，其抗逆机理与草本植物也有很大区别。

2、水曲柳(fraxinus mandshurica)是木犀科一种雌雄异株风媒传粉树种。由于其优良的木材品质和特殊的纹理被广泛应用于家具和特殊建筑材料。水曲柳不仅具有较高的经济价值，同时其对于生态系统的稳定、生物多样性的保护和森林的可持续发展也具有重要作用。因此，建立一种高效、稳定的水曲柳瞬时转化技术，筛选优良抗性基因，创制出水曲柳抗逆新种质具有重要意义。

3、目前，现有的水曲柳瞬时转化周期太长，水曲柳原瞬时转化方法的转化效率低。因此，建立一种基于农杆菌介导的水曲柳瞬时转化技术体系，能够为本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种基于农杆菌介导的水曲柳瞬时转化体系，其特征在于，在农杆菌菌液中添加5-氮胞苷、二硫苏糖醇、乙酰丁香酮获得农杆菌侵染液，以水曲柳无菌幼苗为外植体，通过农杆菌侵染液瞬时侵染得到瞬时转化幼苗，构成所述基于农杆菌介导的水曲柳瞬时转化体系。

2.根据权利要求1所述的基于农杆菌介导的水曲柳瞬时转化体系，其特征在于，农杆菌菌液中农杆菌的浓度为OD＝0.4～1.0。

3.根据权利要求1所述的基于农杆菌介导的水曲柳瞬时转化体系，其特征在于，侵染时间为2～10h。

4.根据权利要求1所述的基于农杆菌介导的水曲柳瞬时转化体系，其特征在于，以农杆菌菌液体积计，5-氮胞...

【技术特征摘要】

1.一种基于农杆菌介导的水曲柳瞬时转化体系，其特征在于，在农杆菌菌液中添加5-氮胞苷、二硫苏糖醇、乙酰丁香酮获得农杆菌侵染液，以水曲柳无菌幼苗为外植体，通过农杆菌侵染液瞬时侵染得到瞬时转化幼苗，构成所述基于农杆菌介导的水曲柳瞬时转化体系。

2.根据权利要求1所述的基于农杆菌介导的水曲柳瞬时转化体系，其特征在于，农杆菌菌液中农杆菌的浓度为od＝0.4～1.0。

3.根据权利要求1所述的基于农杆菌介导的水曲柳瞬时转化体系，其特征在于，侵染时间为2～10h。

4.根据权利要求1所述的基于农杆菌介导的水曲柳瞬时转化体系，其特征在于，以农杆菌菌液体积计，5-氮胞苷的添加量为10～50μg/l；二硫苏糖醇的添加量为100～500mg/l；乙酰丁香酮的添加量为50～250mg/l。

5.根据权利要求1所述的基于农杆菌介导的水曲柳瞬时转化体系的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：

6.根据权利要求5所述的基于农杆菌介导的水曲柳瞬时转化体系的建立方法，其特征在于，将水曲柳组培幼苗转移到农杆菌侵染液中...

【专利技术属性】
技术研发人员：及晓宇，聂显辉，聂显光，李磊，王玉成，
申请(专利权)人：沈阳农业大学，
类型：发明
国别省市：