一种细菌表面拓扑糖基化的方法技术

本申请涉及微生物工程领域，具体公开了一种细菌表面拓扑糖基化的方法。一种细菌表面拓扑糖基化的方法，包括以下步骤：以炔丙胺、丙烯酸甲酯和乙二胺为原料，通过迭代Michael加成反应和酰胺缩合反应，合成具有不同糖末端数目的炔基化拓扑结构；将细菌通过酰胺缩合反应进行叠氮基团功能化，利用铜催化叠氮化物‑炔环加成反应，得到拓扑糖基化益生菌。本申请的方法具有增加益生菌的粘液层吸附、增加组织定植能力的优点。

【技术实现步骤摘要】

本申请涉及微生物工程领域，更具体地说，它涉及一种细菌表面拓扑糖基化的方法。

技术介绍

1、细菌细胞表面装饰着各种寡糖和多糖，包括荚膜多糖、脂多糖、糖蛋白和细胞壁相关糖缀合物，它们主要决定细菌与宿主之间的相互作用，并在特定生态位中对细菌的生存起着至关重要的作用。因此，精确地控制糖分子在细菌表面的丰度和分布，并系统地研究其对细菌行为的影响，是微生物工程领域的一个重要课题。

2、基因工程已被广泛用于调节细菌胞外多糖的合成和分泌，赋予细菌新的功能并改变与宿主的相互作用模式。这种工程方法在保护微生物细胞免受各种环境胁迫和提高微生物疗法的治疗效果方面是有效的。尽管基因工程的使用在细菌表面糖基化方面取得了令人瞩目的进展，但由于基因回路的复杂设计和特定转录-翻译系统的参与，可用于这种修饰的细菌菌株和糖的类型受到限制。此外，通过基因工程精确控制细菌表面糖组分的丰度和相对分布仍然具有挑战性。

技术实现思路

1、为了精确地控制糖分子在细菌表面的丰度和分布，增加益生菌在相应部位的粘附和定植，提高益生菌作为活体药物的生物利本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种细菌表面拓扑糖基化的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的细菌表面拓扑糖基化的方法，其特征在于，所述以炔丙胺、丙烯酸甲酯和乙二胺为原料，通过迭代Michael加成反应和酰胺缩合反应，合成具有不同糖末端数目的炔基化拓扑结构指的是以下步骤：

3.根据权利要求2所述的细菌表面拓扑糖基化的方法，其特征在于，步骤①的具体步骤为：将18mmol炔丙胺溶解于40mL甲醇中，随后将其滴加到含10mL甲醇的45mmol丙烯酸甲酯溶液中搅拌，冰浴1小时，将所得混合物在0℃下连续搅拌1h，然后返回室温继续搅拌48h，经过旋转蒸发、硅胶柱层析纯化、真空干燥等一...

【技术特征摘要】

1.一种细菌表面拓扑糖基化的方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的细菌表面拓扑糖基化的方法，其特征在于，所述以炔丙胺、丙烯酸甲酯和乙二胺为原料，通过迭代michael加成反应和酰胺缩合反应，合成具有不同糖末端数目的炔基化拓扑结构指的是以下步骤：

3.根据权利要求2所述的细菌表面拓扑糖基化的方法，其特征在于，步骤①的具体步骤为：将18mmol炔丙胺溶解于40ml甲醇中，随后将其滴加到含10ml甲醇的45mmol丙烯酸甲酯溶液中搅拌，冰浴1小时，将所得混合物在0℃下连续搅拌1h，然后返回室温继续搅拌48h，经过旋转蒸发、硅胶柱层析纯化、真空干燥等一系列工艺，最终得到中间体a。

4.根据权利要求2所述的细菌表面拓扑糖基化的方法，其特征在于，步骤②的具体步骤为：将8.5mmol中间体a溶解于10ml甲醇中，得到中间体a的甲醇溶液，将410mmol乙二胺溶解于80ml甲醇中，得到乙二胺的甲醇溶液，将中间体a的甲醇溶液滴入乙二胺的甲醇溶液中，在0℃下反应1h；返回室温后，再搅拌48小时，然后在35℃下旋转蒸发除去溶剂；用体积比为9:1的甲苯和甲醇的共沸混合物洗去残留的乙二胺；经真空蒸馏后，用闪柱色谱法纯化，最终得到拓扑化合物b。

5.根据权利要求2所述的细菌表面拓扑糖基化的方法，其特征在于，步骤③的具体步骤为：将3.5mmol拓扑化合物b溶解于4ml甲醇中，得到拓扑化合物b的甲醇溶液，将21mmol丙烯酸甲酯溶解于14ml甲醇中，得到丙烯酸甲酯的甲醇溶液，将拓扑化合物b的甲醇溶液滴入丙烯酸甲酯的甲醇溶液中，在0℃下静置1h，搅拌1h，逐渐加热至25℃，再搅拌96h，旋转蒸发除去溶剂，剩余混合物经生理盐水洗涤，闪柱层析纯化，得到中间产物c。

6.根据权利要求2所述的细菌表面拓扑糖基化的方法，其特征在于，步骤④的具体步骤为：将1...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘尽尧，匡晓，
申请(专利权)人：上海交通大学医学院附属仁济医院，
类型：发明
国别省市：