一种猕猴桃根多糖提取物的制备方法技术

本发明专利技术提供了一种猕猴桃根多糖提取物的制备方法，所述的方法包括：取干燥猕猴桃根（Ｒａｄｉｘ？Ａｃｔｉｎｉｄｉａ？Ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）以水加热回流提取，提取液离心，取上清液过微孔滤膜，滤液超滤，浓缩至生药材含量为０．１～５ｇ／ｍＬ，浓缩液加入８５～９５％乙醇至乙醇体积浓度为５０～９０％，静置醇沉，离心，取沉淀洗涤后在６０～８０℃真空干燥，得到猕猴桃根粗多糖经进一步纯化得到猕猴桃根精制多糖；本发明专利技术的有益效果主要体现在：（１）采用本发明专利技术方法制备猕猴桃根多糖，达到最大限度的分离、纯化作用，猕猴桃根多糖纯度高、提取率大，使有效成分得到富集，药效得以提高；（２）采用本发明专利技术方法，大大节约了乙醇用量，降低了成本；（３）采用本发明专利技术方法，大大减少了乙醇用量、且不需要使用乙醚，提高了生产安全性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种猕猴桃根多糖提取物(包括猕猴桃根粗多糖与猕猴桃根精制多糖)的制备方法。(二)
技术介绍
猕猴t兆根(Radix Actinidia Chinensis)，为中华猕猴申兆(Actindiachinensis Planch)的根，又名藤梨根，收载于《中国药典》(1977年版)，具有清热、利尿、活血、消肿等 作用，临床上主要用于治疗胃肠道肿瘤及乳腺癌，疮疖，瘰疬结核，肝炎等。 现代药理研究发现猕猴桃根中的多糖成分-中华猕猴桃根多糖(Actindia Chinensis Planch Polysaccharide, ACPS)具有抗肿瘤、增强免疫机能、消除活性氧自由基 等作用，且无副作用。近年来，对于猕猴桃根多糖的药理研究已有文献报道，阎家麒等发现 中华猕猴桃根提取物对超氧自由基的去除能力与SOD相同，对氢自由基的去除能力比VC略 强。张菊明、林佩芳等研究表明猕猴桃根多糖复合物可以抑制小鼠肿瘤的增长以及增强细 胞天然杀伤功能，并且对于宿主具有保护作用，机体特异抗菌抗体的水平，激活巨噬细胞的 吞噬功能。目前，猕猴桃根多糖提取物的制备主要采用以下两种方法 方法1 :猕猴桃根药材加20倍的水加热提取，每次0. 5h，提取2次，水提液加入乙 醇使含醇量达80% (v/v)，静置过夜，抽滤，得沉淀。这种方法制备的猕猴桃根多糖提取物 提取率低，纯度低，药效活性低，颜色深、质量差，能耗大，成本高。 方法2 :是本专利专利技术人申请(并授权)的专利，专利公告号CN1067258C，具体方 法猕猴桃根药材加2 8倍量20 50% (v/v)的乙醇浸渍1 3次，每次18 30小时， 静置，取上清液，合并，加乙醇调至含乙醇量为60 95% (v/v)，静置24小时，离心，沉淀物 再加2 7倍量50 80%乙醇(v/v)、无水乙醇各洗一次，弃去洗液，沉淀物再加2 4倍 量乙醚洗涤一次，弃去乙醚液，沉淀物室温减压干燥。它的缺点是猕猴桃根多糖提取率、纯 度与药效活性较低，能耗大，操作繁琐，耗时长，成本高，而且由于使用了乙醚，增加了安全 隐患。(三)
技术实现思路
本专利技术目的是提供一种工艺简便，提取率高，纯度高，药效活性高，能耗小、成本低的猕猴桃根多糖提取物的制备方法。 本专利技术采用的技术方案是 —种猕猴桃根多糖提取物的制备方法，所述的方法包括 取干燥猕猴桃根(Radix Actinidia Chinensis)(含饮片)以水加热回流提取，提 取液高速离心(转速5000 25000r/min，时间5 30min)除去不溶物，上清液先用截留 分子量为3000000Da的膜超滤除去蛋白质等大分子物质；超滤液再用截留分子量为5000Da 的膜超滤除去无机盐、氨基酸、小分子色素等小分子杂质，同时除去滤液中的部分水份，浓 縮至所得浓縮液中药材含量为0. 1 5g/mL，浓縮液加入乙醇至乙醇浓度为50 90% (v/3v)，静置醇沉，离心，取沉淀洗涤后干燥，即得所述猕猴桃根(粗)多糖。 猕猴桃根粗多糖，还可进一步采用以下纯化步骤 (1)取猕猴桃根粗多糖，每g加蒸馏水50 200ml配制成水溶液，水溶液采用聚酰胺或活性炭或硅藻土等脱色剂脱色，过滤，取滤液进行下一步纯化操作； (2)步骤(1)滤液上大孔吸附树脂柱(可除去蛋白质，多肽，核酸等杂质)或DEAE纤维素柱(可除去多糖中的蛋白质，多肽，核酸等杂质)，以NaCl溶液洗脱，洗脱液采用截留分子量为1000 5000Da的超滤膜洗滤1 3次，除盐并浓縮，得浓縮液； (3)浓縮液干燥即得猕猴桃根多糖。 上述步骤(2)中的大孔吸附树脂柱和DEAE纤维素柱纯化技术可以单独使用，也可 以两项联用，即步骤(2)可重复进行，通常先用大孔吸附树脂纯化，再用DEAE纤维素柱纯 化。 以上所述大孔吸附树脂的型号可以是AB-8型，MG-1型，LSA-5B型，X-5型，H107 型，S-8型，D900型，HPSIP1300型，SIP1400型，NKA-9型，DM130型或D3520型等，所述DEAE 纤维素可以是DEAE-32或DEAE-52。 具体的，优选的，所述的方法按如下步骤进行 取干燥猕猴桃根，加入质量为猕猴桃根质量6 30倍的水，加热回流提取1 3 次、每次1 3小时，合并提取液，5000 25000r/min离心10min 30min，除去不溶物，上 清液过0. 2 0. 8 ii m孔径的微孔滤膜，滤液用截留分子量为3000000Da的膜超滤，超滤液 用截留分子量5000Da的膜超滤，浓縮至所得浓縮液中生药材含量为0. 2 2g/mL，浓縮液在 25 45。C下加入85 95%乙醇至乙醇体积浓度为60 80%，静置6 72小时，5000 25000r/min离心10min 20min，取沉淀以无水乙醇洗涤1 3次，洗涤后的沉淀60 80°C 真空干燥，得到所述猕猴桃根粗多糖。 猕猴桃根粗多糖纯化步骤如下 (1)取猕猴桃根粗多糖，每g加蒸馏水50 200ml配制成水溶液，水溶液按药脂比 50 70mg : lg加入聚酰胺吸附脱色，调pH至5 6，在室温下振摇50 60min，过滤，取 滤液进行下一步纯化操作； (2)步骤(1)滤液上大孔吸附树脂柱，以NaCl溶液洗脱，洗脱液采用截留分子量 为1000 5000Da的超滤膜洗滤1 3次，除盐并浓縮，得浓縮液1 ;所述大孔树脂的型号 为下列之一 AB-8型、MG-1型、LSA-5B型、X-5型、H107型、S-8型、D900型、HPSIP1300型、 SIP1400型、NKA-9型、DM130型或D3520型； (3)步骤(1)滤液或步骤(2)浓縮液1上DEAE纤维素柱，以NaCl溶液洗脱，洗脱 液采用截留分子量为1000 5000Da的超滤膜洗滤1 3次，除盐并浓縮，得浓縮液2 ; (4)浓縮液1或浓縮液2干燥即得猕猴桃根多糖。 本专利技术主要采用高速离心结合超滤、柱层析等分离、纯化技术，对猕猴桃根多糖的 制备方法进行了改进。本专利技术集成了超滤法与柱层析等技术的优点，以药效作用为指标，最 大限度的除去无机盐、氨基酸、小分子色素等小分子杂质，与蛋白质等大分子杂质。该方法 是一个纯物理过程，条件温和，节能环保，适合工业生产。 本专利技术的有益效果主要体现在 (1)本专利技术方法将猕猴桃根水提液离心、微滤后，滤液先用截留分子量为3000000Da的超滤膜除去蛋白质等大分子物质，再用截留分子量为5000Da的超滤膜除去无机盐、氨基酸、小分子色素等小分子杂质，同时除去滤液中的水份浓縮，再醇沉制备猕猴桃根多糖，与现有技术相比，最大限度的分离除去了小分子与大分子杂质、显著提高了猕猴桃根多糖的得率与纯度，药效明显优于现有技术制备的猕猴桃根多糖； (2)采用本专利技术制备猕猴桃根多糖，大大节约了乙醇用量，降低了成本； (3)采用本专利技术制备猕猴桃根多糖，大大减少了乙醇用量、且不需要使用乙醚，提高了生产安全性。具体实施例方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于 此 实施例1 :猴桃根粗多糖提取物活性部位的确定 取干燥猕猴桃根饮片5000g，加10倍质量水，加热回流提取3次、每次2小时，合并 提取液，高速离心(15000r/m本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猕猴桃根多糖提取物的制备方法，其特征在于所述方法包括：取干燥猕猴桃根（Ｒａｄｉｘ　Ａｃｔｉｎｉｄｉａ　Ｃｈｉｎｅｎｓｉｓ）以水加热回流提取，提取液离心除去不溶物，取上清液过０．２～０．８μｍ孔径的微孔滤膜，滤液用截留分子量为３００００００Ｄａ的膜超滤，超滤液用截留分子量５０００Ｄａ的膜超滤，浓缩至所得浓缩液中生药材含量为０．１～５ｇ／ｍＬ，浓缩液加入８５～９５％乙醇至乙醇体积浓度为５０～９０％，静置醇沉，离心，取沉淀洗涤后在６０～８０℃真空干燥，得到猕猴桃根粗多糖。

【技术特征摘要】
一种猕猴桃根多糖提取物的制备方法，其特征在于所述方法包括取干燥猕猴桃根(Radix Actinidia Chinensis)以水加热回流提取，提取液离心除去不溶物，取上清液过0.2～0.8μm孔径的微孔滤膜，滤液用截留分子量为3000000Da的膜超滤，超滤液用截留分子量5000Da的膜超滤，浓缩至所得浓缩液中生药材含量为0.1～5g/mL，浓缩液加入85～95％乙醇至乙醇体积浓度为50～90％，静置醇沉，离心，取沉淀洗涤后在60～80℃真空干燥，得到猕猴桃根粗多糖。2. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述方法还包括猕猴桃根粗多糖纯化步骤(1) 取猕猴桃根粗多糖，每g加蒸馏水50 200ml配制成水溶液，水溶液脱色，过滤，取 滤液进行下一步纯化操作；(2) 步骤(1)滤液上大孔吸附树脂柱或DEAE纤维素柱，以NaCl溶液洗脱，洗脱液采用 截留分子量为1000 5000Da的超滤膜洗滤1 3次，除盐并浓縮，得浓縮液；(3) 浓縮液干燥即得猕猴桃根多糖。3. 如权利要求2所述的方法，其特征在于所述步骤(2)联用大孔吸附树脂柱和DEAE纤 维素柱纯化进行猕猴桃根粗多糖的纯化。4. 如权利要求2或3所述的方法，其特征在于所述大孔吸附树脂的型号为下列之一 AB-8型、MG-l型、LSA-5B型、X_5型、H107型、S_8型、D900型、HPSIP1300型、SIP1400型、 NKA-9型、DM130型或D3520型；所述DEAE纤维素为DEAE-32或DEAE_52。5. 如权利要求1所述的方法，其特征在于所述的方法按如下步骤进行取干燥猕猴桃 根，加入质量为猕猴桃根质量6 30倍的水，加热回流...

【专利技术属性】
技术研发人员：石森林，李昌煜，葛卫红，吴瑾瑾，夏聪华，杨悦，王丽丽，
申请(专利权)人：浙江中医药大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]