【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及光学探针，尤其涉及一种果糖-1,6-二磷酸光学探针及其制备方法和应用。
技术介绍
1、果糖-1,6-二磷酸(fbp)是细胞内天然存在的一种化合物,是细胞在糖酵解途径中产生的一个重要中间产物,在细胞中通过调节糖代谢中若干酶的活性产生药理作用。
2、果糖-1,6-二磷酸是糖酵解途径、糖异生过程中的重要代谢物，由6-磷酸果糖在磷酸果糖激酶的催化下产生，之后在醛缩酶的作用下生成磷酸二羟丙酮和3-磷酸甘油醛，最终生成丙酮酸进入三羧酸循环途径。除此之外，果糖-1,6-二磷酸调控多种代谢途径中多种酶的活性。
3、由于其在代谢途径中的重要作用，果糖-1,6-二磷酸被用于治疗代谢相关、呼吸系统相关疾病，并取得了良好的疗效。比如生物体内糖代谢异常时引起atp的含量的降低进而导致血红蛋白的携氧能力下降，造成代谢紊乱产生疾病，而果糖-1,6-二磷酸能促使细胞体内糖的分解，治疗相关疾病；在呼吸系统疾病方面,果糖-1,6-二磷酸通过促进细胞内磷酸果糖激酶的分解来提升生物体内磷酸池的含量进而提升肺部平滑肌的舒张能力，实现受损细胞的修复。
4、目前常见果糖-1,6-二磷酸的检测方法主要有色谱法(ma b等.european journalof pharmacology,2013,718(1-3),524-532)、酶法(iwamoto s等.applied andenvironmental microbiology,2007,73(17),5676-5678)、和显色法(wang c等.journalof bi
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供在细胞内、外实时定位、高通量、定量检测果糖-1,6-二磷酸的探针和方法。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术第一方面提供一种果糖-1,6-二磷酸结合蛋白变体，其：
4、(1)具有seq id no:1所示的序列并且在选自以下的1个、2个或3个、4个、5个或更多个位点具有突变：t148、r175、g176、g177、l178、e180、d181、v182、k183、n184、q185、f271，所述突变包括氨基酸的修饰、取代或缺失，
5、(2)是(1)的具有第88-340位氨基酸的截短变体，或
6、(3)是与(1)或(2)的序列具有至少70％序列相同性并具有(1)所述突变并保留对果糖-1,6-二磷酸结合能力的序列。
7、在一个或多个实施方案中，所述突变的位点选自以下任一组中的1个、2个或3个、4个、5个：(a)t148、r175、g176、g177、l178、d181、v182、k183、n184、q185，(b)g177、l178、e180、d181、v182、n184、q185、f271。
8、在一个或多个实施方案中，所述突变包括选自以下任一组的位点处的突变：(1)g177和l178，(5)d181和v182，(6)e180和d181，(7)n184和q185；或者，所述突变包含选自以下任一组的位点处的突变：(1)g177、l178，(2)g177、l178和q185，(3)g177、l178和t148，(4)g177、l178和f271，(5)d181、v182，(6)e180、d181，(7)n184、q185，(8)n184、q185、d181、v182、g177，(9)n184、q185、g177，(10)n184、q185、d181、v182。
9、在一个或多个实施方案中，t148突变为s。在一个或多个实施方案中，g177突变为a、i、l、m或n，优选突变为l或m。在一个或多个实施方案中，l178突变为y、f或n，优选突变为n。在一个或多个实施方案中，e180突变为g。在一个或多个实施方案中，d181突变为f、l或e，优选突变为e。在一个或多个实施方案中，v182突变为f、l或g，优选突变为g。在一个或多个实施方案中，n184突变为v。在一个或多个实施方案中，q185突变为s、a、t、d或p。在一个或多个实施方案中，f271突变为y。
10、在一个或多个实施方案中，所述突变包含选自以下的一个或多个：g177l、d181e、v182g、n184v、q185a。
11、在一个或多个实施方案中，所述突变包含选自以下任一组的突变：(1)g177a和l178y，(2)g177i和l178f，(3)g177l和l178y，(4)g177m和l178n，(5)g177n和l178y，(6)g177m、l178n和q185s，(7)g177m、l178n和q185a，(8)g177m、l178n和q185t，(9)g177m、l178n和q185d，(10)g177、l178和t148s，(11)g177、l178和f271y，(12)d181f和v182f，(13)d181l和v182l，(14)e180g和d181g，(15)n184v和q185p，(16)n184v、q185p、d181e、v182g和g177l，(17)n184v、q185p和g177l，(18)n184v、q185p、d181e和v182g。
12、本专利技术另一方面提供一种果糖-1,6-二磷酸光学探针，包含果糖-1,6-二磷酸敏感多肽和光学活性多肽，其中光学活性多肽位于果糖-1,6-二磷酸敏感多肽的序列内。果糖-1,6-二磷酸敏感多肽被光学活性多肽分为第一部分和第二部分。
13、在一个或多个实施方案中，所述果糖-1,6-二磷酸光学探针，包括果糖-1,6-二磷酸敏感多肽b和光学活性多肽a，其中光学活性多肽a位于果糖-1,6-二磷酸敏感多肽b的序列内，将果糖-1,6-二磷酸敏感多肽b分为第一部分b1和第二部分b2，形成b1-a-b2式的探针结构。
14、在一个或多个实施方案中，光学活性多肽位于果糖-1,6-二磷酸敏感多肽的残基174-185和/或201-208之间，编号对应于果糖-1,6-二磷酸敏感多肽的全长。优选地，光学活性多肽位于果糖-1,6-二磷酸敏感多肽的选自下述位点中的任一个或多个：174/175，174/176，174/177，174/178，1本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种果糖-1,6-二磷酸结合蛋白变体，其：
2.一种果糖-1,6-二磷酸光学探针，包含果糖-1,6-二磷酸敏感多肽和光学活性多肽，其中，光学活性多肽位于果糖-1,6-二磷酸敏感多肽的序列内，所述果糖-1,6-二磷酸敏感多肽是果糖-1,6-二磷酸结合蛋白或其功能变体，所述光学活性多肽是荧光蛋白或其功能变体；其中，果糖-1,6-二磷酸结合蛋白的功能变体在与光学活性多肽连接处的7个氨基酸内具有突变，荧光蛋白的功能变体在与光学活性多肽连接处的3个氨基酸内具有突变。
3.如权利要求1所述的光学探针，其中，果糖-1,6-二磷酸结合蛋白具有SEQ ID NO:1所示的序列或其具有第88-340位氨基酸的截短体，或与它们有至少70％序列相同性并保留对果糖-1,6-二磷酸敏感性的序列。
4.如权利要求1所述的光学探针，其中，光学活性多肽位于果糖-1,6-二磷酸敏感多肽的残基174-185和/或201-208之间，
5.一种核酸分子，其包含：
6.包含权利要求5所述的核酸分子的核酸构建物，
7.一种宿主细胞，所述宿主细胞：<...
【技术特征摘要】
1.一种果糖-1,6-二磷酸结合蛋白变体，其：
2.一种果糖-1,6-二磷酸光学探针，包含果糖-1,6-二磷酸敏感多肽和光学活性多肽，其中，光学活性多肽位于果糖-1,6-二磷酸敏感多肽的序列内，所述果糖-1,6-二磷酸敏感多肽是果糖-1,6-二磷酸结合蛋白或其功能变体，所述光学活性多肽是荧光蛋白或其功能变体；其中，果糖-1,6-二磷酸结合蛋白的功能变体在与光学活性多肽连接处的7个氨基酸内具有突变，荧光蛋白的功能变体在与光学活性多肽连接处的3个氨基酸内具有突变。
3.如权利要求1所述的光学探针，其中，果糖-1,6-二磷酸结合蛋白具有seq id no:1所示的序列或其具有第88-340位氨基酸的截短体，或与它们有至少70％序列相同性并保留对果糖-1,6-二磷酸敏感性的序列。
...【专利技术属性】
技术研发人员：杨弋，赵玉政，姚静，张莉娟，姜坤，邹叶君，李写，王傲雪，
申请(专利权)人：华东理工大学，
类型：发明
国别省市：
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