一种用Ｚｅｏｃｉｎ筛选千年桐ＳＡＤ基因的产油酵母表达载体及构建方法技术

本发明专利技术主要涉及一种用Ｚｅｏｃｉｎ筛选千年桐ＳＡＤ基因的产油酵母表达载体，该载体以ｐＣＡＭＢＩＡ２３００为基本骨架，产油酵母表达载体含有千年桐ＳＡＤ基因，或同时含有Ｓｈ　ｂｌｅ基因；其构建方法步骤如下：１．千年桐ＳＡＤ基因ｃＤＮＡ编码区全长序列获得；２．ＳＡＤ正义表达载体构建；３．Ｚｅｏｃｉｎ抗性标记基因Ｓｈ　ｂｌｅ的克隆；４、酵母表达载体构建及农杆菌转化。本发明专利技术有益的效果：本发明专利技术将从千年桐种子总ＲＮＡ中分离的ＳＡＤ基因构建到酵母表达载体ｐＣＡＭＢＩＡ２３００上，为产油酵母油酸含量的提高提供基因转移供体。本发明专利技术根据毕赤酵母表达载体ｐＰＩＣＺ　Ｂ设计引物分离了Ｚｅｏｃｉｎ抗性基因Ｓｈ　ｂｌｅ，与上述重组载体连接组成新载体，大大简化了产油酵母遗传转化过程，对于筛选具有Ｚｅｏｃｉｎ抗性的转ＳＡＤ基因的产油酵母具有重要作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程领域，主要涉及一种用Zeocin筛选千年桐基因的产油酵母表达 载体及构建方法，具体涉及酵母表达载体重组，新建表达载体产物可用博来霉素筛选转千年 桐基因的产油酵母转化子。
技术介绍
为应对愈演愈烈的石油危机，世界各国都在积极制定和实施新的能源发展战略，希望通 过各种可能途径寻找到新的石油替代品，生物柴油便是其中之一。目前，生产生物柴油的原 料主要依赖于油料作物、木本油料人工林、动物脂肪及废弃油脂等。从油料树木中提取油脂， 具有占用耕地面积、周期长、成本高等一系列制约因素。发展动物油脂也同样面临一系列制 约因素。因此，开辟新的植物源油脂生产途径，特别是工业化生产途径对满足不断增长的生 物柴油的需求具有重要意义。研究发现，除高等植物和动物能生产油脂外，低等的微生物也能产生油脂，大部分微生 物油脂的脂肪酸组成和一般植物油相似。通常情况下微生物细胞仅含油2~3%，但在适宜条件 下，某些微生物产生并贮存的油脂占其生物总量的20%以上，在已知细菌、酵母、霉菌和藻 类中都发现有产油脂的菌株。利用微生物作为生物反应器生产脂肪酸，为生物柴油原料生产 开辟了一条新的技术途径。微生物本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用Ｚｅｏｃｉｎ筛选千年桐ＳＡＤ基因的产油酵母表达载体，其特征在于：该载体以ｐＣＡＭＢＩＡ２３００为基本骨架，产油酵母表达载体含有千年桐ＳＡＤ基因。

【技术特征摘要】
1、一种用Zeocin筛选千年桐SAD基因的产油酵母表达载体，其特征在于该载体以pCAMBIA2300为基本骨架，产油酵母表达载体含有千年桐SAD基因。2、 根据权利要求l所述的用Zeocin筛选千年桐&4D基因的产油酵母表达载体，其特征 在于所述产油酵母表达载体同时含有幼We基因。3、 一种构建如权利要求1所一种用Zeocin筛选千年桐5L4基因的产油酵母表达载体的方法，其特征在于该方法包括步骤如下(1) 千年桐基因cDNA编码区全长序列获得根据在GenBank上登录的基因核苷酸和氨基酸序列设计兼并引物，以千年桐种子总 RNA为模板，经RT-PCR扩增，获得&4D全长cDNA,电泳回收目的片段，克隆到pGEM T-Easy 载体，转化大肠杆菌DH5a，测序，命名该载体为pGEM-T-Vesad;(2) S4I)正义表达载体构建根据测序结果进行酶切位点分析，结合表达载体pCAMBIA2300的限制性酶切位点图谱， 选用SalI、 Kpnl两个位置来作为插入目的片段的酶切位点；设计带& /1、《pI酶切位点的 引物，以克隆载...

【专利技术属性】
技术研发人员：范正琪，李纪元，陈东亮，范妙华，田敏，李辛雷，
申请(专利权)人：中国林业科学研究院亚热带林业研究所，
类型：发明
国别省市：33[中国|浙江]